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【摘要】 目的 建立久积膏的定性定量方法。方法 采用TLC法对处方中的桂枝、石菖蒲、芥子进行鉴别和乌头碱的限量检查；用水蒸气蒸馏法测定挥发油的含量。结果 在TLC色谱中检出桂枝、石菖蒲、芥子；乌头碱的检出限量在5 μg以下；挥发油的平均含量为0.8%。结论 所建立的方法能够控制本品的质量。
【关键词】 久积膏；定性定量分析；乌头碱；限量检查
Study on qualitative and quantitative methods for jiuji ointment
Huang Ai-qun，He De-zhi. Baishi Orthopaedics Hospital in Jiangmen City of Guangdong Province,Guangdong 529000，China
【Abstract】 ObjectiveTo establish qualitative and quantitative methods for Jiuji ointment. Methods Guizhi,Shichangpu,Jiezi were identified and the limit of aconitine examined by TLC.The contents of volatile oil were analyzed by vapor distillation. Results Guizhi,Shichangpu and jiezi were detected by TLC. The limitd does of Aconitine was under 5 μg.The average content of volatile oil was 0.8%.Conclusion The established methods can be used for the quality control ofJiuji ointment.
【Key words】 Jiuji ointment；Qualitative and quantitative analysis；Aconitine；Limit examine
久积膏系由芥子、桂枝、石菖莆、防风、独活、生川乌、生草乌等药研制而成的外用软膏，为医院新制剂。功能祛湿散寒、活络舒筋、行瘀止痛。主治关节肿痛、筋骨不利、寒湿瘀聚。为了有效地控制其内在质量，采用薄层层析法对本品中的芥子、桂枝、石菖蒲进行了薄层鉴别和乌头碱的限量检查；采用水蒸气蒸馏法测定了本品挥发油的含量［1，2］。
1 仪器与试液
ZF-2 g型三用紫外仪(上海市安亭电子仪器厂)；桂皮醛对照品(批号：111710-200513)、石菖蒲对照药材(批号：121098-200403)、芥子碱硫氰酸盐对照品(批号：111702-200501)、乌头碱对照品(批号：110720-200410)均由中国药品生物制品检定所提供；化学试剂均为分析纯；久积膏由本院制剂室提供，批号：090315、090318、090321。
2 薄层鉴别［3，4］
2.1 桂枝
取本品50 g，照挥发油测定法(中国药典2005年版一部附录X D甲法)蒸馏，自测定
器上端加入乙酸乙酯1 ml，缓缓加热至沸，并保持微沸约2 h，放冷，分取乙酸乙酯层，作为供试品溶液。按处方量称取除芥子外的其他药材，另取桂皮醛对照品加乙酸乙酯制成每1 ml含1 μl的溶液，作为对照品溶液。按处方量称取除桂枝外的其他药材，照制备工艺的方法制成缺桂枝的空白样品，按供试品溶液制备方法制成缺桂枝的阴性溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取对照品溶液2 μl，供试品溶液及阴性样品溶液各10 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(17�∶�3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。
2.2 石菖蒲
取石菖蒲对照药材0.5 g，按桂枝供试品方法制备成对照药材溶液。按处方量称取除石菖蒲外的其他药材，照制备工艺的方法制成缺石菖蒲的空白样品，按供试品溶液制备方法制成缺石菖蒲的阴性溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取桂枝鉴别项下的供试品溶液及石菖蒲阴性样品溶液各10 μl，对照药材溶液3~5 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60℃~90℃)-乙酸乙酯(9�∶�1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(254 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。
2.3 芥子
取本品20 g加50%乙醇50 ml，加热回流30 min，取出，立刻冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取芥子碱硫氰酸盐对照品，加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方量称取除芥子外的其他药材，按照制备工艺的方法制成缺芥子的空白样品，按供试品溶液制备方法制成缺芥子的阴性溶液。按照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各10~15 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5�∶�3�∶�1�∶�0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性无干扰。
3 乌头碱的限量检查
3.1 展开剂的选择 选用4种展开系统分别对乌头碱标准品和久积膏进行展开，展开系统分别为：①乙醚-氯仿-甲醇(1�∶�2�∶�1)。②氯仿-甲醇-水(65�∶�15�∶�10)下层。③甲苯-乙酸乙酯-二乙胺(5�∶�2�∶�1)。④甲苯-乙酸乙酯-二乙胺(14�∶�4�∶�1)。以上4种展开系统展开后均喷以稀碘化铋钾试液，观察图谱可知，4种展开剂对乌头碱标准品均可顺利展开，但展开剂①、展开剂②、展开剂③中久积膏分离效果不好，展开剂④的分离效果好。
3.2 乌头碱标准检出限量的确定 照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取乌头碱对照品溶液1、3、5、7、9 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(14�∶�4�∶�1)
为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。3 μl橘红色斑点较浅，7 μl橘红色斑点较深，所以乌头碱对照品溶液点样量确定为5 μl。
3.3 乌头碱限量的确定 取供试品(15 g→2 ml)1、3、5、7、9 μl，与标准品5 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(14�∶�4�∶�1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。实验结果表明：当点样量增至5 μl时，在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点，小于对照品的斑点，即检出限量在5 μg以下。
3.4 乌头碱的限量检查 取本品15 g，加浓氨试液10 ml，搅匀，加甲醇100 ml，加热回流30 min，取出，立即冷却，滤过，容器及滤渣用甲醇30 ml洗涤，洗液与滤液合并，蒸干，残渣加盐酸溶液(4→100)50 ml分次溶解，合并盐酸提取液，滤入分液漏斗中，容器及滤渣用盐酸(4→100)30 ml洗涤，洗液与滤液合并，用浓氨试液调pH至9~10，加入无水乙醚振摇提取3次，20 ml/次，合并乙醚液，挥干，残渣加无水乙醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取乌头碱对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述二种溶液各5 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-二乙胺(14�∶�4�∶�1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点，应小于对照品的斑点，或不出现斑点。
4 挥发油含量测定
按(《中国药典》2005年版一部附录X D甲法)测定，取本品60 g，加水300 ml，蒸馏5 h，计算挥发油的含量，并依法对三批产品进行了测定，结果如下。
5 讨论
5.1 本品为外用软膏剂，含基质约为80%，所以鉴别时，取样量较大；桂枝、石菖蒲鉴别中采用水蒸气蒸馏法提取挥发油制备供试品，芥子鉴别中用50%乙醇提取制备供试品，能较好的将基质与被鉴定的物质分离。
5.2 本品中有生草乌、生川乌，所含的乌头碱有极强的毒性，口服0.2 mg即出现中毒反应［5］，为有效控制本品的质量并确保其安全用药，我们采用薄层层析法控制成品中乌头碱的限量，经实验确定了最佳的提取方法和薄层展开系统，结果表明方法灵敏，重现性好，无干扰，可以用于控制本品中的乌头碱限量检查。乌头碱属双酯类结构的生物碱不稳定，极易水解，所以乌头碱对照品宜新鲜配制。
5.3 本品为外用制剂，处方中的防风、石菖蒲、丁香、羌活、白芷、独活、乳香、荆芥、桂枝所含挥发油在镇痛、抗炎方面发挥了重要的作用，所以建立了本品挥发油的含量测定方法，经三批样品测定，质量稳定。
参 考 文 献
［1］ 国家药典委员会.中国药典.1部.化学工业出版社,2005.
［2］ 王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994：202.
［3］ 陈德昌，鲁静，王宝琴.中药化学对照品工作手册.北京：中国医药科技出版社，2000:117.
［4］ 吕武清.中成药药材薄层色谱鉴别.人民卫生出版社,1997：98-151，356.
［5］ 王晓晖.关于《中国药典》中乌头碱限量检查法改进.中国现代中药，2006，8(12):11.
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