肾缺血再灌注损伤_缺血后处理在肾缺血再灌注损伤时对HO-1/CO与iNOS/NO系统的影响

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  [摘要]目的:研究缺血后处理在肾缺血再灌注损伤时对HO-1/CO与iNOS/NO系统的影响。方法:SD大鼠36只,随机分为3组(n=12):Ⅰ组为假手术组;Ⅱ组为对照组,双侧肾缺血45min建立缺血/再灌注模型;Ⅲ组为实验组,双侧肾缺血45min后行缺血后处理。观察再灌注24h后肾组织中HO-1和iNOS的表达,血清丙二醛(MDA)的浓度、超氧化物歧化酶(SOD)活性、NO及动脉血中一氧化碳血红蛋白(HbCO)的含量,并进行肾组织光镜病理形态学观察。结果:与Ⅰ组比较,Ⅱ组HO-1和iNOS表达显著增强(p-1麻醉,固定于操作台,经腹中线开腹,分离双肾动、静脉。Ⅰ组仅分离肾动、静脉,45min后缝合切口;Ⅱ组用无创动脉夹夹闭双侧肾动静脉45min后松开,恢复灌流24h,制作肾I/R模型;Ⅲ组于无创动脉夹夹闭双侧肾动静脉45min后再灌注10s停灌注10s,反复3次,恢复灌流23h59min。
  
  1.4 检测指标
  1.4.1 动脉血中一氧化碳血红蛋白(HbCO)水平测定HbCO含量采用双波长分光光度法测定Hb和HbCO最大吸收峰,分别为430nm和420nm,通过解联立方程得出HbCO在血液中的比率,再根据Hb含量计算出HbCO浓度。
  1.4.2 血SOD、MDA检测
  比色法检测血SOD活性、MDA浓度(具体操作按试剂盒说明书进行)。
  1.4.3 NO的测定
  血清NO的检测采用比色法(具体操作按试剂盒说明书进行)。
  1.4.4 HO-1及iNOS的检测 蜡块切片进行免疫组化检测,免疫组化切片应用HIPAS-2000型计算机图像分析软件进行分析(同济千屏影像工程公司)。在图像分析中常用灰度值来表示图像的透光率,免疫组化的强弱与灰度值成反比,即染色反应越强或阳性细胞数量越多,灰度值越小;反之亦然。
  1.4.5 组织形态学观察取左肾,固定、包埋、切片,常规行HE染色。在肾皮髓交界区选取20个高倍镜视野,观察肾组织形态学改变。
  
  1.5 统计学处理
  采用SPSS13.0统计学软件进行统计学处理,实验所得数据用均数±标准差表示,使用单向方差分析进行组间比较,以P

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