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【摘要】目的：考察不同产地款冬花中总黄酮和芦丁的含量。方法：用紫外分光光度法法测定总黄酮含量，以HPLC法测定芦丁的含量。结果：12个不同产地款冬花总黄酮含量为6.43%～15.12%；芦丁含量为0.22%～0.95％。不同产地的款冬花总黄酮和芦丁含量有一定差异。结论：以总黄酮和芦丁两项指标来衡量，能更真实反映款冬花的品质，且方法简便，灵敏，准确。
【关键词】款冬花；总黄酮；芦丁；质量
款冬花来源于菊科植物款冬(Tussilago farfara L．)未开放的干燥花蕾[1]，主产于甘肃、河南、山西、陕西、重庆、河北等省[2]。具润肺下气，止咳化痰之功效，用于急、慢性支气管炎，肺结核，新久咳嗽、喘咳痰多、劳嗽咯血等证等症[1，3]。芦丁、槲皮素等黄酮类成分是款冬花的有效化学成分，其他还有倍半萜类、生物碱、挥发油及微量元素等[3，4]，因此本试验采用紫外分光光度法对十二个不同产地的款冬花进行了有效成分-总黄酮的含量测定，采用高效液相色谱法测定了总黄酮中芦丁的含量，为款冬花药材质量的综合评价和制定新的质量标准提供一些参考数据。
1仪器与试药
UV-1100型紫外-可见分光光度仪(上海天美科学仪器有限公司)，Agilent 1200高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，KQ-3200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），芦丁对照品(购自中国药品生物制品检定所)，款冬花不同产地样品见表1。甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1总黄酮的含量测定
2.1.1标准曲线制备对照品溶液制备：精密称取芦丁对照品2.18 mg，置10ml容量瓶中，加甲醇制成浓度为0.218 mg/ml的溶液，作为对照品溶液。
精密吸取芦丁标准溶液0.5ml、1.0ml、2.0 ml、4.0ml、6.0 ml、8.0ml、10.0ml分别置于25ml容量瓶中，各加水至10 ml，加5％亚硝酸钠溶液1.0ml，摇匀，放置6 min，加l0％硝酸铝溶液1.0ml，摇匀，放置6min，加10％氢氧化钠溶液10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min，以相应的试剂溶液为空白，在513nm波长处测定吸光度，以浓度(X)为横坐标，吸光度值(Y)为纵坐标，得标准曲线方程：Y =O.0117X + 0.0035，r =0.9999，其线性范围为4.36～87.2 µg/ml。
2.1.2 供试品溶液的制备取款冬花样品约1.0g，精密称定，加入20倍量45%乙醇，超声提40min，滤过，滤液置50ml容量瓶中，加入45％乙醇至刻度，摇匀，即得。吸取30µl待测样，按照2.1.1法测定吸光度，计算款冬花总黄酮得率。
2.1.3方法学考察精密度试验： RSD为1.08%。稳定性试验：每15min测定1次吸光度，RSD为2.27%，表明在150min内稳定。重复性试验： RSD为1.56%，说明重复性好。加样回收率试验：平均回收率为101.12 % ,RSD 为2.38%。
2.1.4样品测定取各个产地的款冬花药材1.0g，精密称定，按样品溶液制备方法制备，按
标准曲线制备项下同法操作显色后，测定其吸光度，计算总黄酮含量。结果见表l。
2.2 芦丁的含量测定
2.2.1 色谱条件色谱柱：Welchrom-C18 (250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸水（45：55）；检测波长：360 nm；流速：1.0 ml/min；柱温：室温；进样量：10μl。在此色谱条件下，款冬花样品中芦丁与其最相邻组分峰的分离度良好，结果见图1和图2。
2.2.2标准曲线制备精密吸取芦丁对照品溶液2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、12μl、20μl，依次注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积S 为横坐标，对照品进样量 X(μg)为纵坐标进行回归分析，得回归方程 S =14534 X -59.694，r =0.9999。结果表明芦丁在0.436～4.360μg 范围内，吸收峰面积与进样量线性关系良好。
2.2.3供试品溶液制备取各产地款冬花样品粉末约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.4方法学考察稳定性试验：RSD为1.24％，表明供试品溶液在24 h内稳定 ；精密度试验：芦丁峰面积的RSD为0.56％ ；重复性试验：测定峰面积和芦丁含量的RSD均小于1.17％ ；加样回收率试验：测得款冬花样品加样回收率范围在98.40％ ～101.63％，RSD为1.42% 。
2.2.5样品测定：分别取12批不同产地的款冬花供试品，按2.2.3项下制备供试液，在上述色谱条件下测定峰面积，按外标法计算含量。结果见表1。
3讨论
3.1本文对全国主产地的款冬花进行了UV、HPLC的质量考察，采用本文的方法，可有效地控制款冬花的质量。本实验可为款冬花的品质评价、质控标准制定、GAP实施和药材生产提供参考资料。
3.2不同产地总黄酮含量以甘肃灵台县的最高，达15.12% ，陕西榆林次之，购于青海的商品药材含量较低，只有6.43%；芦丁含量在0.22～0.95%，甘肃灵台县款冬花的芦丁含量最高达0.95%，重庆巫溪较低，仅含0.22%。从而证实了甘肃灵台和陕西榆林产为优质药材的名副其实。
3.3从测定结果来看，各产地药材款冬花总黄酮和芦丁含量变化较大；这可能与种植条件、贮存时间、产地生态环境等因素有关，有待于进一步考察。
参考文献
[1]国家药典委员会．中国药典[s]．一部，北京：化学工业出版社，2005：233.
[2]肖培根．新编中药志[M]．北京：化学工业出版社，2002：802.
[3]李仲藻，郭玫，余晓晖，等．用高效液相色谱法测定款冬花中芦丁的含量[J]．甘肃中医学院学报，2000，17(3)：21.
[4]刘可越，张铁军，高文远，等．款冬花的化学成分及药理活性研究进展[J]．中国中药杂志，2006，31（22）：1837.
