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[摘要] 目的: 建立石杉碱甲缓释微丸含量测定方法。方法:采用反相高效液相色谱法,以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相,乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾(20:80,含0.02 mol/L三乙醇胺)为流动相;检测波长:312 nm;流速:1 ml/min;进样量:20 μl。结果:利用选定的色谱条件,可使石杉碱甲与其酸、碱分解产物、热分解产物、石杉碱乙等杂质达到有效分离。石杉碱甲的回收率为99.8%。在浓度为5.0～15.0 μg/ml范围内呈良好的线性关系。回归方程为:A=2 022.96+16 192.5C,r=0.999 1。结论:本方法操作简便,准确,重现性好,为该制剂的含量测定提供了依据。
[关键词] 石杉碱甲;微丸;高效液相色谱法;含量
[中图分类号]R286[文献标识码]B [文章编号]1674-4721(2009)07(b)-139-02
石杉碱甲是从石杉科植物蛇足石杉中分离出的生物碱之一。临床主要应用于治疗老年性痴呆症。石杉碱甲片剂规格为50 mg/ 片,剂量为1～2 片/次,每天3 次。为了提高患者的顺应性,更好地发挥药效,笔者将石杉碱甲制成1天服用1次的缓释微丸,使药物作用时间延长,疗效好,患者顺应性提高。本文在文献基础上,建立了石杉碱甲的RP-HPLC含量测定方法,以方便制剂的研究和质量的控制。
1 仪器与试药
HR-120电子天平(日本岛津);TU-1901紫外可见分光光度计(北京普析);高效液相色谱仪,日本岛津LC-10ATVP;石杉碱甲原料(含量:99.5%;浙江温岭制药厂),石杉碱甲精制品(含量:99.7%;浙江温岭制药厂),石杉碱甲缓释微丸(自制);试验中所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 检测波长的确定
称取石杉碱甲对照品适量,用甲醇配置成每1毫升中含10 μg的溶液,按紫外分光光度法(《中国药典》2000版二部附录IVA)在200～400 nm波长范围内,绘制紫外光谱,石杉碱甲在231 nm和312 nm处有最大吸收。空白辅料可能在231 nm波长有干扰,所以将测定波长确定为312 nm。
2.2 色谱条件及系统适用性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.05 mol/L 磷酸二氢钾(20∶80含0.02 mol/L三乙醇胺)为流动相;检测波长:312 nm;流速:l ml/min;进样量:20 μl。理论塔板数按石杉碱甲计应不低于1 500。
2.3 准确度试验
石杉碱甲对照品溶液的配制:精密称取石杉碱甲对照品约10 mg,置10 ml量瓶中,以乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀。
按处方比例精密称取石杉碱甲对照品溶液及辅料分别配制成每包约含石杉碱甲0.08、0.1、0.12 mg的三种样品各3份,按含量测定项下所述方法测定回收率。结果见表1。
2.4 线性关系试验
精密称取石杉碱甲对照品,以流动相配制成每毫升约含5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 μg的溶液,分别精密量取上述各溶液20 μl注入液相色谱仪,记录色谱图,将测定结果以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标进行线性回归,计算回归方程为:A=2 022.96+16 192.5C,r=0.999 1。
2.5 精密度试验结果
可取线性关系试验中,中间浓度的溶液,重复进样5次,记录峰面积,结果石衫碱甲峰面积的RSD[2]为1.26%,表明方法的精密度良好[1]。
2.6方法的专属性试验
2.6.1取石杉碱甲约10 mg,加0.5 mol/L硫酸10 ml,加热煮沸约10 min,使分解再取该溶液1 ml以流动相稀释成每毫升约含20 μg的溶液。按上述色谱条件测定。
2.6.2取石杉碱甲约10 mg,加0. 5 mol/L氢氧化钠10 ml,加热煮沸约10 min,使分解再取该溶液1 ml以流动相稀释成每毫升约含20 μg的溶液。按上述色谱条件测定[2-3]。
2.6.3取石杉碱甲约10 mg,直火加热使分解,再取该破坏后的残渣以流动相稀释成每毫升约含20 μg的溶液。按上述色谱条件测定。
试验结果表明,石杉碱甲在用上述条件破坏后产生的杂质,可在本色谱系统得到较好的分离,说明本色谱系统适用于石杉碱甲缓释微丸的质量控制。
2.7 测定法
取本品10个包装,倾出内容物,研细。精密称取该细粉适量(约相当于石杉碱甲0.1 mg),置锥形瓶中,精密加入流动相10 ml使溶解摇匀,滤过,滤液作为供试液。另精密称取105℃干燥至恒重的石杉碱甲对照品10 mg,以流动相稀释成每1毫升含10 μg的溶液,作为对照液。分别精密量取供试液和对照液各20 μl,注入液相色谱仪中,按上述条件测定,外标法计算,即得。
3 讨论
为了使主成分与相关的杂质达到有效分离,我们主要调整了流动相中强冲洗组分乙腈的比例:如20%、25%、30%,观察石杉碱的分离情况。结果表明增大乙腈的比例石杉碱甲的保留时间由原来的约10 min缩小至约5 min。这样将不利于与相关的杂质的分离[4]。而将乙腈的比例定为20∶80则比较合适。
[参考文献]
[1]刘小林,程春荣,曹威,等.石杉碱甲的药理作用与临床应用研究进展[J].医药导报,2006,25(2):90-95.
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[3]孙建绪,翁骏,高永良.高效液相色谱法测定石杉碱甲片的含量[J].解放军药学杂志,2002,18(4):52-53.
[4]赵志刚,哈伯因.石杉碱甲片[J].中国新药杂志,1998,7(3):193.
(收稿日期:2009-06-01)
