【www.zhangdahai.com--环保公文】
【摘 要】：目的：研究痹痛定胶囊对大鼠佐剂性关节炎病变的影响。方法：选择Freund＇s完全佐剂复制佐剂性关节炎AA大鼠模型，观察痹痛定胶囊对大鼠右足跖肿胀度、大鼠血清PGE2、CRP值的影响。结果：痹痛定胶囊对大鼠足跖肿胀有明显的抑制作用，此作用较正清风痛宁强；能显著降低大鼠血清CRP、PGE2值，与正清风痛宁组比较，差异不显著（P＞0．05）。结论：痹痛定胶囊对关节炎具有治疗作用，其作用机理与抑制血清CRP、PGE2的产生有关。
【关键词】：痹痛定胶囊佐剂性关节炎实验研究
【中图分类号】R684．3；R944．5【文献标识码】A【文章编号】1007－8517（2008）08－0038－03
痹痛定胶囊是以临床经验方为基础，采用现代中药制备工艺研制的中药复方有效成分提取物制剂，具有益气、祛风、通络、止痛之功，用于治疗类风湿性关节炎疗效较好。为进一步验证其抗炎作用，特开展痹痛定胶囊治疗类风湿性关节的实验研究，现将实验结果总结如下。
1 材料
1．1 动物：WISTAR大鼠60只，体重200±20g，雌雄各半；饲料：固体颗粒鼠饲料。由同济医学院实验动物学部提供。
1．2 药物：试验组：痹痛定胶囊［痹痛定胶囊由黄芪、清风藤、全蝎组成，剂量：3．56g／粒按生药计，武汉市中医医院药剂科提供，批准文号：鄂药制字号：（2001）第BZ05－039号］。对照组：正清风痛宁片（湖南正清药业有限公司提供，批准文号：国药准字Z20010174，批号：0501104）。
1．3 试剂：卡介苗素，由上海生物制品研究所提供，批号：200404001；液体石蜡油，由武汉中南化工试剂有限公司提供，批号：20040421；羊毛脂，上海三蒲化工有限公司，批号：20040107。大鼠CRP试剂盒ELS法，进口分装；大鼠PGE2试剂盒ELS法，进口分装；由上海森雄生物制品有限公司提供，购自美国公司。
1．4 仪器：2ml毛细玻璃管排水法测定体积装置，自制。ELX800酶标仪美国。
2 方法
2．1 模型复制：取冻干卡介苗素1支50mg， 80℃、1h灭活，混入灭菌液体石蜡油和羊毛脂21的混合物10ml中，制成Freund＇s完全佐剂。取体重200±20g大鼠，以Freund＇s完全佐剂在每鼠右后足跖皮内注射0．05ml致炎，复制佐剂性关节炎AA大鼠模型。造模后大鼠均出现不同程度的体重减轻，食欲下降，皮毛失去光泽，关节肿胀，跛行，耳廓充血，皮下结节表现，结合上述造模成功的筛选指针，可确定动物造模成功。
2．2 分组：取大鼠60只，体重200±20g，雌雄各半，随机分为6组，取其中的1组大鼠作正常对照。具体分组情况如下：
A组：正常对照组简称：正常组；
B组：生理盐水对照组简称：模型组；
C组：正清风痛宁对照组简称：正清风痛宁组；
D组：痹痛定胶囊大剂量治疗组简称：大剂量组；
E组：痹痛定胶囊中剂量治疗组简称：中剂量组；
F组：痹痛定胶囊小剂量治疗组简称：小剂量组。
2．3 给药剂量：
2．3．1痹痛定胶囊：成人常用量：口服，3次／日， 3粒／次，共计2．7g按生药量计32g。根据实验大鼠与人的体表面积比例系数换算，确定大鼠服药剂量32gkg－1．d－1（中剂量；在此基础上，将剂量×1／2，即16g／kg／d小剂量；将剂量×2，即64gkg－1．d－1大剂量。取胶囊内药粉，加蒸馏水配成浑悬液，浓度为0．8g／ml，1．6g／ml，3．2g／ml。
2．3．2 正清风痛宁片剂：成人常用量：口服，每日60～120mg。根据实验大鼠与人的体表面积比例系数换算，确定大鼠服药剂量为60mgkg－1．d－1。取正清风痛宁片剂，研磨成细粉后加入双蒸水，配置成混悬液，浓度为3mg／ml。
2．4 试验方法：
2．4．1取体重200±20g大鼠，雌雄各半，随机分为6组，其中5组分别灌胃给药，每日1次，连续5天，第6天，分别测量大鼠右足跖容积后，复制AA模型，1小时后，再次给药1次，于造模后第3、6、18、24h各再次测定大鼠右足跖容积，以造模前后容积之差值为肿胀程度。另1组大鼠不作处理，作正常对照。
2．4．2：取造模1周后的动物，分别按组灌胃给药，给药体积4ml／200g，每日1次。给药21日后，以戊巴比妥钠麻醉大鼠，股动脉放血处死动物。取血进行相应检测。
2．5 血清指针检测：取血5ml，静置30分钟，放入冷冻离心机，2500转／分离心15分钟，取血清，按试剂盒说明书要求，检测血清CRP、PGE2含量。
3 统计方法
方差分析，组间比较Q检验。
4 结果
4．1造模后大鼠体征变化 造模后大鼠均出现不同程度的体重减轻，食欲下降，皮毛失去光泽，关节肿胀，跛行，耳廓充血，皮下结节表现。
4．2 对大鼠佐剂性关节炎原发病变的影响（结果见表1）注射佐剂造模后，大鼠出现明显炎性反应，右后足跖逐渐肿胀，于造模后18h达到高峰，随后开始下降。痹痛定胶囊各剂量组对（AA）大鼠原发性足跖肿胀均有明显的抑制作用，与正清风痛宁组比较，差异显著（P＜0．05）。提示，痹痛定胶囊对（AA）大鼠原发性关节炎具有抑制作用，此作用较正清风痛宁强。
4．3 对大鼠佐剂性关节炎原发病变的影响（结果见表2）。大鼠造模后，血清IL－1β、TNF－α、CRP、PGE2值显著升高。痹痛定胶囊能显著降低血清IL－1β、TNF－α、CRP、PGE2值，与正清风痛宁组比较，差异不显著（P＞0．05）。提示，痹痛定胶囊能明显改善（AA）大鼠症状，调节免疫状态，抑制细胞免疫因子生成，对关节炎具有治疗作用，对血清PGE2、CRP值的抑制作用与正清风痛宁相似。
5 讨论
滑膜炎症是类风湿性关节炎Rheumatoid arthritis，RA的重要病理过程，PGE2作为一种炎症介质在滑膜炎症病理过程中发挥着重要作用。PGE2可引起小血管扩张，降低血管张力，增强毛细血管通透性，诱导血小板聚集和血栓素TXA2合成，下调I胶原c I和上调Ⅱ胶原c II的合成，提高痛觉敏感性，并具有致热原作用，从而引起炎症反应性水肿、渗出、局部红斑和充血而发红、疼痛和发热。降低PGE2的表达将减轻局部的炎症反应。CRP是一种急性期反应蛋白，主要由TNF、II－l和IL－6及前例腺素能介导CRP的生成，正常人血中CRP含量很低一般＜10mg／L，在急性炎症时可在6～12h内上升达100倍，并在治疗后或缓解期迅速下降，RA活动期由于上述介导CRP生成的活性物质增多，导致CRP浓度水平升高所致。大鼠佐剂性关节炎模型，是一种免疫性炎症模型，普遍用于抗类风湿类药物的研究。其病变分为原发性和继发性两种：原发病变表现为非特异性炎症，主要表现为致炎局部的炎症反应，致炎18～24h后肿胀达峰值，持续3d后减轻；继发病变于致炎后15d左右出现病理组织学特征，滑模增生，淋巴细胞、单核巨噬细胞浸润及关节软骨组织破坏等，其组织病理及血液中的变化与人类RA中早期相似1，因此本实验借助佐剂性关节炎大鼠动物模型，探讨痹痛定胶囊治疗类风湿性关节的机理。本次实验结果显示：痹痛定胶囊各剂量组对（AA）大鼠原发性足跖肿胀均有明显的抑制作用，能显著降低血清CRP、PGE2值。以上结果提示：痹痛定胶囊是治疗RA的有效药物，不仅能抑制原发炎症，对（AA）大鼠的继发炎症也有抑制作用。其作用与正清风痛宁相似，作用机理与抑制血清CRP、PGE2的产生有关。
参考文献
［1］刘心连，刘成贵．穴位注射治疗类风湿性关节炎及其对为细胞免疫功能的影响．中国针灸，1994，1421～4．
（收稿日期：2008．6．13）
