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【摘 要】目的探讨抗SSB抗体对系统性红斑狼疮(SLE)诊断的敏感性和特异性,并了解其与SLE临床表现的关系。方法 采用线型免疫印迹（LIA）法检测SLE患者与对照组血清抗SSB抗体,并记录SLE患者的主要临床表现,分析其与抗SSB抗体的关系。结果 74 例SLE 患者血清中25．7%抗SSB抗体阳性,30例对照组仅3．3%阳性，抗SSB抗体在SLE中检测的敏感性25．7%，排除类风湿关节炎（RA）和原发性干燥综合征（pSS）后抗SSB抗体在SLE中检测的特异性为96．7%。抗SSB抗体阳性组的SLE 患者颊部红斑、脱发、浆膜炎、继发性干燥综合征（sSS）、周围血象减低、IgG升高、抗SSA60抗体阳性、抗SSA52抗体阳性及两者均阳性的发生率显著高于抗SSB抗体阴性组 ( P＜0．05) 。结论 抗SSB抗体对SLE的诊断有重要意义，与颊部红斑、脱发、浆膜炎、sSS、周围血象减低、IgG升高、抗SSA60抗体阳性和或抗SSA52抗体阳性有一定相关性。
【关键词】 SSB抗体；红斑狼疮,系统性；线型免疫印迹
Significance of anti-SSB in systemic lupuserythematosusSANG Dao-qian. The Affiliated Hospital of Anhui Bengbu Medical College, Bengbu 233004， China
【Abstract】 Objective To investigate the diagnostic specificiy and sensitivity of anti-SSB on systemic lupus erythematosus (SLE)，and to analyze the relationship between anti-SSB and clinical manifestations of SLE．Methods The line immuno assy(LIA) was used to measure the anti-SSB in serum of 74 SLE patients,30 patients with other rheumatic diseases．Results Of the 74 SLE patients,25．7% were seropositive for anti-SSB．Only 3．3% of 30 control patients were seropositive；The sensitivity and specificity of anti-SSB in SLE were 25．7% and 96．7%，respectively when rheumatoid athritis (RA) andprimary Sj�gren′s syndrome(pSS) were excluded．The incidences of malar rash，hair thinning，serositis and second Sj�grgen′s syndrome(sSS) in anti-SSB positive SLE significantly higher than those of anti-SSB negative SLE (P＜0．05)．The incidences of leucopenia，neutropenia，IgG hyperinmmunoglublinemia，anti-SSA60 positive,anti-SSA52 positive and bothanti-SSA60 and anti- SSA52 positive in anti-SSB positive SLE also significantly higher than those of anti-SSB negative SLE(P＜0．05)．Conclusion Anti-SSB is one of the valuable marker in diagnosis of SLE；anti-SSB may have a close relationship with malar rash，hair thinning，serositis，leucopenia，neutropenia,IgG hyperinmmunoglublinemia，anti-SSA60 positive，anti-SSA52 positive．
【Key words】 Anti-SSB；Lupus erythematosus,Systemic；Line immuno assy
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE) 是一种全身性自身免疫病,本病的病理过程中除T 细胞参与外,伴有多克隆的B 淋巴细胞的活化。患者血清中可出现多种自身抗体，抗SSB抗体是SLE患者血清中常见的抗体之一，本文采用线型免疫（line immuno assy,LIA）法检测SLE患者抗SSB抗体，并探讨了该项检查的临床意义。
1 资料与方法
1．1 研究对象 选择我院门诊或住院新诊断SLE患者74例，全部符合1982年美国风湿病学会(ARA)SLE分类诊断标准[1]且排除细菌感染。其中男3 例,女71例,年龄12～78岁,平均(33．16±14．73)岁。选择同期非类风湿关节炎(rheumatoid athritis,RA)非原发性干燥综合征(primary Sj�gren′s syndrome,pSS)的其他类风湿性疾病患者30例为对照组，其中强直性脊柱炎14例，多发性肌炎6例，皮肌炎3例，骨性关节炎3例，成人斯蒂尔病2例，硬皮病2例。
1．2 实验方法
1．2．1 抗SSB抗体检测 抗SSB抗体检测试剂盒购自德国Imtec 公司，应用LIA法检测患者血清中抗SSB抗体。重要步骤如下:反应槽中加入1孵育缓冲液湿润反应条，弃孵育缓冲液后，加入1∶100 稀释的血清1 ml室温孵育1 h，冲洗3 次后,加入1 ml 抗人IgG室温孵育30 min，再冲洗3 次后，加入1 ml底物显色剂,室温孵育10 min，冲洗1 次后，加入1 ml 终止液，室温孵育5 min，滤纸干燥反应条后，与标准模板对照读取结果。
1．2．2 实验室项目检测 红细胞（ RBC）计数、白细胞（WBC）计数、中性粒细胞（N）计数、淋巴细胞（L）计数、血小板（PLT）计数、ESR、CRP检查由我院检验科完成；ANA滴度采用间接免疫荧光法检测、抗ds-DNA抗体采用ELISA法检测。抗SSA60抗体、抗SSA52抗体的检测同抗SSB抗体检测。
1．3 SLE活动性判断 SLE病情活动性判断参照系统性红斑狼疮活动指数（systemic lupus erythematosus disease active index,SLEDAI）[2]。
1．4 观察项目 颊部红斑、盘状红斑、雷诺现象、关节炎、口腔溃疡、光过敏、脱发、浆膜炎（胸膜炎和或心包炎）、中枢神经受损、肾脏受损；继发性干燥综合征（second Sj�gren′s syndrome,sSS）；RBC计数、WBC计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、PLT计数、ESR、CRP免疫球蛋白、补体；ANA滴度、抗ds-DNA抗体、抗SSA60抗体、抗SSA52抗体。
1．5 统计学处理 计数资料采用χ2检验或Fisher′s检验，计量资料采用t或t′检验。数据处理辅以SPSS11．0 软件包完成。
2 结果
2．1 抗SSB抗体测定的敏感性与特异性 74例SLE患者抗SSB抗体阳性19例，阳性率为25．7%。30例对照组中1例成人斯蒂尔病抗SSB抗体阳性其他均为阴性。抗SSB抗体在SLE中的敏感性为25．7%，排除RA和pSS后抗SSB抗体在SLE中的特异性为96．7%。
2．2 抗SSB抗体阳性组和阴性组主要临床表现比较 见表1。抗SSB抗体阳性组脱发和浆膜炎的发生率明显高于阴性组，两组比较差异有统计学意义（P=0．018，P=0．035）。74例SLE患者伴有sSS14例，发生率为18．9%，抗SSB抗体阳性组sSS发生率（36．84%）明显高于阴性组（12．73%），两组比较差异有统计学意义(χ2=5．353，P=0．021)。
2．3 抗SSB抗体阳性组和阴性组主要检查比较 见表2。抗SSB抗体阳性组WBC下降、N下降的发生率 (63．16%，53．58%)明显高于抗SSB抗体阴性组(34．55%，21．99%)(χ2=4．749，χ2=6．418；P=0．029，P=0．011)。抗SSB抗体阳性组WBC（4．13±1．57）×10�9/L和N（1．20±0．39）×109/L计数低于阴性组（5．23±2．10）×109/L、（3．75±2．07）×109/L，两组比较差异有统计学意义（t=2．086，t=3．506；P=0．040，P=0．015）。抗SSB抗体阳性组IgG升高发生率明显高于阴性组，两组比较差异有统计学意义（P=0．042）。抗SSB抗体阳性组抗SSA60抗体阳性、抗SSA52抗体阳性及二者均阳性的发生率明显高于阴性组，两组比较差异有统计学意义（χ2=334，χ2=12．052，χ2=13．069，P=0．037，P=0．001，P=0．000）。C�3下降、C�4下降、IgA升高、IgM升高两组比较无统计学意义。抗SSB抗体阳性组SLEDAI（12．00±7．76）与抗SSB抗体阴性组者（10．98±8．19）差异比较无统计学意义，ANA滴度（取倒数）、抗ds-DNA抗体、ESR、CRP变化两组比较也无统计学意义。
3 讨论
Alspaugh 等[3]于1975年使用培养人淋巴细胞提取物检测pSS患者的血清时发现其提取物中含有两种新的核抗原,分别将其命名为SSA(Sj�gren,s syndrome type A) 及SSB(Sj�gren,s syndrome type B) 抗原。1979 年Alspaugh 实验室与Clark 实验证明SSB 抗原与1974 年发现的胞浆抗原La 是同一种物质,称之为SSB/ La 抗原。SSA和SSB蛋白同属于核糖核蛋白部分片段，SSB蛋白分子量为48 000,生物进化上高度保守，参与RNA聚合酶Ⅲ和一些mRNA的转录调控。SSB分子的氨基酸80～100位、220～240位和300～340位可能具有较强的抗原性[4]。
抗SSB抗体是SLE患者血清中常见的自身抗体之一，也是较早产生的自身抗体之一。一项前瞻性的研究[5]结果表明抗SSB抗体产生早于SLE症状出现和诊断，平均早于诊断确立（3．61±0．38）年，平均早于临床症状出现（2．83±0．43）年。症状出现前阳性率为34%，诊断前阳性率为34%。SLE确诊后阳性率为35%。提示抗SSB抗体是SLE发病过程的重要参与者，同时也提示抗SSB抗体在SLE病程中是比较稳定的自身抗体，本研究结果抗SSB抗体与SLEDAI无关支持了这一观点。本组患者SLE抗SSB抗体阳性率为25．7%，与前述差异较大，可能是由于检测方法不同所致。本研究表明在排除RA、pSS后抗SSB抗体对于诊断SLE仍具有较高的特异性达96．7%。因此，若患者抗SSB抗体阳性并排除了RA、pSS后应寻找诊断SLE的其他证据，一时不能诊断者应密切随访，以免漏诊，延误治疗。
有研究[6]表明抗SSB抗体参与SLE独特-抗独特网络的形成，而独特-抗独特网络在SLE的发病中的作用愈来愈受到学者们的关注，John等发现SSB抗原的互补肽在289～308 aa与结核杆菌、幽门螺旋杆菌、链球菌、埃希氏菌、疟原虫有相似或相同的氨基酸序列，提示抗SSB抗体与分子模拟机制可能有关。本研究表明抗SSB抗体与颊部红斑、脱发、浆膜炎有一定相关性，其机制不明，可能与局部抗原抗体复合物沉积或形成进而引起局部血管炎导致局部血管通透性增高或局部微循环障碍有关。
本研究发现WBC、N计数降低与SSB抗体相关。一直认为N计数降低与抗多核中性粒细胞抗体（polymorphonuclear neutrophils，PMN）有关，但抗PMN抗体的本质不明。新近HSIEH等[7]首次证实抗SSB抗体是抗PMN抗体的一种，同时研究认为抗SSB抗体不仅可以与PMN表面结合而且可以渗入PMN内，通过抗体依赖的细胞毒作用或活化诱导细胞死亡（activation-induced cell death，AICD）机制导致PMN吞噬功能下降和PMN凋亡加速。由于N占WBC的多数，因此WBC降低可能与抗SSB抗体有一定关系。
约有8%～30%SLE患并有sSS，原因不明。本研究发现抗SSB抗体阳性组和阴性组比较sSS发生率有统计学意义，sSS出现在抗SSB抗体阳性组高于SSB抗体阴性组。提示抗SSB抗体与sSS有关。本研究发现抗SSB抗体阳性组IgG免疫球蛋白显著升高，提示SLE患者有特异性分泌IgG型抗SSB抗体的B细胞克隆活化。
SSB分子和SSA60分子同属核糖核蛋白分子的不同片段，SSA52分子目前尚不能确定为核糖核蛋白分子的片段，可能与SSA60分子短暂结合。本研究表明抗SSB抗体常与抗SSA60抗体和或抗SSA52抗体同时出现，但其机制不明，有待于进一步研究。
参考文献
1 Tan EM，Cohen AS，Fries JF，et al．The 1982 revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus．Arthritis Rheum，1982,25：1271-1277．
2 Bombardier C,Gladman DD,Urowitz MB,et al．Derivation of the SLEDAI．A disease activity index for lupus pations．The Committee on Prognosis Studies in SLE．Arthritis Rheum，1992,35:630-640．
3 Alspaugh M,Maddison P．Resolution of the identity of certain antigen -antibody system in systemic lupus erythematosus and Sj�gren,s syndrome:an interlaboratory collaboration．Arthritis Rheum,1979,22：796-798．
4 邓安梅，仲人前，陈孙孝，等．自身抗原SS2B/ La 序列结构分析及抗原性预测．中国免疫学杂志,2000,16：471-473．
5 Melissa R,Arbuckle MD，Ph D,et al．Development of autoantibodies before the clinical onset of systemic lupus erythematosus．N Engl J Med,2003,349:1526-33．
6 John G，Routsiasa，Eleni Dotsikab,et al．Idiotypeanti-idiotype circuit in non-autoimmune mice after immunization with the epitope and complementary epitope 289-308aa of La/SSB：implications for the maintenance and perpetuation of the anti-La/SSB response．Journal of Autoimmunity，2003,21:17-26．
7 Sc Hsieh,HS YU,WW LIN,et al．Anti-SSB/La is one of the antineutrophil autoantibodies responsible for neutropenia and functional impairment of polymorphonuclear neutrophils in patients with systemic lupus erythematosus．Clin Exp Immunol,2003,131:506-516．
