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[摘要] 目的:建立HPLC法测定洛伐他汀含量的不确定度评估的方法。方法:通过建立HPLC含量测定法的数学模型,找出影响不确定度的因素,并对各个不确定度的分量进行评估。结果:计算各分量的不确定度,由此计算合成不确定度,最终给出测定结果的扩展不确定度和置信水平。结论:建立的不确定度评估方法可用于HPLC法测定洛伐他汀含量的不确定度评估。
[关键词] 高效液相色谱法;洛伐他汀;不确定度;含量
[中图分类号] R927.2 [文献标识码]C [文章编号]1674-4721(2010)05(a)-048-02
Evaluation of uncertainty for the determination of lovastatin by HPLC
SONG Gengshen, JIANG Jianguo, GAO Yanxia, ZHANG Xiru, YAN Kai, SUN Ting
(Hebei Provincial Institute for Drug Control,Shijiazhuang 050011,China)
[Abstract] Objective:To establish a method of uncertainty evaluation for the determination of Lovastatin by HPLC.Methods: The calculation formula for the uncertainty was deduced in the procedure of assy for lovastatin.Results:Each component of uncertainty was calculated by analyzing the variable parameters among the procedures.The combined uncertainty and confidence levelwere finally obtained by synthesizing the uncertainties of various component variables.Conclusion:This method is appropriate to be used in the uncertainty evaluation for the determination of Lovastatin by HPLC.
[Key words] HPLC; Lovastatin; Uncertainty; Assay
洛伐他汀(Lovastatin)又名美降脂,系降血脂药。临床用于降低血清总胆固醇、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和三酰甘油,并能升高高密度脂蛋白。含量测定是药品质量控制中的重要内容,为了使测量数据的处理、测量结果的表达以及测量结果的质量评定等方面更准确、更科学,根据中国实验室国家认可委员会对认可实验室在测量不确定度方面的要求,本文对HPLC法测定洛伐他汀含量的不确定度进行分析,找出影响不确定度的因素,并对各个不确定度分量进行评估,最终给出测量结果的置信区间和置信水平,建立适用于评估HPLC法测定含量的不确定度的方法,从而提高对含量测定数据分析和测定结果的准确性的认识。这有助于在药品检验工作中做好仪器的维护保养、严格按仪器标准操作规程操作仪器、消除其他不确定因素。
1 仪器与试药
Agilent 1100型高效液相色谱仪,Sartorius BP 211D型电子分析天平。乙腈为色谱纯,磷酸为分析纯,洛伐他汀对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号:100600-200502,纯度:100.0%),洛伐他汀由重庆大新药业股份有限公司提供(批号:080308,含量:100.0%)。
2 方法与结果
2.1 测定法(中国药典2010年版拟定方法[1])
按照高效液相色谱法(中国药典2005版附录VD)测定。
色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.01%磷酸(60∶40)为流动相;检测波长238 nm。理论板数按洛伐他汀峰计算应不低于3 000。
测定法:取本品约20 mg,精密称定,置于100 ml量瓶中,加乙腈使其溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取10 μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。另取洛伐他汀对照品适量,同法测定。按外标法以峰面积计算,即可。
2.2 结果
2.2.1 数学模型
含量计算公式为:含量(%)=×100%
A样为样品的峰面积,W对为对照品的称样量,P对为对照品的纯度,A对为对照品的峰面积,W样为样品的称样量,G为干燥失重。
2.2.2 各量值不确定度的识别和分析[2]
2.2.2.1 A样的不确定度UC[A样] Agilent 1100高效液相色谱仪检定证书给出的定量测量重复性RSD=0.1%,查 JJF1059-1999概率分布情况的估计为矩形分布,则引用不确定度=・S,故标准偏差S=,因此有UC[A样]=0.001/=0.000 58。
2.2.2.2 A对的不确定度UC[A对] UC[A对]同UC[A样]=0.000 58。
2.2.2.3 W对称量的不确定度UC[W对] W对的称样量为20.03 mg。称量不确定度来自两个方面:第一,称量变动性,在50 g以内,变动性标准偏差为0.07 mg;第二,天平校正产生的不确定度,按检定证书给出的在95%置信概率时为±0.15 mg,换算成标准偏差为0.15/1.96=0.077 mg。此两项合并得称量的标准偏差为UC[W对]=[(0.07)2+(0.077)2]=0.11mg。
2.2.2.4 P对的不确定度UC[P对] 洛伐他汀对照品纯度为100.0%,纯度标准偏差约为0.5%,按矩形分布,取包含因子k=,洛伐他汀对照品纯度的标准不确定度UC[P对]=0.005/=0.002 9。
2.2.2.5 W样称量的不确定度UC[W样] W样的称样量为20.06 mg。称量不确定度来自两个方面:第一,称量变动性,在50 g以内,变动性标准偏差为0.07 mg;第二,天平校正产生的不确定度,按检定证书给出的在95%置信概率时为±0.15 mg,换算成标准偏差为0.15/1.96=0.077 mg。此两项合并得称量的标准偏差为:U[W]=[(0.07)+(0.077)]=0.11 mg。
2.2.2.6 100 ml容量瓶体积的不确定度UC[V(100 ml)] 其不确定度来源为:第一,100 ml容量瓶体积的不确定度,按河北省计量院给定为±0.006 ml,按均匀分布换算成标准偏差为0.006/=0.003 5 ml;第二,读数的不确定度,重复10次,统计出标准偏差为0.009 9 ml;第三,容量瓶和溶液温度与校正温度不同引起的不确定度,校正温度为25.9℃,使用时温度为26.0℃,相差0.1℃,对水体积膨胀系数为2.1×10-4/℃,则95%置信概率时体积变化的区间为100×0.1×2.1×10-4=0.002 1 ml,转换成标准偏差为0.002 1/1.96=0.001 1 ml。
以上三项合成得出:UC[V(100 ml)]=[(0.003 5)2+(0.009 9)2+(0.001 1)2]=0.011 ml。
2.2.2.7 干燥失重的不确定度UC[G]本品具有引湿性,质量标准中规定在60℃干燥3 h,减失重量不得过0.3%。实际测得干燥失重为0.1%,根据文献报道,标准不确定度UC[G]约为0.000 66[3]。
2.2.3 各量值的合成标准不确定度
见表1。
含量(%)==100.0%。
=[(1.5×10)+(1.5×10)+(5.5×10)+(5.5×10)+(2.9×10)+(1.1×10)+(6.7×10)]=0.008 4。
U[含量(%)]=0.008 4×1.00=0.008 4。
2.2.4 含量(%)的扩展不确定度
实验结果一般用扩展不确定度表示。取包含因子k=2(置信概率为95%),则含量测定扩展不确定度为2×0.008 4=0.016 8=1.7%,含量测定结果可表达为含量范围为100.0%±1.7%(k=2)。
3 讨论
由上述结果可知,在洛伐他汀含量测定的不确定度的有关分量中,W对和W样贡献最大,P对次之,A样和A对最小。这提示在洛伐他汀含量测定的过程中,尤其要关注对照品和样品称量的准确性,以降低该不确定度分量对测定结果不确定度的影响,从而降低测定结果的不确定度。
测量不确定度是在药品定量分析的结果上对分析结果的可信范围的把握。通过不确定度的评定,能够分析出测定过程中影响结果准确性的主要因素,有利于检测结果可信程度和检测质量的提高。测量不确定度与药品检验工作密切相关,它在药品检验中起重要作用。
[参考文献]
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].二部.北京:化学工业出版社,2005:579.
[2]EURACHEM/CITAC GUIDE.量化分析测量不确定度指南[M].北京:中国计量出版社,2003:129.
[3]佘伟鸣.药品检验中测量不确定度的评定[J].中国新药杂志,2003,12(9):775.
(收稿日期:2010-03-30)
