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摘要：目的：建立高效液相色谱法测定山楂合剂中枸橼酸的含量。方法：采用Agilent C18色谱柱(ZORBAX SB－C18 4.6mm×250mm，5μm)；流动相为0.5％NH4H2PO4水溶液(用磷酸调节pH至2.8)；检测波长为210nm，流速为1.0mL／min，柱温为25℃。结果：枸橼酸进样量在0.058～29.0μg(r=0.99999)范围内与峰面积线性关系良好，平均加样回收率为99.29％，RSD=0.56％(n=9)。结论：本法简便、快速、专属性强、重现性好；可作为山楂合剂的质量控制方法。
关键词：枸橼酸；高效液相色谱法；山楂合剂；含量测定
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1007－2349(2008)03－0043－02
山楂合剂是由山楂、乌梅、陈皮等药制成，具有消食健胃、理气健脾、安蛔的功效。质量标准中没有规定含量测定方法。本文根据《中国药典》2005年版一部“山楂”和“乌梅”项下选择枸橼酸为质量控制指标，采用HPLC法测定山楂与乌梅的主要成分――枸橼酸的含量。获得满意的结果。
1 仪器与药品
高效液相色谱仪(美国Agilent 1100系列仪)。包括自动进样装置、VWD可变紫外检测器、柱温箱等；METTLERAE240型电子分析天平。除高效液相色谱检测所用试剂为色谱纯外，其他试剂均为分析纯。枸橼酸对照品(CHEMSERVICE Lot：281－76A，纯度99％，含1分子的结晶水[C6H8O7・H2O]，分子量为：210)；山楂合剂由本院制剂室配制(批号070523、070718、070722)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent C18色谱柱(Z()RBAX SB－C18 4.6mm×250mm，5pm)；流动相：0.5％NH4H2PO4水溶液(用磷酸调节pH至2.8)；流速：1.0mL／min；柱温：25℃；检测波长：210nm；进样量：5μl。理论板数按枸橼酸峰计算为5000。
2.2 溶液的制备 精密称取枸橼酸对照品64.08mg(实际含量＝64.8×99％×192÷210=58.0mg)，置10mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1mL中含枸橼酸5.8mg的溶液(贮备液)，分别精密吸取溶液(贮备液)①0.01mL、②0.05mL、③0.1mL、④0.5mL、⑤1mL、⑥5mL；分别置5mL量瓶中，加水稀释至刻度，分别得每1mL含①0.0116mg、②0.058mg、③0.116mg、④0.58mg、⑤1.16mg、⑥5.8mg的对照品溶液。取山楂合剂5mL，置25mL量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2.3 方法学考察
2.3.1 标准曲线和线性范围 精密吸取枸橼酸对照品溶液①、②、③、④、⑤、⑥各5μL，分别注入高效液相色谱仪测定。以枸橼酸对照品含量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，直线几乎通过原点，所以采用外标一点法进行含量测定。线性回归方程为Y=87.67X+5.45，r=0.99999，线性范围为O.058～29.0μg。
2.3.2 精密度试验：取同一枸橼酸对照品溶液④5μl，注入液相色谱仪，连续测定6次，结果峰面积积分值分别为：229.7922，225.4753，227.4164，228.3199，227.5747，225.7234；积分值平均为：227.38，RSD＝0.71％。结果表明仪器精密度较好。
2.3.3 稳定性试验 取同一供试品溶液(批号为070523)各5μl，分别于0，2，5，10，15，20，24h注入液相色谱仪测定，结果供试品溶液峰面积积分值的RSD＝1.2％，表明在24h内对照品和供试品的峰面积积分值稳定，说明测定溶液配制好后，放置24h内测定均可。
2.3.4 重现性试验 取同一批号的山楂合剂(批号：070523)，按供试品溶液的制备方法重复操作测定6次，结果平均含量为3.26mg／mL，RSD=1.16％。
2.3.5 回收率试验 采用加样回收法，取已知含量的同一批号(070523)山楂合剂(含量为：3.26mg／mL)适量，分别精密加入枸橼酸对照品适量，按供试品溶液的制备及测定法操作。结果见表1。
2.3.6 阴性干扰试验 照上述条件测定山楂合剂空白(不含山楂、乌梅药材制成的阴性合剂)制剂，结果在枸橼酸色谱峰相对应的保留时间处无吸收峰，说明处方中其它药味对山楂、乌梅中的枸橼酸测定无干扰。见图1。
2.4 样品含量测定 按供试品溶液的制备及测定法操作，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪测定，外标一点法计算。结果见表2。
3 讨论
枸橼酸是山楂与乌梅中主要的活性成分之一，也是山楂合剂治疗疾病的重要成分，故选择该物质作为考察指标。用枸橼酸水溶液(1mg／mL)在190～370nm波长范围内进行扫描测定，结果在210nm波长处，有肩峰，所以选择210nm为检测波长。本法简便、快速、专属性强、重现性好，可作为山楂合剂的质量控制方法。
