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【摘要】 目的 建立紫丁香苷含量的高效液相色谱法。方法 采用Agilent C18（5 μm，150 mm×4．6 mm）色谱柱，甲醇-水（1�∶�4）为流动相，检测波长为265 nm，流速0．8 ml/min。结果 实验表明，紫丁香苷采用高效液相色谱法峰面积与含量有良好的线性关系。结论 此方法适于紫丁香苷的含量测定，方法简便，准确，方法学验证好，能够有效的控制紫丁香苷的含量。�
【关键词】刺五加；紫丁香苷；HPLC
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现代药理研究表明[1]，刺五加具有抗疲劳的作用，其主要化学成分为苷类，而主要的具有生理活性的有效成分为紫丁香苷，因此选择紫丁香苷作为控制刺五加类药品的指标成分，参照有关文献[2-3]，建立高效液相色谱法测定刺五加注射液的含量，经方法学考察，此方法分离效果好，具有良好的准确性、重现性。�
1 仪器与试药�
仪器：岛津LC-2010A型高效液相色谱仪；岛津UV-2501型紫外分光光度计。�
色谱柱：Agilent C18（5 μm，150 mm×4．6 mm）。�
试剂：甲醇为色谱纯，水为蒸馏水，其他试剂均为分析纯。�
对照品：紫丁香苷对照品（11574-200201）为中国药品生物制品检定所提供。�
刺五加注射液：黑龙江完达山药业股份有限公司。�
2 实验方法与结果�
2．1 色谱条件的选择�
2．1．1 色谱柱 前后试用了三根柱子：Agilent C18（5 μm，150 mm×4．6 mm）色谱柱、Kromasil C18（5 μm，250 mm×4．6 mm）色谱柱。结果，均可达到较好的分离效果。�
2．1．2 流动相的选择 根据文献报道[4-7]，先后试用了两种流动相系统：甲醇-水系列和甲醇-水-冰醋酸系列。结果，甲醇-水-冰醋酸系列在应用了不同的比例后，发现杂质峰多；而甲醇-水系列的杂质峰相对较少，通过不同比例的选择，确定1�∶�4的比例分离效果最好，保留时间适中。�
2．1．3 检测波长的选择 通过紫外扫描及DAD检测，紫丁香苷在220 nm、265 nm处有最大吸收，由于220 nm处测定有干扰，故选择265 nm为检测波长。�
2．1．4 流速的选择 试用了3个流速：0．8、1．0、1．2 ml/min，均可获得满意的分离效果。�
综上所述，在甲醇-水（1�∶�4）为流动相，检测波长为265 nm，流速0．8 ml/min，紫丁香苷与样品中其他组分色谱峰可基线分离。�
2．2 方法学验证 �
2．2．1 仪器精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μl，重复进样6次，紫丁香苷峰面积值的RSD为0．08%，实验证明，精密度良好。�
2．2．2 线性关系的考察 精密量取对照品溶液0．5、1．0、2．0、3．0、4．0、5．0 ml，分别置25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，配制成浓度分别为0．019 98、0．039 96、0．079 92、0．119 88、0．159 84、0．199 80 mg/ml的对照品溶液。精密量取上述6种溶液各10 μl进样，记录色谱图，测定其峰面积。以峰面积值（A）对进样量（C）进行回归得标准曲线方程。�
A=2 548 545．093C+48 549．6，r=0．999 8。�
并以峰面积值（A）对进样量（C）作图，得一直线�
以上结果表明，在0．199 8~1．998 0 μg范围内，紫丁香苷峰面积值与进样量有良好的线性关系。�
2．2．3 重复性实验 按含量测定方法，取同一批号样品，分别制备6份样品供试液，测得峰面积值并计算含量，RSD为2．9%，实验证明，重复性良好。�
2．2．4 准确度实验 取9份已知含量的样品，按本研究中样品制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪，以下列公式计算回收率，实验结果表明：回收率在95%~105%之间，加样回收良好。�
2．2．5 专属性实验 阴性实验 取阴性供试品溶液（溶剂）进样，结果表明，阴性供试品在紫丁香苷色谱峰位置处无相应峰出现。�
2．2．6 耐用性实验
稳定性实验：取样品供试液，分别于0、2、4、8、16、24 h进样10 μl，测得样品中紫丁香苷峰面积值的RSD为0．70%，实验结果表明，样品供试液在24 h内稳定性良好。�
3 实验结论�
本实验采用了高效液相色谱法对刺五加注射液中紫丁香苷含量进行了研究，结果表明采用Agilent C18（5 μm，150 mm×4．6 mm）色谱柱，甲醇-水（1�∶�4）为流动相，检测波长为265 nm，流速0．8 ml/min的色谱条件可以有效的测定紫丁香苷含量，该方法简便，药液可以直接注入，无须任何处理，分离效果好，阴性对照无任何干扰，方法学验证表明该方法重现性好，线性好，精密性好。因此本实验建立的方法可以准确，快速的对紫丁香苷进行定量分析。�
参 考 文 献�
［1］ 曹克兰．刺五加国外实验研究．中草药，1980，11(6)：277.�
［2］ 许正斌．刺五加各部位有效成分的含量测定．中草药，1984，15(5)：32.�
［3］ 杨水新．高效液相色谱法测定刺五加注射液中紫丁香苷的含量．药物分析杂志，2001，21(1)：16.�
［4］ 陈光耀．反相高效液相色谱法测定刺五加片中紫丁香苷的含量．中国中药杂志，1999，24(8)：472.�
［5］ 刘莹．刺五加提取物中紫丁香苷、紫丁香树脂苷的HPLC测定法．中草药，2000，31(8)：587.�
［6］ 张世伟．刺五加提取物中紫丁香苷的HPLC测定法．中草药，1999，30(9)：660.�
［7］ 封士兰．高效液相色谱法同时测定刺五加中刺五加苷B、苷E0的含量．中国现代应用药学杂志，2001，18(2)：124.�
