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[摘要] 目的:探讨刺五加对重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤大鼠肺组织中核转录因子-κB(NF-κB)的作用。方法:经胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠制作SAP模型;分3个时间点处死大鼠,取肺组织检测NF-κB水平;光镜观察大鼠肺组织病理变化。结果:刺五加能减轻SAP大鼠肺组织的病理性损伤,降低肺组织中NF-κB水平。结论:刺五加能抑制NF-κB的表达,对SAP肺损伤有保护作用。
[关键词] 刺五加;胰腺炎;肺损伤;核转录因子-κB
[中图分类号] R-33 [文献标识码]A [文章编号]1674-4721(2010)03(a)-013-02
The effect of acanthopanax senticosus on nuclear factor-κB in rats with lung injury associated with severe acute pancreatitis
CHEN Bo
(Laboratory of Physiology Science, Guangdong Medical College, Dongguan 523808,China)
[Abstract] Objective: To explore the effects of acanthopanax senticosus on nuclear factor-κB(NF-κB) in rats with lung injury associated with severe acute pancreatitis(SAP). Methods: The model of SAP was performed by injecting 5% sodium taurocholate. Three,six and twelve hours after model establishmeng, the rats were sacrificed in the respective group. Morphologic changes of lung was observed under light microscopy. Results: In acanthopanax senticosus group, lung injury was markedly reducesd,the NF-κB level in lung tissues were decreased significantly. Conclusion: Acanthopanax senticosus can inhibit the expression of NF-κB in lung tissues of rats with SAP, prevent and treat the lung injury by SAP.
[Key words] Acanthopanax senticosus; Pancreatitis; Lung injury; Nuclear factor-κB
重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是一种既有胰腺本身病变,又极易并发远隔脏器损害的急腹症。其中肺损伤是SAP早期常见的并发症和死亡原因,其死亡率高达50%[1]。尽管目前关于SAP肺损伤的发病机制还未完全阐明,但近年研究表明,核转录因子-κB(NF-κB)活化及炎症因子的过度表达造成细胞因子网络失衡,导致扳机样细胞因子级联反应,在SAP肺损伤发病过程中可能起重要作用[2]。本研究主要探讨刺五加对SAP肺损伤大鼠肺组织中NF-κB的作用。
1 材料与方法
1.1 材料
健康Wistar大鼠,由广东医学院实验动物中心提供;牛磺胆酸钠为Sigma公司产品;刺五加注射液(acanthopanax senticosus injection,ASI)为黑龙江完达山制药厂生产,批号Z23030810,每支20 ml;RPMI1640培养基、胰蛋白酶为Gibco公司产品;TransAMTM NF-κB p65化学发光ELISA试剂盒购自Active Motif公司;CO2培养箱(美国Forma Scientific);Centrol LB 960型微孔板化学发光检测仪(德国Bethold公司)。
1.2 方法
1.2.1 大鼠SAP模型的建立[3]大鼠术前12 h禁食禁水,以20%氨基甲酸乙酯1 mg/kg腹腔注射麻醉,无菌条件下经腹壁正中切口入腹,除假手术组只翻动胰腺后关腹外,其余两组均在主胰管内逆行插管,注入5%牛磺胆酸钠10 ml/g后结扎主胰管,缝合腹壁。
1.2.2 实验分组及处理Wistar大鼠90只,随机分为假手术组(30只)、模型组(30只)、刺五加组(30只)。假手术组和模型组于造模前3 h分别经股静脉注入生理盐水10 ml/kg,刺五加组在造模前3 h经股静脉注射刺五加10 ml/kg,实验动物分别随机分为3、6、12 h 3组(每组10只)。于3个时间点处死动物,取右肺进行肺泡灌洗,分离收集并纯化肺泡巨噬细胞,提取核蛋白后采用化学发光ELISA法检测NF-κBp65的表达情况,取左肺一部分经10%甲醛固定作病理组织学检查,留取胰腺组织进行组织病理学观察。
1.2.3 肺组织中NF-κB活性测定采用TransAMTM NF-κB p65化学发光ELISA试剂盒检测NF-κB活性。这种试剂盒采用化学发光标记,灵敏度为常规EMSA方法的140倍。具体方法:准确吸取各组巨噬细胞核蛋白提取物1.25 μg,用细胞裂解液稀释到20 μl,加入到包被有NF-κB特异寡核苷酸双链探针的样品孔中,设阳性对照(1.25 μg Hela细胞蛋白提取物,稀释于20 μl细胞裂解液)及空白对照(只含细胞裂解液),于室温振荡1 h(100 rpm/min),洗板3次,加稀释的NF-κB p65一抗(1∶1 000),室温反应1 h(勿振荡),再次洗板3次,加入1∶10 000稀释的二抗,室温反应1 h,洗板4次,用吸水纸吸干水分后,加入化学发光工作液,反应10 min后,经微孔板化学发光检测仪检测RLU(relative light units)值。实验中设置竞争对照孔以示检测的特异性,其余操作同前。
1.3 统计学方法
实验数据以x±s表示,采用SPSS 11.0软件对数据进行统计学处理,P 3 讨论
NF-κB是一种转录调节因子,可调控多种炎性因子基因的转录,在静息状态下,与抑制蛋白家族IκB紧密结合,以无活性状态存在于细胞质中,不具有基因转录作用。在SAP肺损伤的发病过程中涉及的多种炎性细胞因子的释放与NF-κB的激活有关[4]。NF-κB的激活是SAP肺损伤的早期事件,其过度表达可导致多种炎性因子也过度表达。现已证明,多种细胞因子如:TNF-α、IL-1、IL-6的启动子上均有NF-κB的结合位点,因而NF-κB的活化可在很大程度上促进细胞因子的表达[5]。近年来,NF-κB已成为治疗SAP肺损伤的新靶点[6]。
应用NF-κB抑制剂或调节NF-κB活性可明显降低SAP过程中肺组织内的炎性反应[7]。本实验研究显示,ASI有类似的作用,ASI组各时间点的NF-κB的表达明显低于模型组,提示ASI能在一定程度上抑制NF-κB在SAP时肺组织中的表达;且胰腺和肺组织病理损伤程度也明显轻于模型组,表明刺五加注射液对SAP肺损伤具有一定的防治作用。
刺五加注射液(ASI)是从五加科植物刺五加的根皮中提取的,主要成分为刺五加多糖和皂苷,具有抗感染、抗氧化、清除自由基、抑制白细胞急骤增加、抑制血小板及血栓形成、扩张血管、降低血黏度、改善血流动力学指标、改善微循环[8-9]。
本研究结果提示,ASI是一种有效的保护SAP肺损伤的药物,具有很好的临床应用价值。
[参考文献]
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(收稿日期:2010-01-06)
