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文章编号：1009-5519（2008）13-1899-02 中图分类号：R25 文献标识码：A 慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种具有气流受限特征的可以预防和治疗的疾病，气流受限不完全可逆、呈进行性发展，与肺部对香烟烟雾等有害气体或有害颗粒的异常炎症反应有关。其发病机制涉及多个方面，其中氧化/抗氧化失衡是造成COPD慢性损伤的重要原因之一。研究表明：COPD患者不但氧化物产生增多，而且清除能力下降。无论是急性发作期还是缓解期的COPD患者均存在氧化/抗氧化失衡，尤其对于缓解期的患者而言，抗氧化治疗对于减轻肺部慢性损伤、延缓病情发展及肺功能下降具有重要意义[1]。益肾通肺汤是导师积多年治疗COPD的临床经验总结而成，由人参、蛤蚧、苏木、葶苈子、水蛭、紫菀等组成，临床疗效甚佳。本实验通过观察益肾通肺汤对COPD大鼠的谷胱甘肽(GSH)、脂质过氧化物（LPO）等指标的影响，从抗氧化角度探讨其作用机理。
1 材料与方法
1．1 实验药品：益肾通肺水煎液，由甘肃中医学院附属医院中药制剂室制备；脂多糖（LPS）购自美国Sigma公司。
1．2 实验动物：选用7周龄健康SPF级Wistar大鼠40只，体重（220±20）ｇ，雌雄兼用，由我校实验动物中心提供。
1.3 实验仪器：离心机(德国生产， 甘肃中医学院科研实验中心生物化学实验室提供)。722分光光度计（甘肃中医学院科研实验中心生物化学实验室提供）。动物熏吸箱（甘肃中医学院附属医院呼吸科自制）。GSH测试盒、LPO测试盒（南京建成生物工程研究所生产，批号为2007-04-23）。
1.4 实验方法
1.4.1 动物分组及模型制作方法：将40只大鼠随机分为5组，每组8只。空白对照组：大鼠正常饲养， 灌服生理盐水10 ml/kg， 每日1次。模型对照组，益肾通肺汤低剂量组，益肾通肺汤中剂量组，益肾通肺汤高剂量组。模型对照组和益肾通肺汤低剂量组、中剂量组、高剂量组造模共30天，分别于第一、十四天气管内注入LPS（0.2 mg/只），其余时间大鼠被动熏烟， 每日2次，每次10支（总烟雾约6 000 ml）。第三十天时，取大鼠雌雄各1只，断颈处死，取右肺中部组织在10%福尔马林中固定，再经过脱水、浸蜡、包埋等处理，切片，常规HE染色作成病理切片光镜下观察，证明慢支已经形成，造模成功。
1.4.2 标本采集：灌药结束后第二天，股动脉取血，立即以3 500 r/min离心5 min，取血清，-20 ℃冻存待检。所有指标均使用比色分析法测定，按照试剂盒说明书操作程序严格执行。肺组织病理切片的制备：治疗灌药结束后2天，断头取血后，迅速剖取肺脏。取左侧肺脏中部组织0.5 cm×0.5 cm，用10%甲醛溶液固定1周。将组织块逐级酒精脱水、透明、浸蜡、包埋、切片，用HE染色法，光镜下观察支气管与肺组织的形态变化。
1.4.3 统计学分析方法：采用SPSS12.0统计软件处理，所有数据均采用均值±标准差（x±s）表示，各组间显著性比较采用方差分析。
2 结果
2.1 病理学改变：空白组无支气管黏膜下肌层增生、肥厚，无黏膜层、黏膜下层及肌层大量炎性细胞浸润，无肺泡壁破裂，弹力网破坏。模型组支气管肺组织病理表现基本符合人类慢性支气管炎及阻塞性肺气肿的特点。光镜下见支气管纤毛柱状上皮细胞部分脱落，杯状细胞增生，支气管黏膜下肌层增生、肥厚，黏膜层、黏膜下层及肌层大量炎性细胞浸润；细支气管壁周围可见较多炎性细胞浸润，肺泡壁变薄、肿胀、破裂或形成大泡，弹力网破坏。治疗组相对模型组炎性细胞浸润减少，杯状细胞增生减轻，肺泡壁无破裂。
2.2 一般情况及症状：模型对照组大鼠明显活动减少， 精神不振，拱背蜷缩， 眯眼、扎堆、反应迟钝 ，体瘦，皮毛无光泽。正常对照组大鼠则活泼好动，体肥，皮毛亮泽。益肾通肺汤各组介于两者之间。
造模各组大鼠于造模开始第一天即出现轻微气促、气粗。之后渐转为慢性咳嗽，口鼻潮湿，分泌物较多，并出现食少、纳呆。造模快结束时，模型对照组大鼠开始出现气急，部分可闻及喘鸣音。益肾通肺汤各组大鼠经喂药症状明显减轻，仅偶有咳嗽。空白对照组大鼠无特殊表现。
2.3 各组大鼠血清中GSH、LPO的含量比较见表1。
3 讨论
一般认为吸烟、吸入环境中污染气体、肺部感染、炎症是导致COPD发病的主要因素。其中吸烟与COPD的发生密切相关。烟雾中含有大量自由基和氧化剂，每口烟中约含有1 017个自由粒子，可直接损伤肺组织，而且还会通过活化的炎症细胞释放许多内源性氧化剂，加重对气道及肺组织的损害。此外，烟雾中所含有的氧化剂还可灭活α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)，使体内蛋白酶/抗蛋白酶平衡系统失衡，肺内过度氧化可产生大量自由基， 可攻击脂类，导致脂质过氧化的链式反应，其对肺泡壁实质细胞及结缔组织细胞破坏极大，构成了肺的不可逆改变[2]。
还原型GSH是一种低分子清除剂，是体内重要的抗氧化、抗炎物质，参与关键性细胞功能和代谢，包括抗氧化应激和调控细胞生长、增殖，是许多保护系统的关键所在，对解除病理状态下蛋白质二硫键形成，灭活活性氧，合成DNA前体，维持细胞正常功能具有重要意义，在维持气道上皮完整性和使上皮细胞免受烟雾及氧化剂介导的肺损伤中发挥重要作用。研究表明，降低上皮细胞中GSH水平可以导致上皮屏障功能丧失和渗漏性增加。 因而GSH的量的多少是衡量机体抗氧化能力大小的重要因素，起到保护细胞膜结构和功能完整的作用[3]。LPO是多价不饱和脂肪酸脂质过氧化过程中的产物，血浆和肺匀浆LPO水平表示细胞成分和组织受损伤的程度。过多的氧化物可以通过多种途径造成肺损伤，如损伤血管内皮细胞和与膜成分发生交联造成细胞膜及亚细胞器膜的严重受损，使肺损伤不断加重[4]。
益肾通肺汤以肾主纳气为立治依据，以补肾纳气平喘、益气活血祛痰为治则。经研究证明，方中诸药均有不同程度的抗氧化作用[5]。人参、蛤蚧相配补益肺肾、纳气定喘以治本；苏木与人参相配益气活血；葶苈子泻肺祛痰；水蛭活血化瘀；紫菀止咳平喘。本研究发现应用益肾通肺汤后，治疗组大鼠血清GSH含量显著提高，LPO含量明显下降， 提示通过提高机体的抗氧化能力，减轻细胞和肺组织受损伤程度可能是益肾通肺汤干预COPD形成的机制之一。
参考文献：
[1] MacNee W.Treatment of stable COPD:antioxidants[J].Eur Respir Rev，2005，14(94)：12.
[2] 马利军，吴纪珍，牛红丽，等.老年COPD患者急性发作期与缓解期
细胞因子及SOD、MDA变化[J].中国老年学杂志，2003，23(3)：191.[3] 张 伟，李 刚.中医药对各型慢性阻塞性肺疾病大鼠γ-谷氨酰半
胱氨酸合酶表达和气道病理改变的影响[J].天津中医药，2006，23(4):315.
[4] 张洪玉，庞宝森.慢性阻塞性肺疾病氧化/抗氧化失衡的基础与临床研究[J].中国医药导刊，2001，3(4):261.
[5] 赵克然.氧自由基与临床[M].北京:中国医药科技出版社，1999.11.
收稿日期：2008-04-08
