【www.zhangdahai.com--其他范文】
张 磊 李光辉 李晓亮 杨小梅
1.安徽省食品药品检验研究院，安徽 合肥 230051；
2.安徽九方药物研究院有限公司，安徽 合肥 230088；
3.安徽九方制药有限公司，安徽 亳州 236800
葛根为豆科植物野葛Puerarialobata(Willd.)Ohwi 的干燥根，具有解肌退热、透疹、生津止渴、升阳止泻的功效，在心脑血管病[1-2]、肝脏病、糖尿病和耳鼻喉疾病等方面具有明显的药理活性。葛根的主要活性成分为异黄酮类化合物，如葛根素、3′-羟基葛根素、大豆苷等[3]。葛根总黄酮是从植物葛根中经提取分离、纯化得到的黄酮类成分，具有提高免疫、增强心肌收缩力、保护心肌细胞、降低血压、抗血小板聚集的功效。用于缺血性中风经络恢复期瘀血痹阻脉络证，动脉粥样硬化性血栓性脑梗死和腔隙性脑梗死见上证候者[4-5]。为了保证药品的安全、有效、稳定、均一，现对葛根总黄酮进行质量标准提高研究。本文采用高效液相色谱法，对10批葛根总黄酮样品进行了色谱分析，建立了葛根总黄酮的HPLC特征图谱分析方法，而中药特征图谱是一种多指标的质量控制模式，能够全面、综合地反映和控制中药的质量[6]，为更好地控制葛根总黄酮的质量提供了可靠的实验依据。
1.1 仪器 安捷伦1260高效液相色谱仪，1260 VWD紫外检测器，Agilent色谱工作站，ADVENTURER(AR1140)电子天平(万分之一)；
METTLER TOLEDO(AB135-S)电子天平(十万分之一)。
1.2 材料 葛根素对照品(批号：752-200108，中国药品生物制品检定所)；
葛根素芹菜糖苷(批号：P09J7F8770)、3′-甲氧基葛根素对照品(批号：P25D6F8070)购自上海源叶生物科技有限公司；
大豆苷(批号：15031507)、3′-羟基葛根素对照品(批号：15052309)购自成都普瑞法科技开发有限公司。实验中所用试剂均为分析纯和色谱纯。葛根总黄酮由安徽九方制药有限公司提供，批号：180104、180106、180106、180107、180109、180110、180111、180201、180301、180302。按以上批号顺序把葛根总黄酮样品编为S1→S10。
2.1 色谱条件 参照相关文献[7-10]，色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；
流动相：以甲醇为流动相A，0.05%磷酸水溶液为流动相B进行二元梯度洗脱(0～50 min：20%～55%A)；
检测波长为250 nm；
柱温为 25 ℃；
流速为1.0 mL·min-1；
进样量为10 μL。
2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取3′-甲氧基葛根素、葛根素、3′-羟基葛根素、葛根素芹菜糖苷和大豆苷对照品适量，置100 mL量瓶中，加30%乙醇溶解并稀释至刻度，制成每1 mL分别含51.2 μg、80.5 μg、52.3 μg、53.1 μg、51.6 μg的混合溶液，作为各对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 取葛根总黄酮粉末约10 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加30%乙醇适量，超声处理(功率200 W，频率40 kHz)20 min，放冷，摇匀，经微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度试验 以葛根总黄酮(批号：180104)为供试品，按“2.3”项下方法制备葛根总黄酮供试品溶液，连续进样6次，以2号峰(葛根素峰) 为参照峰(S)计算5个共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值。结果显示各共有峰的相对保留时间、相对峰面积比值的RSD均小于0.4%，表明该仪器的精密度符合分析方法的要求。
2.4.2 重复性试验 取葛根总黄酮(批号：180104)样品6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件，分别进行测定，计算各共有峰相对保留时间的RSD值在0.04%～0.17%之间，相对峰面积的RSD值在0.23%～3.65%，表明该方法重复性良好。
2.4.3 稳定性试验 以葛根总黄酮(批号：180104)为供试品，按“2.3”项下方法制备1份葛根总黄酮供试品溶液，按“2.1”项色谱条件分别在0 h、4 h、8 h、12 h、24 h进行测定，计算各共有峰相对保留时间、相对峰面积的RSD分别在0.04%～0.14%和0.06%～3.74%之间，试验结果表明供试品溶液在室温下24 h内稳定性良好。
2.5 特征图谱的建立与分析
2.5.1 特征峰的标定 采用相对保留时间标定共有特征峰。根据10批葛根总黄酮样品特征图谱比较，发现其中有5个分离较好的色谱峰为10批样品所共有，确定此5个峰为共有特征峰；
通过与对照品色谱对照，确定1号峰为3′-羟基葛根素，2号峰为葛根素，3号峰为3′-甲氧基葛根素，4号峰为葛根素芹菜糖苷，5号峰为大豆苷，如图1、图2所示。以2号峰(葛根素)作为参照峰，并以计算其他共有特征峰的相对保留时间和相对峰面积。结果见表1、表2。
2.5.2 相似度分析 分别将10批葛根总黄酮样品特征图谱HPLC数据导入“国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004A版)”，以共有模式为标准，进行整体相似度评价，相似度详见表3。5个特征峰的相对保留时间差异较小，RSD均小于0.2%，但各个色谱峰的相对峰面积的差异性较大，表明各批次间葛根总黄酮的整体化学成分具有较好的相似性，但各批次间5个共有峰所对应的化学成分含量有较大差异，这可能与葛根药材的生长年限、生长环境、采收期等因素有关[11-12]。
2.5.3 质量评价标准的建立[13]供试品特征图谱中应呈现5个特征峰，其中1个峰应与参照物葛根素峰保留时间相同，以葛根素参照峰为S峰，计算特征峰1～5的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%之内，规定值为0.692(1号峰)，1.000(2号峰)，1.072(3号峰)，1.165(4号峰)，1.236(5号峰)。
注：峰1,3′-羟基葛根素；
峰2(S),葛根素；
峰3，3′-甲氧基葛根素；
峰4，葛根素芹菜糖苷；
峰5，大豆苷图1 葛根总黄酮对照特征图谱
图2 10批葛根总黄酮特征图谱
表1 10批葛根总黄酮共有峰的相对保留时间
表2 10批葛根总黄酮共有峰的相对峰面积
表3 10批葛根总黄酮相似度
3.1 供试品溶液制备方法的选择 供试品溶液制备方法过程中，考察了以乙醇、70%乙醇和30%乙醇水溶液为提取溶剂，结果显示用30%乙醇提取所得供试品色谱峰较全面；
比较了超声和加热回流两种提取方式，两种提取方法结果无差别，选择较简便方法；
考察了10 min、20 min、30 min的提取时间，提取20 min所得的供试品峰面积已达最高。
3.2 色谱条件的选择 本实验比较了不同流动相，如乙腈-水、甲醇-水、甲醇-0.05%磷酸水溶液等；
等浓度洗脱与梯度洗脱；
不同品牌、型号的色谱柱，如Agilent Eclipse XDB-C8(4.6 mm×250 mm,5 μm)、Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)及ODS-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)等。采用DAD检测器对供试品溶液在200～400 nm进行扫描生成三维色谱图，对不同波长下的色谱图进行分析比较。不同柱温(20 ℃、25 ℃、30 ℃)对试验结果的影响；
对梯度洗脱程序进行优化，最终选择了色谱峰峰型较好、分离度高、基线平稳的色谱条件。即色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇(A)- 0.05%磷酸水溶液(B)梯度洗脱，柱温为25 ℃，检测波长设为250 nm。
3.3 参比峰的选择 在各批次样品图谱中葛根素的色谱峰较高，分离度较好，且保留时间居中，故选择其作为参照物。
综上，本文建立的方法专属性强、操作简便，具有优良的稳定性、精确度和重现性可检测葛总黄酮中的多种主要成分，所构建的特征图谱能较全面、准确的评价葛根总黄酮的真实性、优良性和稳定性，可为葛根总黄酮的整体质量评价提供参考依据。
猜你喜欢 葛根素葛根批号 一种JTIDS 信号批号的离线合批方法航天电子对抗(2022年4期)2022-10-24经常饮酒者喝葛根陈皮茶保健与生活(2022年7期)2022-04-08葛根药膳用处多文萃报·周二版(2022年10期)2022-03-19葛根素制剂的研究进展世界中医药(2020年14期)2020-08-07葛根妈妈和她的雁宝宝草原(2017年6期)2017-07-24心纳葛根黄酮软胶囊·科技创新实现从国家新药到大家健康(2016年8期)2016-12-26治感冒发烧 葛根效果好饮食科学(2014年3期)2014-03-10气相色谱法测定速效心痛滴丸主要成分的研究中国医药导报(2011年27期)2011-12-31葛根素的临床应用中国实用医药(2009年1期)2009-02-18本文来源：http://www.zhangdahai.com/shiyongfanwen/qitafanwen/2023/0425/589412.html
