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[摘要] 目的:探讨田七总皂甙对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响。方法:血小板悬液与田七总皂甙孵育5 min,然后用凝血酶(500 U・L-1)作用1 min,用NIKON TE2000�E荧光倒置显微镜观察血小板聚集情况。结果:田七总皂甙对凝血酶诱导的兔血小板聚集有抑制作用,当田七总皂甙的浓度分别为50、100和200 μmol・L-1时,对血小板1 min聚集的抑制作用随浓度的加大而增强。结论:田七总皂甙具有抗血小板聚集的作用。�
[关键词] 田七; 血小板聚集; 凝血酶; 兔�
[中图分类号] R331.143 [文献标识码] A [文章编号] 1671-7562(2010)04-0337-03�
doi:10.3969/j.issn.1671-7562.2010.04.003��
Effects of Panpax notoginseng on aggregation of rabbit platelets �
induced by thrombin��
CHEN Xiao�ping�1, LIU Wen�2, DING Hang�2
(1. Department of Biology, Guangdong Medical College, Zhanjiang 524023, China; 2. Institute of Biochemistry and Molecular Biology, Guangdong Medical College, Zhanjiang 524023, China)��
[Abstract] Objective: To study the effects of Panpax notoginseng on aggregation of rabbit platelets induced by thrombin. Methods: Suspensions of platelets were incubated withPanpax notoginseng for 5 min, and then were acted with thrombin (500 U・L-1) for 1 min. Platelet aggregation was analysed by inverted microscope(NIKON TE2000�E). Results: Panpax notoginseng inhibited the platelet aggregation induced by thrombin (500 U・L-1) in a concentration�dependent manner(50,100 and 200 μmol・L-1). Conclusion: Panpax notoginseng has inhibitory effect on platelet aggregation.�
[Key words] Panpax notoginseng; platelet aggregation; thrombin; rabbits��
田七(Panpax notoginseng),又称参三七、田三七、山漆、金不换等等,为五加科草本植物,主要产于云南、广西,贵州、四川、江西等省也有栽种。田七具有化瘀止血、消肿定痛的功效。《本草纲目》中记载:田七“味甘微苦,性平,无毒。主治止血散血定痛”。为探讨田七是否对血小板聚集也起作用,我们采用体外血小板聚集法,利用凝血酶为诱导剂,用荧光倒置显微镜研究田七总皂甙对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响。结果报道如下。�
1 材料和方法�
1.1 动物 �
大白兔4只,雌雄兼用,体重(2.0±0.2) kg,由广东医学院动物中心提供。�
1.2 药品和试剂�
凝血酶、 N-2-羟乙基哌嗪-N�-2-乙磺酸(Hepes)购自Sigma公司,其余为国产分析纯或生化纯试剂。�
1.3 仪器 �
NIKON TE2000�E荧光倒置显微镜,德国。�
1.4 方法�
参照文献[1],兔血用塑料管收集和用ACD(含86 mmol・L-1柠檬酸钠,111 mmol・L-1葡萄糖,53 mmol・L-1柠檬酸)0.15体积比抗凝,800 r・min-1离心10 min,离心2次,取上清,3 000 r・min-1离心15 min。沉淀中加Tyrode�Hepes缓冲液(140 mmol・L-1氯化钠,5 mmol・L-1氯化钾,1 mmol・L-1氯化镁,10 mmol・L-1 N-2-羟乙基哌嗪-N�-2-乙磺酸,10 mmol・L-1葡萄糖,pH 7.4)调节至血小板数为3×1011～4×1011 L-1。血小板聚集情况用NIKON TE2000-E荧光倒置显微镜观察。血小板悬液(0.2 ml)与药物孵育5 min,然后用凝血酶(500 U・L-1)作用1 min,观察其聚集情况。�
2 结 果�
显微镜下空白对照(生理盐水组,即不加凝血酶和田七)血小板松散(图1),凝血酶诱导的血小板聚集,血小板粘连成一片(图2),用田七总皂甙作用后,随着药物浓度的增加,血小板逐渐松散,没有聚集合粘连(图3~5)。�
3 讨 论�
目前血栓性疾病严重威胁着人类的健康,而血小板功能异常将使血液出现高凝倾向,血栓容易形成,促进了冠心病的发生和发展[2]。在止血、血栓形成的过程中,血小板活化起着重要的作用。过度激活的血小板不仅能介导血小板聚集,而且还能激活巨噬细胞促进粥样斑块的形成[3]。因此,抑制血小板聚集的发生,改变血液循环状态,对抑制血栓的形成和促进血栓的溶解很重要,对血栓性心脑血管疾病的防治也有重要意义,抗血小板聚集是有效防治缺血性心脏病的环节之一。鉴于此,国内许多学者从事中药特别是活血化瘀药物对血小板聚集影响的研究。�
研究血小板聚集情况的方法,一般都是采用血小板聚集仪来检测,然后通过计算其聚集率来观察血小板聚集情况,而本实验采用荧光倒置显微镜直接观察田七总皂甙对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响,结果直接明了,方法新颖。据文献[4]报道,田七在化瘀止血、消肿定痛、抗动脉粥样硬化等方面具有较强的生物活性,但对体外抑制血小板聚集的研究尚未见报道。本实验结果表明,田七总皂甙具有抑制凝血酶诱导血小板聚集的作用,随着田七总皂甙浓度的增大,对血小板聚集的抑制也增加,具有明显的抗凝血作用。田七抗血小板聚集的机制还有待于进一步的研究。
[参考文献]�
[1] LIU W, SONG Z H J, LIANG N C, et al. Inhibitory effects of sodium quercetin monosulfate on pig platelet aggregation induced by thrombin[J]. Acta Pharmacol Sin, 1999, 20(7): 623-626.�
[2] KAZUHISA A, IZUMI T, MASATO M, et al. Measuring platelet aggregation to estimate small intestinal ischemia�reperfusion injury [J]. J Surg Res, 2004, 122(2): 195-200.�
[3] 魏毅,张贵平.白芍总苷对血小板功能的影响[J].医学理论与实践,2004,17(8): 871-872.�
[4] 黄儒强,郭子杰,邓伟玲,等.田七中总黄酮含量的测定及其黄酮种类的初步鉴别[J].现代食品科技,2007, 23(3): 66-68.�
