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【摘要】 目的 探讨番茄红素联合α-生育酚对晶状体氧化损伤进行药物治疗的可行性。方法 体外培养正常大鼠晶状体，按随机分组原则将大鼠晶状体分为以下8组：空白对照组(A)，过氧化氢处理组(B)，过氧化氢和不同浓度番茄红素(1 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L)处理组(C1、C2、C3)，过氧化氢和不同浓度番茄红素(1 μmol/l、5 μmol/L、10 μmol/L)联合α-生育酚处理组(D1、D2、D3)。紫外分光光度计测定晶状体组织的总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的变化。结果 培养24 h结束后，不同浓度番茄红素处理组及不同浓度番茄红素联合α-生育酚用药组SOD、CAT活性和GSH、T-AOC含量均显著高于过氧化氢处理组，MDA含量均显著低于过氧化氢处理组，经统计学分析，差异有显著统计学意义(P[1]，目前在世界范围内治疗白内障的措施仍以手术或植入人工晶体为主要复明手段。但手术治疗也会出现各种各样的并发症比如后发障的形成，手术源性散光，最重要的是术后患者丧失了晶状体的调节作用，而影响患者的生存质量。因此，寻求有效治疗和预防白内障的药物，为眼科界多年来追求的目标。目前认为氧化损伤是诱发白内障的主要因素，而Li WC等[2]研究认为，晶状体上皮细胞凋亡是除先天性白内障以外的所有类型白内障形成的细胞学基础。本研究应用番茄红素单独或联合α-生育酚作用于离体氧化损伤晶状体，观察其治疗效果，为临床用药提供实验依据。
1 材料和方法
1．1 实验动物 健康Wistar大鼠，雌雄不限，体质量250~300 g。购自山东大学实验动物中心。
1．2 主要仪器与试剂 苏州YZ20PS眼科手术显微镜及眼科器械，美国NV2500E型二氧化碳细胞培养箱，德国BP-211G型电子天平，上海UV-754型紫外分光光度计，美国BD公司FACScan流式细胞仪，苏州安泰空气技术有限公司BHC-1300IIA/B3超净工作台。RPMI1640培养液(美国Gibco公司)，番茄红素(LY)(华北制药有限公司批号041202 纯度90%)，使用时用无水乙醇稀释成不同浓度的应用液，1 mol/lα-生育酚(北京硕康医药有限公司批号050401 纯度99%)使用时用无水乙醇稀释。总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所
1．3 离体培养大鼠晶状体 过量乙醚麻醉致死后眼部碘伏消毒，无菌状态下取出眼球，用含500 μ/ml的青霉素生理盐水冲洗眼球后置于含青霉素80万U，庆大霉素8万U的生理盐水500 ml中，1 min后取出，在手术显微镜下由后极部剪开巩膜，小心摘出晶状体，生理盐水冲洗后放入24孔细胞培养板，每孔加入含青霉素100 U/ml,链霉素100 μg/ml及含10%胎牛血清的1 640培养液2 ml。置入37℃，5%CO2培养箱内培养6 h，取透明晶状体备用。
1．4 实验分组及处理 采用随机数字表法将上述透明晶状体进行随机分组，每组10只晶状体。分为空白对照组(A)，H2O2处理组(B)，H2O2和不同浓度番茄红素处理组(C组：C1、C2、C3)，H2O2和不同浓度番茄红素联合α-生育酚处理(D组：D1、D2、D3)，A组：加入1 640培养液2 ml，同时加入青霉素及链霉素，使其终浓度分别为100 U/ml、100 μg/ml。B组：在A组的基础上再加入3%H2O2 4．5 μl，使其终浓度为�2 mmol/L�。C组：在B组的基础上，再加入不同浓度的番茄红素,C1组加入1 mmol/l的番茄红素母液2 μl，使其终浓度为1 μmol/l,C2组加入5 mmol/l的番茄红素母液2 μl，使其终浓度为5 μmol/l，C3组加入5 mmol/l的番茄红素4 μl,使其终浓度为10 μmol/L。D组：在C组各小组的基础上，加入α-生育酚，使其终浓度为0．01 mol/L。每6 h更换一次含相应浓度的H2O2和不同浓度的番茄红素及α-生育酚的培养液。
1．5 检测晶状体的组织化学变化 于24 h培养结束后，每组晶状体选择7只，从培养液中用圈匙取出，置于预冷的0．9%生理盐水中漂洗后，用滤纸吸干称重，放入玻璃匀浆器中，加入晶状体质量9倍的0．86%冷生理盐水，制成10%的组织匀浆。500 rpm/min,离心10 min，取上清液严格按试剂盒说明测定各晶状体的MDA、T-AOC、SOD、GSH、CAT及蛋白含量。
1．6 统计学方法 本研究采用SAS6．12统计软件包应用方差分析对各组计量资料进行统计学处理，同组间两两比较采用SNK检验，以P0．05)，其余各组间差异均有显著统计学意义(P[6]。�
根据本研究结果，在过氧化氢存在的条件下,晶状体的SOD值为(4．847 3±0．682 1)，CAT值为(0．147 6±0．010 3)，两者的活性均明显降低。随着番茄红素浓度增加(1~5 μmol/L),晶状体的SOD值、CAT值增加。证明了体外补充番茄红素或与α-生育酚联合作用有明显提高晶状体抗氧化酶系统的活性，增加了抗氧化酶的保护作用机制，番茄红素通过增强机体的抗氧化酶活性来提高机体的抗氧化能力。番茄红素组或与α-生育酚联合用药组的GSH水平、T-AOC水平均明显高于氧化损伤组，表明在这两种药物存在的条件下，可以增强晶状体抗氧化能力，防止晶状体混浊的发生 。在过氧化氢存在条件下GSH明显耗竭，MDA的明显增高都增加了晶状体上皮细胞膜的损伤以及由此而导致的晶状体的混浊。晶状体SOD、CAT活性，GSH、T-AOC水平及MDA含量测定均显示防止晶状体混浊的作用LY 5 μmol/L联合α-生育酚效果更为明显，联合应用α-生育酚时，晶状体的混浊度较单独应用番茄红素时明显减轻，表明联合用药优于单独用药，增加番茄红素剂量达10 μmol/L时，抑制过氧化氢诱导晶状体混浊功能反而降低，这可能与高浓度番茄红素反而失去保护氧化损伤有关[3]。C2组与D1组间无明显差异，表明α-生育酚可以增强番茄红素的抗氧化能力，使低浓度的番茄红素发挥更好的抗氧化作用， 番茄红素可以使α-生育酚再生， 更有效的发挥清除自由基的作用。国内于文利[7]等研究发现该复合抗氧化剂具有协同清除自由基的作用。Mariella [8]等通过研究不同的抗氧化剂联合番茄红素对于人前列腺癌DU-145细胞生长的抑制作用，得出只有在生育酚存在的条件下可以增强番茄红素的抗氧化作用，可能的机制为生育酚和番茄红素分别影响不同的信号传导途径而导致该复合物的作用增强。�
关于番茄红素联合α-生育酚抑制晶状体氧化损伤的具体作用机制尚不清楚，尚需通过进一步的实验来研究其复合物的具体抗氧化机制。�
本研究结果显示，应用番茄红素或与α-生育酚联合应用可以有效抑制过氧化氢诱导的晶状体混浊，有望成为治疗或预防氧化性白内障的有效药物。�
参考文献
［1］ 张士元.我国白内障的流行病学调查资料分析．中华眼科杂志,1999,35(5)：336-339.
［2］ Li WC,Kuszak JR,Dunn K,et al.Lens epithelial cell apoptosis appears to be a common cellular basis for non-congenital cataract development in humans and animals.J Cell Biol,1995,130(1)：169-181.
［3］ Shu L,Miao L.Antioxidant and prooxidant effects of lycopene in comparison with-carotene on oxidant induced damage in Hs 68 cells.J Nutr Biochem,2000,11：548-554.
［4］ Javitt JC,Taylor HR.Cataract and latitude.Doc Ophthalmol,1994-1995,88(3-4)：307-325.
［5］ 李根林.Maillard 反应与白内障.国外医学眼科学册,1993,17(5)：284-287.
［6］ Buckley DJ.Effects of dietary antioxidants and oxidized oil on membranal lipid stability and pork product quality.Food Sci,1989，54：1193-1197.
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［8］ Mariella P,Hanspeter P，Daniel B,Angelo A.Lycopene in Association with a-Tocopherol Inhibits at Physiological Concentrations Proliferation of Prostate Carcinoma Cells.Biochemical And Biophysical Research Communications,1998,250(3)：582-585.
