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【关键词】:黄连花 黄酮 提取 【中图分类号】R284.2;R282.71 【文献标识码】B 【文章编号】1007-8517(2008)07-0049-01
报春花科珍珠菜属植物黄连花Lysimachiadavurica Ledeb. 为多年生草本植物,具有镇静､降压之功, 东北民间常用于治疗高血压､头痛､失眠等症｡本实验采用超声浸提和水浴浸提两种方法,对提取黄连花中黄酮类化合物进行实验研究,为实际应用提供科学依据｡
1仪器､试剂及材料
UV1100型紫外分光光度仪(北京瑞利仪器厂)TCQ-250型超声波仪(北京医疗设备二厂),AND�FR-200电子分析天平(日本)｡芦丁(中国药品生物制品检定所),其它试剂均为分析纯其他｡黄连花采自辽宁东部山区,经辽宁中医药大学中药鉴定教研室鉴定,干燥后粉碎备用｡
2黄酮含量测定及计算
2.1 芦丁标准液配制精确称量芦丁(120℃干燥至恒重)18.6mg,于100mL烧杯中,以60%EtOH溶解,定容于100mL量瓶中,浓度为0.186g•L-1｡
2.2 标准曲线的测定分别取芦丁标准液0.0,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0mL于6只10mL量瓶中, 加入60%EtOH使成5.0mL｡加5%NaNO20.3mL, 摇匀,放置6min;再加10%A1(NO3)3 0.3mL,摇匀,放置6min; 加4.0mL 1.0mol•L-1NaOH, 稀释至10.0mL,摇匀,放置10~15min,在λ=510nm处测定吸光度A,测得结果如下:当浓度为0.0093,0.0186,0.0372,0.0558,0.0744g•L-1时,吸光度A分别为0.1222,0.2394,0.4802,0.6907,0.9619｡以吸光度A为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准吸收曲线｡用最小二乘法经线性回归,得芦丁浓度(c)与吸光度(A)的关系曲线的回归方程式: A=0.078411c+0.001446,r=0.9993｡
3实验步骤
通过预实验, 选定水浴､超声方法各条件｡按正交表L9 (34)安排三因素三水平正交实验:水浴法选定乙醇浓度(A,50%,70%,90%,依次为水平1,2,3,下同)､温度(B,50,70,90℃)､浸渍时间(C,1,2,3 h)进行试验;超声法选定乙醇浓度(D,50%,70%,90%)､液固比(E,20∶1, 30∶1, 40∶1)和超声时问(F, 20, 40, 60rain)进行试验｡取浸提液0.5mL定容到50mL量瓶中,按“2”项测定吸光度并计算黄酮含量｡
4结果与讨论
4.1最佳条件的选择根据正交实验与数据处理可知,水浴法与超声法测定的总黄酮浓度总和分别为: 2554.7和2925.4μg•mL-1｡方差为A:3222.4, B: 8965.3, C: 2963.0, D: 1510.7, E:40796.1,F:10279.7｡显著性检测发现,F值为,A: 1.05, B: 3.02, C: 1; D: 1, E: 27.04, F:6.80｡①水浴法:水浴温度是显著性因素,从数据的直观分析和方差分析以及显著性检验可知,三种因素对提取结果影响大小依次为B>A>C,其最佳组合为A1B3C3, 即最佳提取条件为50%乙醇于90℃水浴提取3h,所得黄酮类物质的浸出率最高｡②超声法:液固比的影响最显著,时间也是一个显著性因素｡从数据的直观分析和方差分析以及显著性检验表明,三种因素对浸提结果影响大小依次为E>F>D,其最佳组合为D2E1F2,即超声方法用20倍原料重的70%乙醇超声40min,黄酮类物质浸出率最高｡
4.2水浴与超声方法中,影响黄酮类物质提取的主要条件基本相同,但超声条件下提取效果优于水浴｡
4.3超声次数扩展实验以样品作两次超声提取,第一次超声处理即有95%得率(以超声40min两次,并多次浸滤所得含量,多次平行结果作为总含量),可见第二次超声作用较小,可以超声40min代替｡
4.4不同部位黄酮含量测定以超声最佳条件对黄连花不同部位进行了比较,其中根中黄酮含量为0.25%,茎中为0.32%,叶子含量为0.55%｡可见叶中黄酮类物质含量最高｡
4.5以超声最佳条件对同地区不同采收时间产的黄连花的黄酮含量测定,结果5~6月份样品:根为0.18%,茎为0.25%,叶为0.38%;7~8月份样品根为0.28%,茎为0.33%,叶为0.40%,可见7~8月份为最佳采收季节｡
(收稿日期�2008.4.20)
