【www.zhangdahai.com--汇报材料】
【摘要】 目的 建立一种高效液相色谱法，测定替硝唑，戊酸雌二醇复方栓剂中二种组分的含量，用于制剂质量控制。方法 采用反相高效液相色谱法，色谱柱：KramasilC18柱(150 mm×4．6 mm；5um),以甲醇(100%)为流动相，流速为0．65 ml/min，检测波长为230 nm，柱温为30℃。结果 测定替硝唑的线性范围10．33~232．40 μg/ml,r=1．000 00,平均回收率为103．97%，RSD为0．089%;测定戊酸雌二醇的线性范围6．02~135．45 μg/ml，r=0．999 99,平均回收率为98．68%，RSD为0．147%。结论 本法方便、准确，适合于复方替硝唑栓剂的质量控制。
【关键词】 高效液相色谱法；替硝唑；戊酸雌二醇
HPLC determination of two components in compound tinidazole，estradiol valerate suppositories
CHENG Peng，MO Xiao．mei，CHEN Zhan．fang，et al.Qingdao Medical Center for Woman and Children，Qingdao 266011,China
【Abstract】 Objective To establish an HPLC method for the determination of tinidazole,estradiol valerate in Compound tinidazole,estradiol valerate suppositories.Methods RP．HPLC was used an chromatography condition was determined:the system was carried out using kromasilC18 column and the mobile phase of methanol(100%)with flow rate of 0．65 ml/min and the detection wavelength was at 230 nm,colum temperature was set at 30℃.Results The linear range was 10．33．232．40 μg/ml,r=1．000 00,6．02．135．45 μg/ml,r=0．999 99，the average recovery was 103．97%,98．68%for the determination of tinidazole and estradiol valerate in Compound suppositories.Conclusion This method is simple and accurate，it can be used for the control of the quality of Compound tinidazde estradiol valerate suppositories.
【Key words】 HPLC;Tinidazole;Estradiol valerate
复方替戊栓剂为我院制剂，每枚含替硝唑400 mg，戊酸雌二醇1 mg。替硝唑为第二代硝咪唑类抗菌药物，同甲硝唑相比具有明显的药动学优势，疗效高，不良反应少[1]。戊酸雌二醇为长效雌二醇衍生物，对改善妇女更年期症状有明显的促进作用[2]。为了更好地控制产品质量,保证用药的安全和有效,我们参考文献[3．4]，对处方中替硝唑和戊酸雌二醇的含量进行了测定。
1 材料
Agilent 1100高效液相色谱仪(包括G1314A可见．紫外检测器，G1316A柱温箱，G1313A自动进样器，G1311A四之(梯度)泵，G1322A脱气机)；UV．1100紫外可见分光光度计；甲醇(色谱醇)；替硝唑对照品，戊酸雌二醇对照品，(中国药品生物制品检定所)。
2 方法与结果
2．1 溶液制备
2．1．1 对照品溶液 精密称取替硝唑对照品，戊酸雌二醇对照品适量，用甲醇溶解并定量稀释成每1 ml分别含替硝唑0．1 mg，戊酸雌二醇0．05 mg的溶液即得。
2．1．2 样品溶液 取本品20枚，精密称定，切成碎末，精密称取适量(相当于戊酸雌二醇5 mg,替硝唑2 g)置100 ml量瓶中，加甲醇适量，水浴加热并时时振摇，使二组分溶解，取出，加甲醇稀释至近刻度，放冷后再加甲醇至刻度，摇匀，迅速过滤，取续滤液2 ml作为戊酸雌二醇样品溶液；同时精密量取续滤液0．5 ml至100 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取续滤液2 ml作为替硝唑样品溶液。
2．2 色谱条件及系统适应性 色谱柱KromasilC18柱(150 mm×4．6 mm，5 μm)，流动相为甲醇(100%)，检测波长为230 nm，流速：0．65 ml/min,柱温30℃，精密量取对照品溶液20 μl进样测定，替硝唑和戊酸雌二醇的保留时间分别为2．3、3．9 min，理论板数按替硝唑峰计算应不低于2000。色谱图见图1。
3．3 空白试验 按处方比例称取约相当5枚栓剂的基质量，不添加二种药物组分，按照与制备样品溶液相同的方法制备空白溶液，同法测定，结果表明基质对二组分测定无干扰。
3．4 标准曲线 精密量取对照品溶液2、5、10、15、20、25、30、40、45 μl进样，按上述色谱系统测定，以浓度(c)对色谱峰面积(A)进行线性回归，结果表明替硝唑和戊酸雌二醇的回归方程为：A=2．716 5×104C+1．252 56，r=1．000 0； A=2．365 9×104C+7．898 89，r=0．999 99，替硝唑在10．33~232．40 μg/ml，戊酸雌二醇在6．02~135．45 μg/ml范围内线性关系良好。
3．5 回收试验 精密称取戊酸雌二醇对照品5 mg，替硝唑对照品2 g及基质适量置于100 ml量瓶中，然后置水浴中加热使熔化并时时振摇混合均匀，放冷至凝固，然后按3．1．2项下从“加甲醇适量，水浴加热并时时振摇……”开始制备二组分回收试验供试品溶液，分别取对照品溶液及二组分供试品溶液15、20、25 ul进样，按上述色谱系统以外标法进行测定，连续测定3次，结果平均回收率为，替硝唑103．97%，RSD=0．089%，戊酸雌二醇98．68%，RSD=0．147%。
3．6 重复性试验 取自制同一批号样品，按3．1．2项下制备样品溶液，按样品测定的方法，连续测定6次，计算含量，结果替硝唑的RSD为0．092%，戊酸雌二醇的RSD为0．158%。
3．7 样品测定 按3．1．2制备二组分样品溶液，各精密吸取20 μl进样，记录色谱图，见图2和图3。另外精密吸取对照品溶液20ul按上述色谱系统同法测定，按外标法以峰面积计算，测定样品3批，结果见表1。
4 讨论
4．1 流动相的选择 在选择流动相时，首先试用以甲醇．水(85�∶�15)为流动相，替硝唑峰出现肩峰，分析原因，替硝唑在此流动相中已发生解离现象，改用以0．05 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至5．5)．甲醇(80�∶�20)为流动相，戊酸雌二醇峰消失，为既保证戊酸雌二醇的稳定性，又达到抑制替硝唑分子解离的目的，选择以100%甲醇为流动相，二组分峰形虽好，但保留时间接近，为避免基质对两组分测定的干扰，最终选定以100%甲醇为流动相，调整流速为0．65 ml/min的色谱条件，结果显示两组分分离效果佳，保留时间适当，峰形好，系统稳定，重复性好。
4．2 实验方法的设计 由于替硝唑的含量是戊酸雌二醇的400倍，戊酸雌二醇含量很低，1 mg/枚,采用一般分析方法很难定量测定，因此本文采用在同一色谱条件下分别测定两组分含量的实验方法，由于替硝唑的取样量达到2 g，为防止替硝唑从浓溶液中析出，要求配制样品溶液时应连续操作，稀释时应注意观察溶液的澄明度，若有结晶析出，适当加热熔化，放冷后再取样稀释。经试验，本文操作方法可行，结果符合要求。
参考文献
1 王克森，徐传新，董珩，等.替硝唑栓的研制及临床应用.中国医院药学杂志，1996,16(1):17．19.
2 陈新谦，金有豫，汤光.新编药物学.人民出版社,2003.
3 国家药典委员会.中华人民共和国药典.二部.化学工业出版社,2005.
4 宋燕铃，绳金房，刘雪峰等.反相离子对高效液相色谱法测定复方盐酸二甲双胍片中二组分的含量.药物分析杂志，2005，25(1)：55．57.
