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【摘要】 目的 建立温肾缩尿胶囊中原儿茶酸的含量测定方法。方法 色谱柱:ODS Hypersil (4.6×250 mm,5μm);流动相:甲醇-水-冰醋酸(19:80:1),流速:1 ml/min,检测波长:260 nm,柱温:25℃。结果 原儿茶酸浓度在2.228~55.70 μg/ml范围内有良好线性关系(r=0.9997),平均回收率为99.73%,RSD为1.63%(n=9)。结论 本测定方法专属性强,稳定可靠、简便可行、重现性好,可用于温肾缩尿胶囊的质量控制标准。�
【关键词】 温肾缩尿胶囊;原儿茶酸;高效液相色谱法;含量测定
Determination of Protocatechuic Acid in the Wenshen Suoniao Capsule by HPLC
MA Zai-hong,WANG Man-yun,LIANG Hai-hui.The Second Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, GuangZhou 510120,China
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【Abstract】 Objective To establish a method for the content determination of Protocatechuic Acid in the Wenshen Suoniao Capsule. Methods HPLC was performed on ODS Hypersil column(4.6 × 250 mm, 5μm) with methanol-water-acetic acid (19:80:1) as mobile phase. flow rate was 1 ml/min and detection wavelength was set 260 nm.column temperature was 25℃. Results The calibration curve was linear in the range of 2.228~55.70 μg/ml (r=0.9997).The average recovery was 99.73% with the RSD of 1.63%(n=9). Conclusion The quality control methods are specific,reliable, feasible and reproducible, which can be used as the quality standard of Wenshen Suoniao Capsule.�
【Key words】 Wenshen Suoniao Capsule; Protocatechuic Acid;HPLC;Determination
温肾缩尿胶囊是由金樱子、乌药、远志等中药材经科学提取、精制而成的口服制剂。具有温肾祛寒,缩尿止遗的功效,用于小儿肾气虚寒而致的小便频数、遗尿等病证。金樱子为本方君药,药理研究表明其具有固精、涩肠、止泻等功能[1,2],本文拟采用HPLC法测定温肾缩尿胶囊中金樱子中的活性成分原儿茶酸的含量,为温肾缩尿胶囊提供一种可靠的质量控制方法[3]。
1 仪器与试药
1.1 仪器 戴安高效液相色谱仪:Summit P680A泵,SummitPDA-100二级管阵列检测器;Chromeleon色谱工作站;ODS Hypersil色谱柱(4.6×250 mm,5μm);十万分之一分析天平(AUW120D日本岛津);超声波清洗器(KQ5200DV 昆山市超声仪器有限公司)。
1.2 试药 温肾缩尿胶囊和空白样品(自制);原儿茶酸对照品(购于中国药品生物制品检定所,批号:110809-200604);水为重蒸馏水,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适应性 色谱柱为Dima-C18柱;流动相为水-甲醇-冰醋酸(80:19:1);流速1 ml/min;柱温25℃;检测波长为260 nm,理论塔板数按原儿茶酸计算不低于5000。在此条件下,供试品溶液原儿茶酸峰得到很好的分离,缺金樱子的阴性对照溶液在原儿茶酸峰处无吸收。
2.2 供试品溶液及阴性对照溶液的制备[4] 将本品(批号091005)去包装及囊壳,取颗粒研细,精密称取粉末3 g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50 mL,密塞,称定重量,超声处理(功率250w,频率33kHz)30 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,滤过,滤液定容至50 ml,精密量取上述溶液25 mL至坩埚中,蒸干,残渣加pH=2的稀盐酸溶液10 mL溶解,乙醚萃取3次,每次10 ml,合并乙醚液,挥干,残渣用甲醇溶解并转移到25 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,过0.45μm微孔滤膜过滤,即得。取缺金樱子的空白样品,同法制成阴性对照溶液。
2.3 方法学考察
2.3.1 线性关系考察[5] 精密称取原儿茶酸对照品11.4 mg,置50 mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,得到浓度为222.8 μg/ml的溶液作为对照品贮备液。精密吸取对照品贮备液,分别稀释4、8、10、20、100倍,分别精密吸取10 μl按“2.1”项色谱条件进样,测定峰面积,以峰面积A为纵坐标,对照品浓度为横坐标,进行线性回归,得回归方程为A=31 671X+2 059,R=0.9997。结果表明,原儿茶酸质量浓度在2.228~55.700 μg/ml范围内与峰面积线性关系良好。
2.3.2 精密度试验 精密吸取浓度为17.824 μg/ml的对照品溶液10μl,连续进样5次,记录原儿茶酸的含量,结果原儿茶酸峰面积的RSD为1.25%,表明精密度较好。
2.3.3 稳定性试验 取样品(批号:091005)去包装及囊壳,取颗粒研粉,称取约3 g,按供试品制备方法制备样品,每隔2 h进一次样,即分别于0,2,4,6,8 h时测定峰面积,其RSD为1.18%,表明在8 h内稳定性良好。
2.3.4 重复性试验 称取本品(批号091005)5份,依供试品制备方法制得样品,按上述色谱方法测定含量,结果原儿茶酸的含量平均为52.75 μg/粒,RSD=1.84%,表明重复性良好。
2.3.5 回收率试验 采取加样回收法,取一定量已知含量的样品(批号:091005),按80%、100%、120%分别加入适量的原儿茶酸对照品,依“2.2”项下方法制备供试品溶液,测定含量计算回收率,结果见表1,平均回收率为99.73%,RSD为1.63%(n=9),表明本方法回收率良好。
2.4 样品测定 取本品三批,按供试品的制备方法制备样品,依“2.1”项色谱条件测定,结果如下表2。
经过整个质量标准含量测定研究过程及三批样品的测定结果,暂定本胶囊以原儿茶酸(C7H6O4)计,每粒不低于40μg。
3 讨论
3.1 供试品制备方法的考察 供试品溶液的制备曾分别考察了回流提取,超声提取和振摇提取三种不同的提取方法,超声提取处理和回流提取提取含量均比振摇提取含量高,因超声提取简便易行,故采用超声提取。同时也对超声提取的时间也做考察,结果表明超声提取30 min时已经提取完全,故确定提取时间为30 min。
3.2 流动相的优化 水-甲醇-冰醋酸的比例:随流动相甲醇比例的增加,原儿茶酸的出峰时间提前,色谱峰前移。经实验,水-甲醇-冰醋酸的比例为80:19:1时,原儿茶酸的出峰时间较为合适,且峰形较好,能其他峰能较好的分离。
3.3 萃取溶剂与萃取数的选择 曾比较过乙酸乙酯与乙醚的萃取效果。结果乙醚的萃取效率较乙酸乙酯高,且提取的杂质比较少。并通过实验比较,萃取3次,每次10 mL,原儿茶酸萃取比较完全。
参 考 文 献
[1] 吴家红,彭小冰,席希哗.金樱子不同炮制品中总黄酮含量的测定.贵阳中医学院学报,2006,28(5):60.
[2] 李尼曼,钟晓红.金樱子药用成分研究及应用.农家之友,2008,(16):3-5.
[3] 曾光尧,谭建兵,陈正收等.金樱子药材中原儿茶酸含量测定方法及对壮腰健肾丸质量的影响.中成药,2007,29(9):1385-1386.
[4] 刘炳茹,林燕,白在贤.高效液相色谱法测定心血舒通胶囊中原儿茶酸的含量.中国民族医药杂志,2005,11,(3):31-32.
[5] 冯有龙,刘永,曹玲.HPLC法测定血尿胶囊中原儿茶酸的含量.首都医药,2009,(20):54-55.
