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[摘要] 目的：分析伊红活体染色联合低渗肿胀试验对于死精子症诊断的价值。方法：对本院收治的38例死精子症患者进行伊红活体染色联合低渗肿胀试验，并对同期在本院进行健康体检的38例有生育史男性进行伊红活体染色联合低渗肿胀试验，对比两组检测结果是否具有差异性。结果：对照组精子头部未染色率与精子尾部肿胀率两项检测数据均显著高于观察组，差异有高度统计学意义（P ＜ 0.01）。结论：伊红活体染色联合低渗肿胀试验对于死精子症的诊断具有科学的指导意义与重要参考价值。
[关键词] 伊红活体染色；低渗肿胀试验；死精子症；诊断价值
[中图分类号] R446 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2012）01（b）-090-02
临床中部分不育患者的不活动精子，被常规的诊断为死精子症，但实际上不活动精子并不一定已经死亡，精子运动能力的缺失与死精子症具有本质性的差别[1]。临床中容易将因运动能力缺失造成不活动精子的特征忽略[2]。为此本院采取伊红活体染色联合低渗肿胀试验进行检测，取得了令人满意的检测效果，现将具体情况报道如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
本次入选资料为本院2009年1月～2010年3月收治的死精子症患者38例，设为观察组；将同期在本院进行健康体检且其妻子目前怀孕24～36周，或者其子女年龄小于12个月的健康男性38例组成对照组。观察组患者年龄为26～41岁，平均（33.67±12.67）岁；对照组健康男性年龄为24～38岁，平均（31.23±10.31）岁。两组基本资料差异无统计学意义（P>0.05），具有统计学可比性。
1.2 方法
1.2.1 标本采集 两组受检者均禁欲2～7 d，以手淫法取得新鲜精液[3]，经液化后依据WHO标准实施精液的常规检测、伊红活体染色、低渗肿胀试验。
1.2.2 检测方法 依据《临床技术操作规范》病理学分册要求配制染液[4]。伊红活体染色，将0.9 g 的氯化钠溶于100 ml的净化水中，制成氯化钠溶液[0.9%（w/v），0.5%（w/v）]：将0.5 g的曙红Y染料充分溶于100 ml的0.9%氯化钠溶液当中制成曙红Y染剂，曙红检测效果更好[5]。操作过程：将精液样本充分混匀后，吸取5 μl精液样本，与5 μl曙红溶液于载玻片上均匀混合，在载玻片的样本上使用移液器头进行搅拌以确保混合均匀。使用22 mm×22 mm的盖玻片加以覆盖，待反应30 s后，用400倍光学显微镜检验制备的样本玻片；使用实验室计数器对染色即死亡细胞与非染色即存活精子数量进行计数。为确保达到可以接受的低样本误差，每张玻片评估精子数为200个，计算出精子头部未染色率。
低渗肿胀（HOS）试验，将0.735 g的二水柠檬酸钠与1.351 g的右旋果糖充分溶于100 ml净化水中并于-20℃的环境下保存。操作过程：使用前先将膨胀液溶解并充分混匀。将1 ml的膨胀液置于37℃的密闭微型离心管之中进行加热5 min。将精液样本混匀，使用移液器吸取100 μl精液样本，加置膨胀液中，并充分混匀。于37℃条件下孵化30分钟，吸取10 μl液体放于载玻片上，以22 mm×22 mm盖玻片加盖，使用400倍光学显微镜对涂片进行检测。采取实验室计数器对未膨胀即死亡与膨胀即存活的精子数量进行计数。每张涂片所计数的精子个数为200个，计算出肿胀率。
1.3 统计学方法
对比两组精子头部未染色率与尾部肿胀率，采取t检验，使用SPSS 18.0软件进行相关数据运算。
2 结果
对照组精子头部未染色率为（78.21±6.40）%，精子尾部肿胀率为（71.55±8.47）%；观察组精子头部未染色率为（39.93±6.14）%，精子尾部肿胀率为（32.36±11.70）%；对照组精子头部未染色率与精子尾部肿胀率均显著高于观察组，差异有高度统计学意义（P ＜ 0.01）。具体数据见表1。
3 讨论
死精子症在男性不育症中属于最为严重的一种疾病，其致病因素十分复杂，发病率约占不育男性总数的8%～10%[6]。死精子症的患者具备生精功能，但因输精管道或者附性腺发生感染，极大的消耗了精子生存所必需的营养物质及微量元素，使精液的酸碱度下降，炎症过程中局部组织的水肿、充血、供氧不足以及血流淤滞等原因导致了精子的不良生存环境进而发生死亡。死亡精子多出现质膜破碎或者消失。精子的运动功能与精子的结构密切相关，只有正常结构的精子才可能具有正常的运动能力。精子的结构大体可分为头、尾两部分。精子的尾部相当于精子的运动装置，决定着精子的运动能力。若精子运动装置发生异常，尤其是精子尾部的轴丝结构出现异常可导致精子运动功能障碍的发生。精子尾部的运动装置异常大多可由染色体异常引发。
伊红染色法是石蜡切片技术中最常见的一种染色法[7]。其配制方法比较固定[8]。伊红活体染色检测可用于衡量精子膜结构的完整性，低渗肿胀试验主要是对精子膜的生理完整性进行评估。死精子的头部膜发生破损，染色液可以通过破损处渗入到细胞内部使细胞染色，而活精子的头部膜无破损发生，染色液无法或者不易渗入使细胞不易染色。
精子尾部低渗肿胀试验主要是精子存活率检测的补充性试验，是观察精子尾端细胞膜完整性与顺应性的一个指标。精子暴露在低渗环境当中时，若精子细胞膜完好，胞膜便可将水泵入至膜内，以使细胞内、外渗透压保持平衡。水的泵入使精子体积与表面积的比例增大，导致胞膜出现膨胀。
本次研究显示伊红活体染色与低渗肿胀试验对于判定死精子的结果是一致的，精子尾部的低渗肿胀试验更侧重于观察精子尾部细胞膜的完整情况，而伊红活体染色可以更直观的观察精子头部细胞膜的情况，因此两种方法的联合应用可有效提高死精子结果判定的准确性。
伊红活体染色联合低渗肿胀试验是一种较为准确的诊断死精子症的检测方法，并且具有经济、便捷的优势。两者联合的检测可对精子标本当中死精子的占比提供准确的诊断依据，因此可对不育的治疗提供科学的参考与帮助。若无运动能力精子的百分比超过50%以上则应考虑对精子膜的完整程度进行检测，活的但无运动能力的精子比率过高则说明精子鞭毛具有结构性缺陷；若精子膜完全受损的精子比率过大则可诊断为死精子症。从本次研究的结果中可以看到，健康男性与死精子症患者的两项检测结果具有显著差异，因此联合应用两项检测对于死精子症的诊断具有科学的指导作用以及十分重要的参考价值。
[参考文献]
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（收稿日期：2011-05-31）
