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【摘要】目的：优选五味子中原儿茶酸的最佳提取工艺。方法：采用正交实验法考察各因素对提取工艺的影响，以原儿茶酸的提取含量为考察指标，采用高效液相色谱法(HPLC)分析检测。结果：最佳提取工艺条件为乙醇浓度40%，提取50min，固液比1：60。结论：最佳优选工艺条件简便易行，重现性好。
【关键词】五味子；原儿茶酸；超声波；提取工艺
【中图分类号】R931.5【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)08-0011-02
五味子为落叶木质藤本植物，其药材主要含有挥发性成分、木脂素类及酸性成分。有文献报道，五味子中含有的原儿茶酸[1]，能降低心肌耗氧量，拮抗肾上腺素所致的耗氧量增加，提高心肌耐氧能力，减慢心律，改善缺血中心区的乳酸和K+的产生，显著缩小心肌梗塞范围[2-3]。
1材料
1.1主要仪器LC-2010AHT高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器(日本岛津公司)，KQ-50型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1.2 试剂五味子(产地四川广元青川)；原儿茶酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110809-200503)；甲醇为色谱纯；水为三次蒸馏水；其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1五味子中原儿茶酸含量的测定
2.1.1色谱条件色谱柱：日本岛津公司Shim-pack VP-ODS(150mm×4.6 mm，5.0(m)，流动相：甲醇-水-冰醋酸(6:92.8:1.2)，流速：1.0mL/min，紫外检测波长：295nm，柱温：30℃。理论塔板数按原儿茶酸峰计算大约为5000，采用外标法峰面积定量，色谱图如图1。
2.1.2 供试品溶液的制备将五味子在60℃的烘箱中干燥12小时后研细过筛，精密称取粉碎的五味子粉末0.5g，按L16 (43)[4]正交试验表所列进行实验，加入乙醇，两滴冰醋酸，称定重量，超声波提取后，待溶液冷却到室温后，再称定重量，用相应浓度的乙醇补足减失的重量，摇匀。用0.45(m的滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。
2.1.3对照品溶液的制备精密称取16.0mg原儿茶酸对照品，用甲醇定容于50mL容量瓶中，摇匀，制得320μg/mL的原儿茶酸贮备液，取5.00mL于50mL的容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，制得32.0μg.mL-1的原儿茶酸的工作液。
2.1.4标准曲线的绘制精密吸取原儿茶酸的工作液，置10mL容量瓶中，用甲醇定容，分别配制成3.20，6.40，19.2，32.0，51.2，64.0，96.0μg/mL原儿茶酸标准液。分别自动进样5(L，记录色谱图，分别测定峰面积，以原儿茶酸峰面积(S)对进样浓度(μg/mL))作线性回归，得回归方程为s＝－1548＋9.181×103（r＝0.9999），说明浓度在3.2～96μg/mL范围内，浓度与峰面积有良好的线性关系。
2.1.5精密度试验自动进样32.0μg/mL原儿茶酸对照品标准液5(L，重复6次，按上述色谱条件进行测定，RSD为0.72%，表明仪器精密度良好。
2.1.6加样回收率试验精密称取同批号药材约0.5g，准确加入原儿茶酸对照品标准液(32.0μg/mL)2.0mL，按“2.1.3”制备5组供试品溶液，自动进样5μL，按样品含量测定方法测定，计算回收率。结果，平均回收率为100.3�，RSD为1.2�。
2.1.7样品含量测定取待测样品溶液，自动进样5μL，按照上述色谱条件下进样测定。重复进样3次，取平均值，根据线性回归方程，用外标法计算样品中原儿茶酸的含量。
2.2正交试验设计
2.2.1超声波辅助正交试验以加入乙醇浓度(A)，固液比(B)，超声时间(C)作为考察因素，以原儿茶酸在五味子中的含量为指标，选用L16�(43)正交法进行试验,试验因素水平见表1。
2.2.2 正交试验的结果及分析按照L16�(43)正交表安排试验，以原儿茶酸在五味子中的含量为指标，直视法分析结果详见表2，表3。
从表2中数据直观分析，不同因素水平综合评分A2>A4>A3>A1,B4>B2>B3>B1,C4>C2>C3>C1, 4个因素的极差大小顺序为RB>RA>RC,，固液比对原儿茶酸含量影响最大，乙醇浓度影响较小，超声提取时间影响最小。
由表3方差分析结果可知，因素B对原儿茶酸提取有重要影响，影响因素达到显著差异水平，因素A、C则无显著性影响。综合以上因素，确定最佳提取工艺为A2B4C4，即使用的乙醇浓度为40%，固液比1:60，超声波提取时间为50min。
2.3验证试验按正交试验结果的最佳提取工艺方案重复试验5次，结果原儿茶酸的平均含量为0.623mg/g，RSD为1.6�，表明该工艺重现性良好。
3讨论
五味子中原儿茶酸的最佳提取工艺参数：提取的乙醇浓度40%，固液比1：60，超声波辅助提取时间50min。该提取工艺稳定可靠，精密度高，操作简便，可用于五味子中原儿茶酸的提取和五味子的质量控制，适合于厂家的常规提取和测定应用。
参考文献
[1]戴好富,周俊,彭再刚,等.北五味子的水溶性化学成分[J].天然产物研究与开发,2001,13(1):24-26.
[2]饶曼人,刘广余,高长忠,等.原儿茶酸对缺血心肌代谢及心肌梗塞范围的影响[J].中国药理学报,1988,9(1):27.
[3]张遵仪,韩鹏飞,梁满达,等.原儿茶酸衍生物的化学结构与冠脉流量、心肌耗氧量关系的探讨[J].药学学报,1980,l5(11):641-643.
[4]李胜华,伍贤进,郁建平,等.超声波提取翻白草中熊果酸工艺优化研究[J].食品科学, 2007,28(8):160-163.
[5]芦翠凤,邱永军.五味子乙素提取工艺研究[J].哈尔滨商业大学学报(自然科学版),2005,21(2):141-142.
(收稿日期：2009.02.11)
