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【摘要】 目的：研究溃结安康汤对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织学影响及其作用机制。方法：健康wistar大鼠，随机分为空白对照组、模型组、补脾益肠丸组、SASP组、溃结安康汤组。TNBS/乙醇法建立溃疡性结肠炎大鼠模型。分组灌胃治疗后，检测溃结大鼠结肠组织学改变。结果： 模型组与正常组比较，病理积分明显升高，具有统计学意义(P＜0.05)。补脾益肠丸组、SASP组、溃结安康汤组与模型组比较，病理积分明显下降，具有统计学意义(P＜0.05)。溃结安康汤组大鼠结肠组织病理积分与补脾益肠丸组比较，病理积分下降，具有统计学意义(P＜0.05)。溃结安康汤组与SASP组比较，病理积分无显著差异，无统计学意义(P＞0.05)。结论：溃结安康汤可以对溃疡性结肠炎大鼠模型具有显著的修复溃疡作用。
【关键词】 溃结安康汤；溃疡性结肠炎；炎性细胞
溃疡性结肠炎是一种病因不明的弥漫性非特异性大肠炎症性疾病，主要累及直肠、乙状结肠，严重者可累及全结肠。溃疡性结肠炎主要侵及结肠粘膜和粘膜下层，引起粘膜充血、水肿、肠腺紊乱，基底膜断裂或消失；粘膜下层各种炎性细胞浸润，肠腺隐窝形成较小脓肿，继而形成溃疡。溃疡性结肠炎治疗效果的判定，除依据临床表现，还要依据组织学表现。故本实验通过中药溃结安康汤治疗溃疡性结肠炎大鼠模型进行组织学观察，探讨中药溃结安康汤治疗溃疡性结肠炎大鼠模型的疗效。
1材料
1.1实验动物
健康Wistar大鼠55只，雌雄各半（雌雄分笼饲养），体重200±20g，由辽宁中医药大学动物实验中心提供。
1.2 实验试剂
2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)，由美国Sigma公司生产，购于北京化学试剂公司；液体石蜡，10%甲醛，无水乙醇，购于国药集团化学试剂有限公司沈阳分公司；10%水合氯醛，生理盐水，购于辽宁省中医院门诊西药局。
1.3 实验仪器
超低温冰箱，型号：MDF-382E，日本制造；PENTAX Optio数码照相机，型号：Optio S5z，日本制造；荧光显微镜，OLYMPUS，日本制造；切片机，型号：AO-820，美国制造。
2方法
2.1模型建立
健康Wistar大鼠55只，适应性喂养1周，禁食不禁水24h。按性别分层、随机分为造模组（44只），对照组（11只）。10%水合氯醛(0.2ml/100g)腹腔麻醉。造模组：将直径2.0mm长15cm的输液管插入肛门内约8.0cm，注入TNBS/乙醇液（100mg/kgTNBS和50%的乙醇）0.25ml，用棉签堵住大鼠肛门，轻揉大鼠腹部1min，使TNBS/乙醇液均匀地与大鼠结肠粘膜接触，大鼠头向下倾斜45°，放置1min，保持平躺自然清醒。对照组：上述方法等量生理盐水灌肠。
2.2分组
造模组大鼠按性别分层后，随机分为4组：模型组、补脾益肠丸组、SASP组、溃结安康汤组，每组11只；对照组大鼠11只，为正常组。
2.3给药
造模第3天开始，正常组、模型组予生理盐水，日一次3ml灌胃；补脾益肠丸组予浓度0.2g/ml补脾益肠丸，18.6g/kg/d生药量，日一次3毫升灌胃；SASP组予浓度0.021g/ml SASP，0.31g/kg/d生药量，日一次3毫升灌胃；溃结安康汤组予浓度1.28g/ml溃结安康汤，19.2g/kg/d生药量，日一次3毫升灌胃，连续给药21天。
2.4取材和标本制备
给药第21天，取材前一天晚禁食不禁水24h，10%水合氯醛腹腔麻醉、固定、切开腹腔，从肛门以上2cm处，向上截取大鼠结肠组织6-8cm，沿大鼠肠系膜缘纵向剖开肠腔，用生理盐水冲洗干净，然后将截取的大鼠结肠组织平铺、固定。在病变最严重处剪取大鼠结肠肠管1cm左右，用干冰速冻，放至-80℃冰箱冷冻保存。再留取大鼠结肠组织病变最明显处组织若干，置于10%甲醛溶液中后固定48小时以上，再将结肠组织修成1×0.5cm的小块，梯度酒精脱水，经石蜡包埋后，组织横切片，用涂有多聚赖氨酸的载玻片捞片后，送辽宁中医药大学教学实验中心形态实验室检测。
2.5观察指标
显微镜观察各组大鼠结肠组织的病理改变
2.6大鼠结肠组织的病理评分标准
病理评分标准根据结肠组织学损伤的程度，用炎症、病变深度、隐窝破坏评分相加后与病变范围相乘表示，见表1。
2.7统计学分析
实验所得数据由统计软件spss11.0处理，数据描述均以平均值±标准差(X(－)±S)表示，采用单因素方差分析(one-way analysis of variance)，组间差异采用q检验。
3结果
3.1显微镜观察（HE染色）各组大鼠结肠组织表现
正常组：大鼠结肠粘膜表面光滑整齐，粘膜上皮结构清晰完整、粘膜无充血水肿、无炎性细胞浸润、无溃疡形成；粘膜下层宽窄适度亦无隐窝脓肿；结肠肠壁未见增厚，细胞间连接紧密，腺体排列整齐，血管形态清晰、结构正常，肌层整齐连续。
模型组：粘膜呈明显非特异性炎症，粘膜表层有大量上皮细胞脱落、结肠组织水肿、充血、缺损，见脱落的结肠粘膜组织上皮，线体组织结构破坏，粘膜层及粘膜下层坏死灶，可见大量炎性细胞浸润，腺体中杯状细胞消失，水肿，结构模糊。
补脾益肠丸组：粘膜炎性病变明显减轻，结肠组织基本恢复正常，粘膜充血、水肿明显减轻，溃疡处结肠粘膜组织上皮覆盖不全，炎细胞浸润减少，局部区域粘膜较薄，可见溃疡修复处，有新生上皮和腺体形成。
SASP组：溃疡处结肠粘膜组织上皮覆盖不全，炎细胞浸润减少，腺体杯状细胞恢复明显，局部区域粘膜较厚，可见修复的大小不一腺体。
溃结安康汤组：可见绒毛，水肿基本恢复、浸润的炎性细胞以消失，可见到少量杯状细胞。
3.2各组大鼠结肠组织病理积分比较见表2。
结果显示：模型组大鼠结肠组织病理积分与正常组比较，病理积分明显升高，经统计学处理，具有统计学意义(P＜0.05)；补脾益肠丸组、SASP组、溃结安康汤组与模型组比较，病理积分明显下降，具有统计学意义(P＜0.05)；溃结安康汤组与补脾益肠丸组比较，病理积分下降，具有统计学意义(P＜0.05)；溃结安康汤组与SASP组比较，病理积分无显著差异，无统计学意义(P＞0.05)。
4讨论
溃疡性结肠炎是一种慢性非特异性炎症性肠病，其原因不明，病变主要发生在结肠、直肠的粘膜及粘膜下层[1]，临床上以腹痛、腹泻、粘液血便为主要症状[2]。本病常呈慢性迁延过程，反复发作，可导致严重并发症，预后较差，我国近年发病率有显著增高趋势[3]。
溃疡性结肠炎可归属于中医“休息痢”范畴[4]，本病由于慢性久痢，正气已虚，邪气未尽，唯扶正祛邪是其正治。在溃疡性结肠炎的治疗问题上，本课题提出寒热并用，健脾益气、活血化瘀治疗溃疡性结肠炎的科学假说，为溃疡性结肠炎的治疗提供寒热并用，扶正祛邪的新思路。溃结安康汤为治疗溃疡性结肠炎的临床经验方，由人参、白�、茯苓、元胡、黄芩、胡黄连、当归、炙甘草、干姜、大枣共10味中药组成。方中寒热并用，扶正祛邪，具有健脾益气、活血化瘀的功效。
目前，中医药科研也利用动物模型进行实验研究，利用动物实验研究来探讨疾病在中医方面疾病的发病原因、病机、病变发展规律、确定诊断标准和治疗的方法以及新药研发等有着十分重要意义，它既能体现中医辨证论治特色，又能准确地反映中药的疗效。
本实验采用TNBS/乙醇溶液灌肠法建立溃疡性结肠炎大鼠模型，观察溃结安康汤对溃疡性结肠炎大鼠模型结肠组织学影响。
2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)是一种弱有机酸，属于半抗原，当与组织蛋白等结合后，形成全抗原，就可以诱发机体的免疫反应，从而导致溃疡性结肠炎。通过TNBS/乙醇溶液灌肠法建立的溃疡性结肠炎大鼠模型属于细胞免疫方法。
TNBS/乙醇模型是目前国内外较为公认和经常采用的溃疡性结肠炎模型。因为该模型制作简单，重复性好；制作成本低廉；溃疡性结肠炎病变持续时间长（可达8周）；模型不仅病理过程和病理形态改变与人类相类似，而且临床表现与人类溃疡性结肠炎相似，能够反映疾病的特点，因此许多学者利用它从不同的角度进行研究人类溃疡性结肠炎的发病原因、发病机理和临床治疗以及疾病预防研究等。
本研究显示，通过显微镜下观察各组大鼠结肠粘膜组织学改变，模型组大鼠结肠表现为程度不同的结肠各层组织出现急慢性炎症表现，因此认为溃疡性结肠炎模型制作成功。经过21d治疗，从溃疡性结肠炎大鼠结肠组织学的检测结果显示：溃结安康汤组可见绒毛，水肿基本恢复、浸润的炎性细胞以消失，可见到少量杯状细胞。与补脾益肠组、SASP组显微镜下表现比较，同时对各组大鼠结肠组织病理积分进行比较，经统计学处理，溃结安康汤对溃疡性结肠炎大鼠模型具有显著的修复溃疡作用，从组织学证明溃结安康汤治疗溃疡性结肠炎的有效性，因此有必要对其作用机制做进一步探讨，从理论上验证寒热并用，健脾益气、活血化瘀治疗溃疡性结肠炎的科学假说，从实践上指导临床医生用药，为溃疡性结肠炎的治疗提供寒热并用，扶正祛邪的新思路，对缓解患者病痛，防止溃疡性结肠炎复发等都有十分重要的意义。
5结论
溃结安康汤对溃疡性结肠炎大鼠模型具有显著的促进溃疡愈合，促进炎性细胞吸收的作用，从组织学证明溃结安康汤治疗溃疡性结肠炎的有效性。
参考文献
[1]武忠弼.病理学[M].人民卫生出版社，1990,292-293.
[2]黄乃健，王玉成，宋光瑞.中国肛肠病学[M].山东科技出版社，1996,895-913.
[3]中国炎症肠病协作组.3100例溃疡性结肠炎病例回顾分析[J].中华消化杂志，2006,26(6):368-372.
[4]王永炎，晁恩祥.今日中医内科（中卷）[M].北京：人民卫生出版社，2000，607-610.
