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[摘要] 目的调查泰安地区现有的血液检测体系是否存在输血传播乙型肝炎病毒(HBV)的残余风险及研究前Sl抗原(PreSl-Ag)与HBV-DNA的相关性。方法 对无偿献血者HBsAg(+)、部分ALT(+)、HBsAg灰区(OD／Co>0.7)标本及部分临床HBV感染者标本进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb及PreSl-Ag，同时应用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)仪检测HBV-DNA含量。结果HBsAg(+)模式中，PreSl-Ag和HBV-DNA检出率较高(61.9％和63.69％)。PreSl-Ag吸光度值和HBV-DNA的拷贝数有正相关性(r=0.680)。结论现有的血液检测体系存在潜在输血传播HBV风险，建议检测HBsAg和HBcAb同时增加HBV-DNA检测，以有效阻断HBV的输血传播。PreSl-Ag在一定程度上是否能代替HBV-DNA检测还待于进一步研究。
[关键词] 乙型肝炎病毒；血液筛查；风险评价；检测模式；无偿献血
[中图分类号] R457.2[文献标识码]A[文章编号] 1672-4208(2010)09-0011-03
对于采供血机构而言，输血传播疾病以病毒传染病为主，目前多采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测，但由于ELISA检测的是病毒的抗原或抗体，而“窗口期”、病毒变异、非典型血清转阳过程等因素造成病毒的漏检，即现有的血液检测体系存在HBV的漏检，在输血安全方面存在着潜在的隐患。为寻求更好的HBV检测模式，本文对无偿献血者HBsAg(+)、部分ALT(+)、HBsAg灰区(OD／Co>0.7)标本及部分临床HBV感染者标本进行ELISA法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBe-Ab、HBcAb及前sl抗原(PreSl-Ag)，同时应用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)仪检测HBV-DNA含量，以调查泰安地区血液筛查HBV残余风险及研究PreSl-Ag与HBV-DNA的相关性，探索出一条更适宜、更安全的HBV筛选方案，具体情况报道如下。
1 材料与方法
1.1 样本来源从本实验室2007年1月～2009年10月于-35℃冰冻保存血浆标本中选取HBsAg(+)标本、HBsAg灰区(OD／Co>0.7)和部分ALT(+)标本475，从临床实验室收集乙肝病人血清标本130例于－35℃冰冻保存备用。
1.2 方法
1.2.1 仪器和试剂Freedom evo clinical全自动加样系统(瑞士Tecan)；FAME 24／20全自动酶免分析系统(瑞士HAMILTON)；荧光定量PCR仪(罗氏公司)；低温高速离心机(Sigma公司)；HB-sAg、HBeAg、HBeAb、HBcAg ELISA检测试剂(厦门新创)；PreSl-Ag ELISA检测试剂(上海阿尔法生物)；HBV DNA荧光定量检测试剂盒(上海复星)。
1.2.2 ELISA检测按照仪器和试剂盒的要求，使用全自动加样系统和全自动酶免分析系统进行HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAg及PreSl-Ag ELISA检测和判读。
1.2.3 核酸检测先采用8份混样方式对样本进行混合和浓缩：取8份标本，每份取150μl血浆进行样本混合，经25 000 g、40C离心1 h，浓缩，弃上清后余100μl用于核酸提取。如果混合后的样本经检测为阳性，则分别进行单管检测。再使用核酸提取仪和荧光定量PC分别按预定程序进行核酸提取、扩增检测。依据试剂操作规程设定的临界值判断结果。
2 结果
HBV-DNA荧光定量、PreSl-Ag、HBV血清标志物(HBVm)及ALT的检测结果见表1。HB-sAg阳性共168例，其中PreSl-Ag阳性率为78.0％(131／168)，HBV-DNA阳性率为79.8％(134／168)；HBsAg阴性共27例，其中PreSl-Ag阳性率为7.4％(2／27)，HBV-DNA阳性率为0.0％(0／27)；PreSl-Ag、HBV-DNA阳性率在HBsAg阳性组与HBsAg阴性组比较，差异有统计学意义(P2=30.44，P0.05)。三组HBV-DNA拷贝数与PreSl-Ag检测OD值相关性分析，呈正相关(r=0.680)。
3 讨论
本研究显示，HBsAg(+)标本PreSl－Ag、HBV-DNA阳性率较高，HBsAg(-)标本Pre-s1Ag阳性结果较低，这符合Pre-s1可出现在急性乙肝感染的最早期的观点。Pre-slAg与HBV-DNA的表达呈正相关性，与徐蓓等报道-致。表2、表3和表4三组统计学差异提示PreSl-Ag、HBV-DNA表达与HBeAg表达具有密切关系。可能由于本次研究的样本数量较小，在HBsAg(-)标本未发现HBV-DNA(+)标本，这与吴玉清等报道阳性率为1／6000、刘德春等报道漏检率0.06％不符。HBV抗原抗体检测全阴性的“健康正常”人群的隐性感染可以导致受血者感染HBV，HBsAg在血液中的检出时间平均为56 d左右，而HBV-DNA的检出可以将该“窗口期”缩短6～15 d，因此荧光定量PCR技术应用于输血核酸检测(nucleicacid testing，NAT)有着重要的意义。尽管从理论上应用NAT并不能完全排除感染“窗口期”，但病毒核酸转阳之前的传染性极低。HBV感染过程中，可先后出现抗-HBc、抗-HBe和抗-HBs等多种特异性抗体。通常HBsAg阳性血清PCR检测HBV-DNA的阳性率为96％，为确保输血安全，不能单纯采用HBV-DNA的检测完全取代HBsAg的检测。当血液中HBsAg已不能检出，而表面抗体还未出现时，只有HBcAb阳性，此阶段称为空白期，此阶段的献血者血液也存在输血安全隐患。综上所述，现有的血液检测体系存在潜在输血传播HBV风险，联合HBsAg、HBcAb和HBV-DNA检测，可以更有效阻断HBV的输血传播。尽管PreSl-Ag和HBV-DNA有很好的相关性，且PreSl-Ag比HBV-DNA检测有更好的经济性和实验操作性，但PreSl-Ag在一定程度上是否能代替HBV-DNA检测还待于进一步研究。
