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关 霞，赵颖洁
（四川省妇幼保健院病理科，四川 成都 610041）
乳腺癌是一种发生在乳房腺上皮组织的恶性肿瘤，患者早期没有典型症状，容易与乳腺增生和乳腺纤维瘤混淆，不易引起重视。随着病情进展，其可能出现周围淋巴结转移，也可以通过血行转移，到达肺、脑等重要的生命器官，严重威胁患者生命安全。有研究显示，多种基因的异常表达和机体微环境众多细胞因子的相互作用与乳腺癌的转移、疾病进展密切相关[1]。胰岛素受体底物-1（IRS-1）、胰岛素受体底物-2（IRS-2）均属于胰岛素受体络氨酸激酶底物家族中的成员，参与多种细胞因子的信号转导，通过与受体结合发生自身磷酸化为下游信号转导提供结合位点，从而激活下游转导通路[磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信号通路]，调控细胞的生长、存活、分化及代谢，且高表达时可使细胞发生癌变，参与肿瘤的发生、发展[2-3]。本研究旨在探讨IRS-1、IRS-2在乳腺癌组织中的表达情况，及其与患者临床病理特征的关系，以期为临床上诊治乳腺癌提供参考，现报道如下。
1.1一般资料回顾性分析四川省妇幼保健院2019年8月至2021年7月收治的60例乳腺癌患者的临床资料，分别取其乳腺癌组织标本与乳腺癌癌旁正常组织标本进行检测。诊断标准：参照《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范（2017年版）》[4]中的相关诊断标准。纳入标准：符合上述诊断标准，并经病理学检测确诊；
未接受放化疗治疗；
行乳腺癌根治术治疗者；
临床资料完整者等。排除标准：既往有恶性肿瘤史或伴随其他恶性肿瘤者；
合并急、慢性炎症疾病或基础疾病者；
影像学检查存在可疑远处转移；
合并血液系统、免疫系统疾病者等。四川省妇幼保健院医学伦理委员会已批准此研究。
1.2研究方法
1.2.1标本采集于乳腺癌根治术术中切除病灶组织，并采集距离病灶组织大于5 cm的癌旁正常组织2～3块（经病理诊断确诊无癌细胞残留），30 min内使用浓度4%的多聚甲醛溶液进行固定1～2 d，使用乙醇脱水后再使用甲苯溶液对切片进行清洗，石蜡包埋制作成组织蜡块。
1.2.2免疫组化检测对组织蜡块进行连续切片（厚度：4 μm），并将组织切片贴附在预先处理的载玻片上，随后将其放在60 ℃干燥箱中进行烘烤2 h，室温保存；
使用二甲苯进行脱蜡和梯度酒精进行水化处理；
在室温避光下，使用3%过氧化氢处理10 min，山羊血清封闭（浓度10%）孵育30 min；
磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）浸泡2次，5 min/次。分别加入单克隆抗体，对照组以PBS代替一抗4 ℃孵育过夜，室温复温（45 min） →二抗（37 ℃孵育20 min） →三抗（37 ℃孵育20 min）；
在1滴二氨基联苯胺显色液与1滴亲和素生物素过氧化物酶复合物（约50 μL）的混合液中加入1 mL双蒸水并混匀，在显微镜下观察切片组织颜色和强度适中后，立即使用自来水终止显色，苏木素复染细胞核5 min，中性树胶封片。使用全自动荧光免疫分析仪（Radiometer Medical ApS，型号：AQT90 FLEX）检测IRS-1、IRS-2表达水平。细胞染色情况通过显微镜进行判定，同时统计其表达情况。由两名病理科医师对所有病理切片的免疫组化染色情况进行观察确认。
1.2.3免疫组织化学染色结果判定标准IRS-1与IRS-2高表达：呈棕黄色或棕褐色，根据标本染色强度[无着色（0分，阴性）、浅黄色（1分，弱阳性）、棕黄色（2分，阳性）、棕褐色（3分，强阳性）]及范围[棕黄色染色范围≤ 25%为1分，25% ＜ 染色范围≤ 50%为2分，50% ＜ 染色范围≤ 75%为3分，染色范围 ＞ 75%为4分]判定，免疫组化评分=染色强度×染色范围， ≤ 1分为低表达，＞2分为高表达（5～8分、9～12分别为中度阳性、强阳性）[5]。
1.3观察指标①观察乳腺癌组织与乳腺癌癌旁组织IRS-1、IRS-2表达情况。②分析乳腺癌组织IRS-1、IRS-2阳性表达与患者临床病理特征的关系。其中临床病理特征包括组织学分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期）、肿瘤直径（＜2 cm或≥ 2 cm）、淋巴结转移（有或无）、T分期[T1：肿瘤最大直径≤ 20 mm；
T2：20 mm＜肿瘤最大直径≤ 50 mm；
T3：肿瘤最大直径＞50 mm]、N分期[N0：无区域淋巴结转移；
N1～2：同侧Ⅰ、Ⅱ级腋窝淋巴结转移，可移动（N1）、同侧Ⅰ、Ⅱ级腋窝淋巴结转移，固定或融合（N2）；
N3：同侧锁骨下淋巴结（Ⅲ级腋窝淋巴结）转移，伴或不伴Ⅰ、Ⅱ级腋窝淋巴结转移][6]；
组织学分期标准：按照腺管形成[腺管形成＞75%（1分），10% ≤腺管形成≤ 75%（2分），腺管形成＜10%（3分）]、核的多形性[1分（与肿瘤周围正常乳腺组织比较，细胞规则，核小或稍大）、2分（较正常上皮细胞大，有中度异形性，可见空泡核及核仁）、3分（瘤细胞有明显的多形性，可见巨核及畸形核）]及核分裂计数[核分裂计数评估，在细胞生长活跃区，计数10个高倍视野（400×），然后算出每10个高倍视野的核分裂数（1分：0～1个；
2分：2～3个；
3分：＞3个] 3项总分进行评估，总分为3者之和，3～5分为Ⅰ级，6～7分为Ⅱ级，8～9分为Ⅲ级[7]。
1.4统计学方法采用SPSS 22.0统计学软件分析数据，计数资料使用[ 例(%)]表示，行χ2检验，多组间比较采用χ2趋势检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。
2.1乳腺癌组织IRS-1、IRS-2表达情况乳腺癌组织中IRS-1、IRS-2的高表达率均显著高于乳腺癌旁组织，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表1。IRS-1、IRS-2在乳腺癌组织中均有广泛表达，呈棕褐色，阳性细胞占比≥ 51%，定位于细胞浆内，见图1-A、图1-B。
表1 乳腺癌组织中组织IRS-1、IRS-2表达情况比较[ 例(%)]
图1 乳腺癌组织IRS-1、IRS-2免疫组织化学染色阳性图片（×200）
2.2乳腺癌组织IRS-1、IRS-2表达与患者临床病理特征的关系乳腺癌组织IRS-1、IRS-2高表达患者中T3期、N3期占比均显著高于IRS-1、IRS-2低表达患者，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表2、表3。
表2 乳腺癌组织IRS-1表达与患者临床病理特征的关系[ 例(%)]
表3 乳腺癌组织IRS-2表达与患者临床病理特征的关系[ 例(%)]
大部分乳腺癌患者在早期一般不会出现明显的不适症状，因此容易被患者忽视，当病情发展到一定程度时，进行相关检查才发现病灶，但是为时已晚，癌细胞已发生远处转移，进而导致多器官出现病变，严重威胁患者生命安全。此外，乳腺癌患者不同的疾病进展阶段，也会有不同的治疗方式与预后。因此，寻找一种积极有效的乳腺癌诊断方法，对指导临床采取及时有效的治疗措施与改善患者预后意义重大。随着临床对乳腺癌研究的不断深入，发现基因突变是其分子发病机制，并且在疾病的发生和发展过程中均有多基因参与。因此，了解细胞增殖标志物水平，对诊断乳腺癌具有积极意义。
IRS是被激活的胰岛素受体酪氨酸激酶作用的底物，具有较多的残基，发生磷酸化，参与了细胞因子信号转导的磷酸化蛋白，控制下游信号的传导，参与细胞的增殖、分化、凋亡及免疫调节等作用，其异常时可使细胞发生癌变，导致肿瘤的发生[8]；
而IRS-1、IRS-2属于胰岛素受体底物家族中的主要成员，可作为胰岛素信号转导系统中的关键中介分子，在多种肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用；
同时，该蛋白参与多种激素、细胞因子的信号转导，以维持细胞的基本功能。相关研究显示，IRS-1、IRS-2蛋白与乳腺癌的临床症状和预后有着重要的关系[9]。本研究中，乳腺癌组织中IRS-1、IRS-2的高表达率均显著高于乳腺癌旁组织，提示IRS-1、IRS-2在乳腺癌癌组织和癌旁组织中的表达具有较大的差异，参与了乳腺癌的发生发展。
IRS-1可通过调控多聚嘧啶区结合蛋白（PTB）的表达，消除胰岛素样生长因子受体-1（IGF-1R）对细胞分化的作用，从而促进细胞转化，IRS-1在乳腺癌中持续被激活，高表达IRS-1会促进乳腺上皮细胞增殖[10]。IRS-2高表达于乳腺癌中，主要通过调节下游通路PI3K促进细胞有丝分裂，从而导致恶性肿瘤的增殖，同时还可以促进间皮瘤细胞和神经细胞瘤的侵袭、转移[11]。本研究中，IRS-1、IRS-2表达均与组织学分期、肿瘤直径、淋巴结转移、T分期、N分期有关，说明IRS-1、IRS-2表达与临床病理特征有关，能够在一定程度上反映乳腺癌患者的恶性程度，这与上述指标在乳腺癌发生发展中的作用有关。
综上，IRS-1、IRS-2在乳腺癌组织中呈高表达水平，且上述指标表达水平与患者临床病理特征（乳腺癌T、N分期等）关系密切，可在临床上诊断和治疗乳腺癌方面起协助作用。但本研究也存在一定不足之处，未对患者疾病治疗和预后情况进行随访，因此需扩大样本量，延长随访周期，对疾病治疗和预后情况做深入研究。
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