【www.zhangdahai.com--试卷考卷】
【摘要】 目的 探讨细胞色素CYP1A1基因MSPI多态性与膀胱癌遗传易感性的关系。方法 应用聚合酶链式反应- 限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术，检测44例膀胱癌患者(病例组)和85例同期住院非膀胱癌患者(对照组)，检测CYP1A1基因MSPI多态性位点的3种基因型及等位基因的分布频率。结果 在病例组CYP1A1基因MSPI位点基因型分布频率为：TT（54．5％）、TC（36．4％）、CC（9．1％），等位基因分布频率为T（72．7％）、C（27．3％）；在对照组CYP1A1基因MSPI位点基因型的分布频率为TT（61．2％）、TC（31．2％）、CC（7．1％），等位基因分布频率为T（77．1％）、C（22．9％）。各个基因型在两组中所占的比例差异无统计学意义（P＞0．05）;T、C等位基因频率两组比较差异亦无统计学意义(P＞0．05)。结论 CYP1A1基因MSPI位点多态性的单独存在可能与本地区膀胱癌易感性无关。
【关键词】 膀胱肿瘤；CYP1A1；基因多态性；易感性
Analysis of the polymorphism of CYP1A1-MSPI gene in patients with bladder cancerYANG Li-xin，ZHANG Hai-feng，CUI Wen-peng,et al．Dept of Urology，the First Hospital，Jilin University，Changchun 130021,China
【Abstract】 Objective To discuss the relationship between the polymorphism of cytochrome CYP1A1-MSPI gene and genetic predisposition of bladder cancer．Methods The distribution frequence of allelic and three genotype of CYP1A1-MSPI polymorphism site of 44 patients with bladder cancer(case group) and 85 patients without bladder cancer(control group) by polymerase chain reaction- restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP) were detected．Results The distribution frequences of genotype of CYP1A1-MSPI site of the case group were TT（54．5％）,TC（36．4％）,CC（9．1％）,and the frequences of allelic gene were T（72．7％）,C（27．3％）．While the distribution frequences of genotype of CYP1A1-MSPI site of the control group were TT（61．2％）,TC（31．2％）,CC（7．1％）,and the of allelic gene were T（77．1％）,C（22．9％）．The ratio of genotype in each group has no significant difference（P＞0．05）；the frequence of allelic gene of T and C in each group also had no significant difference（P＞0．05）．Conclusion There may be no relationship between the individualism of CYP1A1-MSPI site polymorphism and susceptibility of bladder cancer in this area．
【Key words】 Ovarian tumor;CYP450;Gene polymorphism
膀胱癌是泌尿系统常见恶性肿瘤之一，其发生、发展与环境因素、遗传因素及他们的相互关系等密切相关。其中个体遗传易感性是影响膀胱癌发病的一个重要因素[1]。CYP1A1是细胞色素P450(CytochromeP450，CYP)家族的一名成员，是活化二恶英等环境毒素的主要酶类[2]，而酶代谢能力的差异是由基因多态性决定的。 CYP1A1基因3′端非编码区的T6235C置换产生一个MSPI酶切位点即MSPI多态性。 CYP1A1基因的单核苷酸多态性可以影响CYP1A1酶的表达量及酶的活性，Murray等[3]研究表明CYP1A1高表达与膀胱癌的发生和恶性程度相关。我们采用聚合酶链式反应- 限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术，分析CYP1A1基因MSPI多态性与膀胱癌遗传易感性的关系。
1 材料与方法
1．1 研究对象 膀胱癌组44例，为吉林大学第一医院2005年12月至2006年12月收治的患者，其中男30例，女14例。年龄47～80岁，中位年龄66岁。患者均为首次治疗，未经化疗、放疗，且无其他肿瘤病史，手术后病理诊断均为膀胱移行细胞癌。其中I级4例,II级30例，III级10例。85例同期住院非膀胱癌患者为对照组，对照组和膀胱癌组按照对照设计，两组间年龄、性别、肿瘤家族史、体质量指数、生活环境等差异无统计学意义。
1．2 方法
1．2．1 DNA提取 抽取各样本术前清晨空腹静脉血3 ml，EDTA抗凝，将抗凝外周血取500 μl分装，-80℃保存，分批按经典酚-氯仿抽提方法提取基因组DNA。 采取紫外分光光度法将DNA稀释至0．5 μg/μl，-20℃保存备用。
1．2．2 PCR反应 根据文献[4]设计引物，其序列为:上游引物为5′－TAGGAGTCTTGTCTCATGCCT－3′;下游引物为5′－CAGTGAAGAGGTGTAGCCGCT－3′， 引物由赛百盛生物公司合成。PCR的反应条件:反应总体积为25 μl，0．5 μg/μl DNA模板2 μl，5′ 端引物(10 μmol/L) 0．5 μl，3′ 端引物(10 μmol/L) 0．5 μl，dNTPs 1 μl，10×Buffer 2．5 μl，Taq酶0．5 μl，加去离子水至终体积25 μl。聚合酶扩增参数:95℃预变性5 min，然后95℃变性30 s，58℃复性30 s，72℃延伸30 s，从第2步开始35个循环后72℃延伸7 min。
1．2．3 CYP1A1基因MSP I多态分析 扩增产物经MSP I限制性内切酶酶切鉴定，酶切体系为PCR扩增产物7 μl、10×Buffer 1 μl、三蒸水2 μl、Msp I酶2 U。37℃水浴2～3 h。将酶切产物经2％琼脂糖凝胶电泳，电脑成像系统成像分析。
1．2．4 统计方法 采用SPSS 11．5软件分析，用χ2检验法比较膀胱癌组和正常对照组之间MSP I多态性等位基因频率的差异。
2 结果
2．1 CYP1A1基因扩增产物MSP I酶切电泳结果 PCR扩增片段长度为343 bp，经过Msp I酶切电泳得到3种基因型:基因型A（T/T）为343 bp 1条片段，基因型B（T/C）为343 bp、205 bp、138 bp 3条片段，基因型C(C/C)为205 bp、138 bp 2条片段，不同基因型的电泳图谱见图1，其中7泳道为A基因型；1、6、9、10泳道为B基因型；2、3、4为C基因型。
2．2 膀胱癌组与对照组CYP1A1基因MSP I多态性位点基因型频率及等位基因频率的比较 CYP1A1基因MSP I多态性位点基因型频率及等位基因频率在膀胱癌组分别为TT（54．5％）、TC（36．4％）、CC（9．1％）；T（72．7％）、C（27．3％）；对照组分别为TT（61．2％）、TC（31．2％）、CC（7．1％）；T（77．1％）、C（22．9％）。经统计学分析，各个基因型及等位基因在两组中所占的比例差异均无统计学意义（P＞0．05）。两组CYP1A1基因MSP I多态性位点基因型见表1。
3 讨论
近年来CYP1A1酶与肿瘤的相关性日益受到重视，CYP1A1参与多环芳烃类(PAH)如苯并芘的代谢,将其氧化为酚类产物和环氧化物[4]。在大鼠,PAH的致癌作用与CYP1A1的诱导能力高度相关[5]。 CYP1A1基因还编码芳烃羟化酶,使雌激素代谢为儿茶酚雌激素,而后者具有致癌性[6]。CYP1A1参与雌二醇C-2、C-6a、C-15a的羟化代谢[7]。Murray[3]等研究表明CYP1A1高表达与膀胱癌的恶性程度相关。但是Brookmoller[8]等对高加索人群的研究表明CYP1A1基因型与膀胱癌易感性的无关，本研究结果于Brookmoller等的结果相一致。
分析CYP1A1基因MSP I多态性与本地区膀胱癌易感性无关可能有以下几方面原因：①由于机体解毒系统本身复杂性的存在，单一解毒酶活性的改变并不能完全影响外源性物质在体内的全部代谢过程，另外酶的本底表达和诱导表达水平有显著的个体差异[9];②酶的活性并不完全取决于基因结构，基因转录调控和底物对酶的诱导活性都将对其产生一定的影响;③抽样本身存在的偏差和样本量的大小都会对研究的结果产生影响。另外，疾病不是单一因素作用的结果，因此对一种疾病应该从各种因素综合分析。我们还需要加大样本量观察，并且进一步研究该基因家族的其他成员的基因多态性与膀胱癌的关系，观察基因间的协同作用，从分子水平研究疾病的原因，为临床预防、诊断、治疗提供理论依据。
参考文献
1 Ma QW，Lin GF，Chen JG，et al．Polymorphism of N-acetyltransferase 2(NAT2) gene polymorphism in Shanghai population occupational and non-occupational bladder cancer patient groups．Biomed Environ Sci，2004,17 (3)：281-291．
2 Kiyohara C，Nakanishi Y，Inutsuke S，et al．The relationship between CYP1A1 arylhydrocarbon hydroxylase activity and lung cancer in a Japanese population．Pharmacogenetics，1998，8：315-323．
3 Murray GI，Taylor VE，Mckay JA，et al．Expression of xenobiotic metabolizing enzymes in tumors of the urinary bladder．Int J Exp Pathol，1995，76(4)：271-276．
4 Hadficld RM，Manck S，Wccks DE，et al．Linkage and association studies of the relationship between endometriosis and genes encoding the detoxification enzymes GSTM1,GSTT1 and CYP1A1．Molecular Hum Report，2001，7：1073-1078．
5 RannunA，Alexandrie AK，Persson D，et al．Genetic polymorphism of cytochromesP4501A1，2D6 and2E1：regulation and toxicolonical significance．JOEM，1995，37：25-36．
6 Hnher JC，Schnecberger C，Tempfer CB．Genetic modeling of the estrogen metabolism as a risk factor of hormone dependent disorders．Ma-
turates，2002，42( 1)：1-12．
7 Badlawi AF，Cavalieri EL，Rogan EG．Role of human cytochrome P4501A1，1A2，1B1，and 3A4 in the 2，4，and 16alpha-hydroxylation of 17betaestradiol．Metabolism，2001，50( 9)：1001-1003．
8 Brookmoller J，Cascorbi I．Combined analysis of lnherited polymorphisms in arylamine N-acetyltransferase 2，glutathione S-transferasea MI and TI microsomal epoxide hydrolase，and cytochrome P450 enzymes as modylators of bladder cancer risk．Cancer Res，1996，56(17)：3915-3925．
9 Saarikoski ST，Husgafvel-pursiainen K，Hirvonen A，et al．Localization of CYP1Al mRNA in human lung by in situ hybridization：comparison with immunohistochemical findings．Int J Cancer，1998，77(1)：33-39．
“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文”。
