【www.zhangdahai.com--爱国演讲稿】
【摘 要】：目的：建立刺山柑果中腺苷含量的测定方法。方法：色谱柱PolarisC18－A 250mm×4．6mm，5μm，AB17，流动相：甲醇：水（15∶85），检测波长：260nm，流速1．0mL／min，柱温：30℃。结果：回归方程为Y＝206997300X＋113157．8（r＝0．9991 n＝5），平均回收率为104．6％，RSD＝4．51％，腺苷的含量为36．61mg／Kg（RSD＝2．89％，n＝5）。结论：本法简捷、准确，适用于刺山柑果中腺苷的含量测定。
【关键词】：刺山柑腺苷反相高效液相法
【中图分类号】R282．71；R284．1【文献标识码】A【文章编号】1007－8517（2008）08－0047－03
Determination of adenosine in fruit of Capparis spinosa L．with RP－HPLC
ZHOU Xiao－ying1CHEN Qiang2 SUN Yun 3
1．College of Pharmacy， Xinjiang Medical University， XinJiang， Urumqi， 830054；2．Serive center for Teaching and Research， Xinjiang Medical University， XinJiang， Urumqi， 830054；3．College of TCM，Xinjiang Medical University， XinJiang， Urumqi， 830054
Abstract ObjectiveTo establish a RP－HPLC method of determination of adenosine in fruit of Capparis spinosa L． Methods ODS column was Polaris C18－A250mm ×4．6mm，5μm，AB17，and the mobile phase consissted of methanol－water（15∶85）．The detecting wavelength was 260nm and The flow rate was 1．0mL／min．The column temperature was 30℃． ResultThe regression equation was Y ＝ 206997300X ＋ 113157．8（r＝0．9991 n＝5）， the average recovery was 104．6％，RSD＝4．51％，the content of adenosine was 36．61mg／Kg（RSD＝2．89％， n＝5）．Conclusion The method was simple，convenient and accurate for determination of adenosine in fruit of Capparis spinosa L．
Key word Fruit of Capparis spinosa Ladenosine RP－HPLC
刺山柑（Capparis spinosa L．）为白花菜科山柑属植物，维吾尔语称刺山柑果为开派，又称野西瓜、老鼠瓜、瓜儿菜、槌果藤、菠里克果和伯格－塔乌孜等，喜生于荒漠戈壁和低山坡石质沙土地处，在新疆、西藏等地以及阿富汗、巴基斯坦、前苏联中亚及北非和地中海沿岸均有分布。刺山柑果性温，具有祛风、散寒、除湿、消肿、止痛的作用，维吾尔医主要用于治疗风寒湿痹，脾胃寒痛，浮肿等疾病1。国内学者姜薇等对刺山柑果的化学成分研究表明其含有腺苷（Ⅴ）等活性成分2。腺苷是一种存在人体内的所有细胞中的内源性核苷，是一种很强的心血管活性物质，它使体循环血管扩张，引起血压下降，有镇静、催眠、抗癫痫作用3。国内外有关刺山柑果中腺苷的研究未见报道，本文首次采用反相高效液相法测定刺山柑果中腺苷的含量，为刺山柑果的药用开发提供一定的质量控制依据。
1 仪器与试药
高效液相仪（Varian 美国）、Prostar 50C工作站，325紫外检测器。RE52CS－2旋转蒸发仪（上海亚荣仪器厂）、BS110S分析天平（北京，赛多利斯）。
腺苷标准品（中国药品生物制品鉴定所879－200001），甲醇（色谱纯，天津市光复精细化工研究所），刺山柑果实干品（2007年6月采于新疆乌鲁木齐市南山，经新疆医科大学中医学院李永和主任药师鉴定）。
2 方法与结果
2．1 标准品溶液的制备 精密称取腺苷标准品6．0mg，加入色谱纯甲醇溶解，定溶到50ml容量瓶中即得储备液，取50μL加200μL色谱纯甲醇稀释为0．024mg／mL浓度备用。
2．2 供试品溶液的制备 将刺山柑果实捣碎并过40目和60目的药典筛，取中间粉末放在真空干燥箱内（50℃，24h）烘干至恒重，精密称取刺山柑粉末2．5g，用8倍量的甲醇超声三次，每次20min，过滤并合并滤液，浓缩至0．1g／mL备用。
2．3 定性鉴别 用定量点样器吸取15μL样品液，点于10×20cm薄层板上，以氯仿－乙酸乙酯－异丙醇－水（8∶2∶6∶0．5）为展开剂，以腺苷标准品为对照，直立上行展开。在紫外灯254nm下检测后，发现在相同的位置有相同颜色的斑点，刮取与标准品Rf值一致的斑点，置于10mL的带盖试管中，精密加入4mL70％的乙醇，剧烈震荡2min后，以10000r／min离心10min小心吸取上清液，得测试样品液，以同样的方法制的标准品液。测试样品液和标准品液在200～600nm范围内进行紫外扫描的紫外图谱，可知样品紫外吸收图和标准品重合良好，确定最大吸收波长为260nm。
2．4 色谱条件 色谱柱：PolarisC18－A 250mm×4．6mm，5μm，AB17；流动相：甲醇：水15∶85；检测波长为：260mm；流速：1．0mL／min；柱温： 30℃；进样量：5μL。取腺苷对照品溶液和样品溶液，在上述色谱条件下测定。（结果见图1）由图谱可知，样品在腺苷出峰时间区域没有干扰峰出现，故对腺苷的测定无干扰作用。精密吸取腺苷对照品2．5、5、7．5、10、12．5μL，按上述色谱条件，分别进样，测定峰面积，以峰面积积分值y为纵坐标、腺苷量x为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y＝206997300X＋113157．8，r＝0．9991。线性范围6μg～36μg。
2．5 精密度试验 取腺苷对照品溶液，在同一色谱条件下，重复进样5次，腺苷峰面积积分值的RSD＝1．59％。
2．6 重现性试验 按供试品溶液制备的方法分别制备3份供试样品，平行测定，RSD＝4．2％n＝3。
2．7 稳定性试验 取同一批次供试品溶液5份，在常温下放置12h，每间隔2h测定1次，连续共测定6次，RSD＝3．1％。
2．8 回收率试验 精密量取已知浓度的测试样品溶液3份，分别精密加入一定量腺苷标准品溶液，按供试品溶液的制备方法制备，测定，计算回收率。平均回收率为104．6％，RSD＝4．5％。
2．9 样品测定 吸取腺苷供试品溶液5μL，分别进样，测定，并将其代入标准曲线回归方程分别计算出测试样品中腺苷的浓度，经换算刺山柑果中腺苷的含量为36．61mg／Kg，RSD％＝2．89％。（结果见表1）
3 讨论
本文采用反相高效液相色谱测定刺山柑果中腺苷的含量，操作简便易行，可用于刺山柑果的质量控制。刺山柑果经超声提取，得到的供试品溶液和标准品溶液的反相HPLC图谱完全一致，表明测试样品中含有腺苷，并从文献中获得支持，其它成份无干扰。刺山柑的药理研究表明有降血糖血脂，抗菌，杀虫，保肝，抗炎，抗氧化等作用4。维吾尔医主要用刺山柑治疗痛风、风湿性关节炎等疾病，有较好的疗效5，6。刺山柑有较广泛的药学用途和经济价值，有待于我们进行深入研究。
参考文献
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（收稿日期：2008．6．30）
