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【摘要】 目的 探讨高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定复方维生素注射液A、E、K1含量的可行性。方法 采用HPLC法，C18色谱柱(150 mm×46 mm,5 μm)，流动相：甲醇-酒精(80∶20)，检测波长270 nm。结果 维生素A棕榈酸酯在125~125．5 μg/ml之间线性良好(r=0．999 9),平均回收率为99．38%，RSD为1．36%；
维生素E在125~125．5 μg/ml之间线性良好（r=0．999 9）,平均回收率为95．87%，RSD为0．95%。维生素K1在16．5~166．5 μg/m之间线性良好(r=0．999 8)，平均回收率为98．08%，RSD为1．57%。结论 HPLC法测定复方维生素注射液维生素A、E、K1的含量专属性强，灵敏度高，准确性好。
【关键词】高效液相色谱法；维生素A；维生素E；维生素K1
Determination content ofcompound vitamins A、E、K1 injection by high performance liquid chromatography
XI Ying.Department of Pharmacy,Affiliated Hospital of BengbuMedicalCollege,Bengbu ，Anhui233004，China
【Abstract】 Objective To determine the contents in compound vitamins A、E、K1 injection by high performance liquid chromatography(HPLC).Methods HPLC was used C18column(150 mm×46 mm,5 μm)was selected,the mobile phase was methanol-alcohol(80∶20).Detection was performed by UV with wavelength of 270 nm.Results A linearity of retinyl palmitate was obtained from 125 to 125．5 μg/ml with good correlation(r=0．999 9).The average recovery of retinyl palmitate was 99．38%,and RSD Was 1．36%.A linearity of vitamin E was obtained from 125 to 1251 μg/mlwith good correlation(r=0．999 8).The average recovery of vitamin E was 98．87%,and RSD was 0．95%.A linearity of vitamin K1 was obtained from 16．5 to 166．5 μg/ml with good correlation(r=0．999).The average recovery of vitamin K1 was 98．08%,and RSD was 1．57%.Conclusion The RP-HPLC is sensitive and accurate in determining thecontents in compound vitamin injection.
【Key words】Highperformance liquid chromatography；Vitamin A；Vitamin E；Vitamin K1
维生素(vitamin)是维持人体正常物质代谢和某些特殊生理功能不可缺少的低分子有机化合物，主要参与各种酶的组成，因其结构和理化性质不同，使其各具特殊的生理功能。复方维生素注射液可作为全营养静脉输液的添加剂,以满足每日的维生素需要[1]。近来有系统测定维生素的报道，但多数是报道纯品维生素的分离分析。本文应用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定复方维生素注射液A、E、K1含量，现作报告。
1 仪器与试剂
仪器：岛津LC-10A高效液相色谱仪系统，包括LC-10ATvp泵，SPD-10Avp紫外检测器，C-R8A色谱数据处理仪。色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(150 mm×46 mm，5 μm),不锈钢柱(Shin-pack CLC-ODS)。试剂：甲醇、酒精均为分析纯。维生素A棕榈酸酯对照品［由巴斯夫(中国)有限公司提供］；维生素E对照品、维生素K1对照品(由中国药品生物制品检定所提供)。复方维生素注射液样品批号：041204，041206，041208
(由上海第一生化药业有限公司提供)。
2 方法与结果
2．1 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱：shin-pack CLC-ODS C18柱(150 mm×46 mm,5 μm)。流动相：甲醇-酒精(80∶20)，检测波长270 nm，流速0．5 ml/min。进样量20 μl。在上述条件下，维生素A棕榈酸酯、维生素E和维生素K1的保留时间分别约为39．98、23．96、18．41 min。
2．2 对照品溶液的制备 避光条件下精密称取维生素A棕榈酸酯约62．5 mg、维生素E 625 mg、维生素K1 83．3 mg，置100 ml量瓶中，加无水酒精使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 ml置50 ml量瓶中，加无水酒精稀释至刻度，摇匀(临用前制备)。
2．3 供试品溶液的制备 避光条件下精密量取样品溶液1 ml，再精密加水1 ml，然后精密量取1 ml慢速上sep-pake18柱(预先用20%酒精洗涤)，推尽，精密量取无水酒精5 ml慢速洗脱，推尽，收集无水酒精液4 ml的洗脱液置容器中，备用。
2．4 专属性试验 按上述色谱条件和试验方法，取本品空白辅料1 ml照供试品溶液配制项下的方法制成空白辅料溶液，将上述对照品溶液、供试品溶液及空白辅料溶液各20 μl注入液相色谱仪，记录色谱。本方法能有效分离复方维生素注射液A、E、K1含量，且空白辅料对本品主药测定无干扰。
2．5 标准曲线的制备 取对照品，维生素A棕榈酸酯约6．25 mg、维生素E约625 mg和维生素K1约83．3 mg分别精密称定，置100 ml量瓶中；加无水酒精溶解，并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取该溶液1、3、5、7和10 ml置50 ml量瓶中，加无水酒精稀释至刻度，摇匀，分别量取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。分别以维生素A棕榈酸酯、维生素E和维生素K1 3种组分的浓度(C)为横坐标，以3种组分的峰面积(A)为纵坐标，计算回归方程，并绘制3种组分标准曲线，结果见表1。
2．6 精密度试验 取标准曲线项下同一浓度的对照品溶液，连续进样，根据各组分主峰面积分别计算进样精密度。以维生素A棕榈酸酯、维生素E和维生素K1 3种组分的峰面积计算进样精密度，相对标准偏差(RSD)分别为0．83%、0．87%、0．39%，表明该方法精密度良好。
2．7 稳定性试验 取含量测定项下同一浓度的样品溶液，于室温下自然放置，分别于0、1、2、4、6、8 h进样，测定维生素A棕榈酸酯、维生素E和维生素K1峰面积，以0 h主峰峰面积为100%，计算溶液的日内稳定性。维生素A棕榈酸酯、维生素E和维生素K1 3种组分平均含量分别为99．65%、99．34%、99．51%。表明样品溶液在室温条件下放置8 h基本稳定。
2．8 重现性试验 取同一批号复方维生素注射液(批号：041204)，照上述色谱条件的测定维生素A棕榈酸脂、维生素E和维生素K1的含量，共测定6次，计算含量及偏差。3种组分平均含量分别为95．6%、111．8%、98．3%，RSD分别为0．35%、0．41%、0．21%(n=6)。表明该方法测定复方维生素注射液3种组分的重现性良好。
2．9 回收率试验 取维生素A棕榈酸脂、维生素E和维生素K1对照品，按本品处方量的80%、100%、120%分别投料，按处方工艺制成注射液，照含量测定项下的方法，分别测定3批样品的含量，平均回收率分别为99．384%、98．87%、98．08%，RSD分别为1．36%、0．95%、1．57%，显示回收率较好。
2．10 样品的含量测定 取3批样品，按上述供试品溶液的配制方法进行样品的含量测定，分别取对照品溶液和供试品溶液各20 μl分别注入液相色谱仪，记录，以外标法计算含量，结果见表2。
3 讨论
高效液相色谱的基本原理是将经过提纯的试样用微量进样器注入加样系统，启动高压泵，试样被流动相带入色谱柱内，在一定高压下，样品在色谱柱内的填料(固定相)与流动相之间经过无数次的交换，并按物质在两者之间的分配系数、分子极性的大小以及所带的电荷数的多少等进行分离，通过检测器检测，根椐峰高或峰面积精确地计算出所测物质的含量[2]。以往测定复方维生素A、E、K1常用化学方法，只能进行单独测定，测试过程繁琐，需配制多种化学试剂，费工又费时，且灵敏度低，分析的血样需求量大，既不利于采集，也不利于远途携带，给工作带来诸多的不便。高效液相色谱法具有分辨率高、分析速度快、重复性好、精确度高等优点，已被广泛应用[3]。本文结果也表明，采用高效液相色谱法可有效地排除辅料的干扰，可以测定复方维生素注射液中维生素A、E、K1的含量 。
参 考 文 献
［1］ 陈风春，马金才.高效液相色谱测定脂溶性维生素的研究进展.中国卫生检验杂志，2003，13(5)：549-551.
［2］ 沈跃伟.高效液相色谱测定维生素A、D、E 研究进展.海军医学杂志，2001,22(1)：92-93.
［3］ 刘朝慧，刘军.高效液相色谱法测定血液中脂溶性维生素的含量.中国医院药学杂志，1997，17(2)：78-79.
