【www.zhangdahai.com--工作计划】
云南省军区蒙自军分区医院,云南 蒙自 6611000 【关键词】:排毒氏肿胶囊;抗肿瘤;对照｡ 【中图分类号】R979.1; 【文献标识码】B 【文章编号】1007-8517(2009)03(上)-0026-02
目前内科治疗肿瘤手段,在一定程度上仍未摆脱半个世纪以来主要应用细胞毒性药物,杀灭肿瘤细胞的时代｡近年的靶向治疗的发展,可能是抗癌治疗的一个新里程碑｡但我们更希望出现中医中药这一伟大宝库研制出更多的新药治疗肿瘤,使更多的肿瘤患者延长生命,提高他们的生活质量｡排毒化肿胶囊就是一种有希望的治疗肿瘤的新药｡
摘要观察撑毒化肿胶囊在体内对3株鼠肿瘤细胞株增殖的影响｡取培养的鼠瘤细胞用生理盐水调制成1×107个细胞/mL浓度的瘤细胞悬液,接种于小鼠右侧肩胛部皮下｡接种第4天后随机分成药物治疗组和对照组｡治疗组用排毒化肿胶囊灌胃给药,对照组用注射用水灌胃,连续15天｡灌胃停止后24h处死动物,计算各组成瘤数量,测量瘤体大小,以评价其体内抗肿瘤活性｡结果表明:排毒化肿胶囊对P388D1(小鼠淋巴样瘤细胞)､LLC(小鼠肺癌细胞)和MFC(小鼠胃癌细胞)的增殖均有一定抑制作用,排毒化肿胶囊在1.2~2.4g/kg/d剂量范围内,能有效的抑制P388D1(小鼠淋巴样瘤细胞)､LLC(小鼠肺癌细胞)和MFC(小鼠胃癌细胞)的生长｡
1 材料和方法
1.1 材料1.动物:健康Bablc小鼠,由云南省天然药物药理重点实验实动物室提供(合格证号:滇实动证:9806,9805)｡
1.2 细胞株:P38gDl(小鼠淋巴样瘤细胞)､LLC(小鼠肺癌细胞)和MFC(小鼠胃癌细胞)购自中国科学院上海生命科学研究所｡
1.3 药物与试剂:排毒化肿胶囊粉,厂家提供｡环磷酰胺:江苏恒瑞医药股份有限公司,国药准字H32020857,0.2g/瓶,批号:0702112“氢化泼尼松:利君制药,国药准字H61023180,10mg/2ml/支,批号:080111;长春新碱:深圳万乐药业有限公司,国药准字H44021772;ling/瓶,批号:0805V1;顺铂:德州德药制药有限公司,国药准字H37020524,10rug/支,批号:071208;5―氟尿嘧啶:山东凤凰制药股份有限公司,国药准字H20051312,250mg/10ml/支,批号;080306;生理盐水:昆明大观制药有限公司,国药准字H53020998,500ml/瓶,批号:200801255;注射用水:昆明大观制药有限公司,成联制字(2002)BM37056,500ml/瓶,批号:20080325｡
2 方法
2.1 荷瘤小鼠模型制备
2.1.1 免疫抑制剂配制:
将环磷酰胺用生理盐水配成3mg/ml,氢化泼尼松,用生理盐水按0.08mg/ml
2.1.2 Balb/c小鼠免疫抑制处理:
健康Balb/c小鼠150只,用配制的环磷酰胺腹腔注射3mg/ml/只,连续注射2天后,再用氢化泼尼松腹腔注射0.08mg/m1/只,连续注射2天｡
2.1.3 肿瘤细胞配制:
取培养的P388D1肿瘤细胞,LLC肿瘤细胞和MFC肿瘤细胞用PRMI-1640配成浓度为1×107个细胞/mL浓度的瘤细胞悬液
2.1.4 小鼠肿瘤细胞接种:
将上述用免疫抑制剂处理过的150只小鼠,分成三个肿瘤组,即P388D1组､LLC组和MFC组,每组50只小鼠,再按组分别接种P388D1､LLC､MFC三种肿瘤细胞,都在小鼠右肩岬皮下接种肿瘤细胞0.2ml(2×106个细胞/只)｡
2.2 排毒化肿胶囊体内抗肿瘤活性
2.2.1 荷瘤小组分组:将已接种三种不同肿瘤细胞的荷瘤小鼠各50只,再各分成5组,每组均为10只小鼠,即低剂量治疗组､中剂量治疗组､高剂量治疗组及阴性对照组和阳性对照组｡
2.2.2 药物配制
① 排毒化肿胶囊配制:用蒸馏水配制排毒化肿胶囊悬浊液,将排毒化肿胶囊粉剂溶于注射用水,分别配成48mg/O.2ml(高浓度组2.4g/kg)､24mg/0.2ml(中浓度组1.2g/kg)和12mg/0.2ml(低浓度组0.6g/kg)｡
② 长春新碱和顺铂､5FU配制:均用生理盐水配制,长春新碱:2mg/kg(0.4mg/m1),顺铂:70mg/kg(70Ug/m1);5F?滋:30mg/kg(0.6mg/m1)｡
2.2.3 小鼠灌胃:
治疗组于肿瘤细胞接种小鼠后第4天开始排毒化肿胶囊灌胃,按0.6､1.2､2.4g/kg/0.2ml剂量组分别灌胃,每天1次,连续15天;阴性对照组0,2ml/只注射用水灌胃｡
阳性药物对照组P388D1组:使用长春新碱,剂量为:2mg/kg,接种P388D1细胞后第7天腹腔注射1次;②LLC组:使用顺铂,使用剂量:70mg/kg,接种LLC肿瘤细胞后第4天腹腔注射,每天1次,连续3天;③MFC组:使用5-氟尿嘧啶,30mg/kg,接种MFC肿瘤细胞后第4天腹腔注射1次｡
2.2.4 小鼠生长情况观察:每天三次观察小鼠活动情况
小鼠长瘤情况,治疗组,对照组(包括肿瘤数和体积差别)
2.2.5 结果处理:计算各组成瘤数量,按下公式求出肿瘤抑制率后用《医百医统.统计软件包》进行统计学分析｡肿瘤抑制率(%)=×100
3 结果
根据药物治疗后小鼠肿瘤生成数的统计,以及肿瘤大小观察结果,见表1―3和图1所示｡
从表1~2显示,样毒化肿胶囊灌胃给药,在1.2~2.4g/kg/d剂量范围内,对LLC小鼠肿瘤和P388D1小鼠肿肿瘤抑瘤率>30%｡按照新药临床前研究指导原则受试药抑制率>30%即认为有效的标准,可认为样毒化肿胶囊在1.2~2.4g/kg/d剂量范围内,能有效地抑制LLC小鼠肿瘤和P388D1小鼠肿瘤的生长｡
观察到药物治疗组的肿瘤体积比未治疗的对照组要小(图1)
从表3可见,搏毒化肿胶囊灌胃给药,在2.4g/kg/d剂量,对MFC小鼠肿瘤抑瘤率=30%｡撑毒化肿胶囊在0.6~1.2g/kg/d剂量范围内,对MFC小鼠肿瘤抑瘤率=10%｡
排毒化肿胶囊在1.2~2.4g/kg/d剂量范围内,MFC肿瘤肿块在0.2~0.3cm,较对照组MFC肿瘤肿块0.3~0.4cm2小,低剂量组的肿块与对照组MFC肿瘤肿块大小没有差异,因此,排毒化肿胶囊在1.2~2.4g/kg/d剂量范围内对MFC肿瘤细胞生长有一定的抑制作用｡
4 讨论与结论
排毒化肿胶囊灌胃给药,在1.2~2.4g/kg/d剂量范围内,对LLC小鼠肿瘤和PB88D1小鼠肿瘤抑瘤率>30%｡按照新药临床前研究指导原则受试药抑制率>30%即认为有效的标准,可认为排毒化肿胶囊在1.2~2.4g/kg/d剂量范围内,能有效地抑制LLC小鼠肿瘤和PB88D1小鼠肿瘤的生长｡
由于本实验使用的是Bab/c小鼠,肿瘤的造模和千预实验是在进行免疫抑制后进行,试验周期较长,在药物治疗组和对照纪.开始观察到的肿瘤体积是有差别的对照组的肿瘤要比治疗组的稍大,在实验过程中Bab/c小鼠的免疫功能有不同程度的恢复,小鼠的免疫功能对小鼠肿瘤亦有抑制作用,最后实验结束解剖小鼠时对照组肿瘤虽然比治疗组肿瘤体积要大,但各组肿瘤的体积相对都较小,重量达不到18,不能称重｡在一定程度上影响实验结果,因此,进一步实验最好使用裸鼠或SCID小鼠｡
由于本实验使用的是小鼠的肿瘤细胞,所得的结果仅能用于参考,撑毒化肿胶囊最终对肿瘤的作用,最好使用人的肿瘤细胞进行实验｡但本实验为进一步作临床前试验和临床试验提供了实验基础｡
注:本实验原计划用裸鼠进行实验,但奥运期间裸鼠不能运输,而昆明没有,所以只能采用近交系小鼠进行实验｡
目前医药已在成都军区几家医院临床试验观察｡对消化系统､呼吸系统､淋巴系统肿瘤,确有一定疗效,部分患者健康生存已达10年,但由于基层医院缺乏完善的检查设备,系统对照,临床仍需进一步探索,希望更多医院合作,多提宝贵意见｡
参考文献
[1]新药(西药)临床前研究指导原则汇编[S].中华人民共和国卫生部药政局,1993年,p137―139.
[2]徐叔云.药理实验方法学[J].北京:人民卫生出版社,1994,1423.
[3]中药新药研究指南[S].中华人民共和国卫生部药政局,1994,104.
4.唐希灿,刘)君[J].药学学报,1996,21(12):886-893.
5.陈奇主编.中药药理研究方法学[M].人民卫生出版社,北京:1993,p305-306.
6｡陈奇主编.中药药理研究方法学[M].人民卫生出版社,北京:1993,p378―379.
(收稿日期:2009.1.19)
