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【摘要】 目的 探讨Bcl-2的表达与甲状腺癌的发生、发展及预后的关系。方法 应用免疫组化方法，以单克隆抗体鼠抗人Bcl-2标记77例甲状腺癌、58例甲状腺腺瘤、40例癌旁甲状腺组织和28例正常甲状腺组织。观察不同甲状腺组织中Bcl-2的表达，并比较其阳性率。结果 Bcl-2阳性反应见于甲状腺癌、甲状腺腺瘤及癌旁甲状腺组织。在甲状腺癌组织中Bcl-2阳性率为45.5％，高于甲状腺腺瘤组织(22.4％)(P=0．006)、癌旁甲状腺组织(17.5％)(P=0．003)和正常甲状腺组织(0)(P=0．000)。甲状腺未分化癌和滤泡状癌组织中Bcl-2的阳性率明显增高。存在淋巴结转移和临床Ⅲ、Ⅳ期病例中，Bcl-2的阳性率明显增高。结论 Bcl-2过量表达可能与甲状腺肿瘤的发生有关，癌组织中Bcl-2的表达可作为甲状腺癌预后的参考指标。�
【关键词】 甲状腺肿瘤；Bcl-2基因；原癌基因；基因表达；免疫组化��
Expression of Bcl-2 and its Significance in Thyroid Carcinoma
XIONG Shao-wei,WANG Ling,LEI Yun-peng,et al.Department of General Surgery, Peking University Shenzhen Hospital, Shenzhen 518036,China
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【Abstract】 Objective To investigate the expression of suppressor gene Bcl-2 in thyroid tumors and its relationship to the oncogenesis，development and prognosis of the tumor．Methods The Expression of Bcl-2 was analyzed by immunohistochemicalmethod in the tissues from 77 thyroid carcinomas，58 thyroid adenomas．40 thyroid tissues adjacent to cancer and 28 normal thyroid tissues．The positive expression rates in the different thyroid tissues were compared. Results Bcl-2 was expressed in 45.5％ of the thyroid carcinoma，22.4％ of the thyroid adenoma,17.5％ of the thyroid tissues adjacent to cancer and non in normal thyroid tissues．The positive expression rate of Bcl-2 in the thyroid carcinoma was significantly higher than that in the thyroid adenoma(P=0．006)，thyroid tissues adjacent to cancer(P=0．003)and normal tissues(P=0．000)．In thyroid carcinoma，undifferentiated carcinoma，follicular carcinoma，carcinoma with positive lymph nodes，and tumors with stage Ⅲand Ⅳ disease had significantly higher expression of Bcl-2．Conclusion The overexpression of Bcl-2 may be related to the oncogenesis and development of thyroid tumor．Bcl-2 might be a possible prognostic factor of thyroid cancer．�
【Key words】 Thyroid neoplasms；Bcl-2 gene；Proto-oncogenes；Gene expression；Immunohistochemistry
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甲状腺癌是常见的内分泌肿瘤，女性发病率高。临床甲状腺肿瘤中有5％~10％为甲状腺癌［1］。其中分化型甲状腺癌占90％，包括甲状腺乳头状癌和甲状腺滤泡状癌，未分化癌较为少见，其恶性程度高、预后差。国内资料显示我国甲状腺癌的发病率在明显增加［2］。近年来，甲状腺癌的相关基因和肿瘤标志物研究进展很快。研究证实［3,4］，Bcl-2基因是一种细胞凋亡抑制基因，最早发现于滤泡性B细胞性淋巴瘤中，其产物Bcl-2蛋白可抑制细胞凋亡，延长细胞生存期。本研究采用免疫组化技术，通过检测Bcl-2在甲状腺癌组织、甲状腺腺瘤组织、甲状腺癌旁组织及正常甲状腺组织中的表达水平，探讨Bcl-2在甲状腺癌组织中的发生发展过程中的作用，以揭示Bcl-2与甲状腺癌的生物学行为的关系及其预后关系。�
1 材料与方法�
1.1 材料
全部标本取自北京大学深圳医院普通外科2001年至2009年间手术治疗的甲状腺病例标本，其中：甲状腺癌77例(男28例，女8例，平均50岁)，58例甲状腺腺瘤(男22例，女36例，平均36岁)，同时取癌旁甲状腺组织40例(男10例，女30例，平均37岁，经病理检查确诊均无甲状腺癌浸润)；取正常甲状腺组织28例(男9例，女l9例，平均35岁)。对77例甲状腺癌按WHO标准组织学分类：乳头状癌55例，滤泡状癌l4例，未分化癌8例，按AJCC标准临床病理分期：I期30例，Ⅱ期23例，Ⅲ 期16例，Ⅳ期8例；其中，有淋巴结转移者33例，无淋巴结转移者44例。标本经10％ 福尔马林液固定、石蜡包埋，常规切片，60℃烤片2 h，37℃过夜备用。�
1.2 免疫组化试剂
Bcl-2鼠抗人单克隆抗体，为美国ZYMED公司产品。SP-9000通用型试剂盒为美国ZYMED公司产品。用已知Bcl-2阳性的扁桃体作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性空白对照。�
1.3 试验方法
切片脱蜡水化后，3％H�2O�2室温处理15 min，微波抗原修复，正常山羊血清室温孵育30 min，滴加一抗，4℃冰箱孵育过夜。滴加生物素标志的二抗，室温孵育30 min，滴加辣根过氧化酶标记的链亲和素室温30 min，DAB显色。经苏木精复染后，脱水、透明、封片。�
1.4 判断标准 Bcl-2定位于细胞膜及细胞质，以细胞膜及细胞质内出现黄色至深棕黄色颗粒为阳性细胞。无阳性细胞为Bcl-2阴性；有阳性细胞为Bcl-2阳性。所有标本均由两位病理医师采用盲法阅片，结果不一致时协调统一判断最终结果。�
1.5 统计学分析
所有数据采用SPSS 13.0统计软件包在电脑上进行统计分析，进行χ.2检验，以P≤0.05为差异有统计学意义。�
2 结果�
2.1 Bcl-2在不同甲状腺组织中的表达情况,见表1。�
光镜下Bcl-2阳性反应表现为细胞膜及细胞质染成棕褐色，未见棕褐色颗粒为阴性。Bcl-2阳性率在甲状腺癌为45.5％，高于甲状腺腺瘤(22.4％)(P≤0.01)及癌旁甲状腺组织(17.5％)(P≤0.01)，而正常甲状腺组织染色阴性。见表1。�
2.2 甲状腺癌中Bcl-2表达与甲状腺癌有关病理指标的关系，见表2。Bcl-2的表达程度与甲状腺癌组织学类型、淋巴结转移情况和临床病理分期有显著关系。在恶性度较高的未分化癌和滤泡状癌中，Bcl-2阳性率明显高于恶性度较低的乳头状癌；在有淋巴结转移病例或临床Ⅲ 、Ⅳ期病例，Bcl-2阳性率高于相应的无淋巴结转移和临床I、Ⅱ期病例，差异均有统计学意义(P
