【www.zhangdahai.com--社会实践报告】
（1.清华大学生命科学与医学研究院，北京100084；2.贵阳中医学院，贵州贵阳550002）�� 摘要：目的：制备板蓝根泡腾颗粒，并对其进行质量评价。方法：确定板蓝根泡腾颗粒的制备方法，建立HPLC法测定板蓝根泡腾颗粒中尿苷、鸟苷、腺苷的含量，对其进行外观性状观察，鉴别，溶化性试验。结果：制备的泡腾颗粒泡腾迅速，溶液澄清，无沉淀，不挂壁，外观好。结论：板蓝根泡腾颗粒制备工艺简单，性质稳定，质量可控。�
关键词：板蓝根；泡腾颗粒；制备；质量评价�
中图分类号：R927.11文献标识码：A文章编号：1673-2197（2008）10-0033-03��
中药板蓝根（radixisatidis）为十字花科植物菘蓝（IsatisindigoticaFort.）的干燥根，是中国传统中药，历代本草均有记载。本品性寒味苦，具有清热解毒、凉血消斑的功效，临床广泛用于抗菌、抗病毒、抗血小板聚集、抗内毒素，能够增强机体的免疫功能。泡腾颗粒是以适宜的酸和碱为崩解剂制成的一种颗粒剂［1］，入水后会产生大量二氧化碳气体从而迅速溶解，药物起效迅速，具有携带、使用方便，水中分布均匀，成本低，生物利用度高等优点，兼具固体制剂和液体制剂的特点。本研究将板蓝根药材经过提取、干燥得板蓝根提取物，以泡腾效果为评价指标将板蓝根提取物制备成板蓝根泡腾颗粒，并建立HPLC法测定板蓝根泡腾颗粒中尿苷、鸟苷、腺苷的含量，同时对其进行外观性状观察，鉴别，溶化性试验。�
1仪器与试药�
1.1仪器�
Agilent1100型高效液相色谱仪（DAD检测器）；PrevailC18柱（4.6×250mm，5μm）；XS105型电子天平（d=0.01mg，梅特勒-托利多公司）；SL300N型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；RUC-5200型超声波清洗器（上海睿祺电子设备有限公司）；CH-10槽形混合机（长沙市岳麓区中南制药机械厂）；YK-60摇摆制粒机（长沙市岳麓区中南制药机械厂）。�
1.2试药�
尿苷、鸟苷、腺苷对照品均购于中国科学院生物化学研究所（HPLC法测定纯度分别为99.3%、99.1%、99.3%）；精氨酸对照品、板蓝根对照药材均购于中国药品生物制品检定所；乙腈（色谱纯，默克公司）；其他为分析纯；水为超纯水；所用药材购于安徽亳州药材市场；柠檬酸、无水碳酸氢钠、乳糖、正丁醇、冰醋酸、茚三酮均为分析纯；以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板。�
2方法与结果�
2.1板蓝根提取物的制备�
将板蓝根药材用6倍量水回流提取3次，每次1h，提取液过滤、滤液合并，浓缩至相对密度为1.2（50℃），加乙醇使含醇量达到60％静置24h使沉淀，取上清液回收乙醇，并减压干燥成干浸膏，粉碎即得板蓝根提取物。�
2.2板蓝根泡腾颗粒的制备�
将所有物料分别干燥并粉碎过100目筛备用，取处方量以等量递加的方法加入主药及其他辅料，过筛混匀，用70％的乙醇溶液为润湿剂制软材，过16目筛湿法制粒，50℃干燥2h得干颗粒，16目整粒后即得。�
2.3不含板蓝根提取物的泡腾颗粒�
（阴性样品）的制备。除主药外，将其它所有物料按板蓝根泡腾颗粒的制备方法制备即得。�
2.4理化性质�
（1）性状。本品为棕色至棕褐色颗粒；味酸甜、微苦。�
（2）鉴别。取本品1.0g，研碎，置具塞三角锥形瓶中，加甲醇10mL，超声处理30min，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；另取精氨酸对照品2mg，柠檬酸0.3g，无水碳酸氢钠0.2g，加甲醇10mL，超声处理30min，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取对照品溶液、板蓝根泡腾颗粒供试品溶液各1~2μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（19∶5∶5，V/V/V）为展开剂展开，展距12cm，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。�
（3）溶化性［2］分别取3批板蓝根泡腾颗粒各10g，置盛有200mL水的烧杯中，水温为20℃，板蓝根泡腾颗粒迅速产生气体而呈泡腾状，5min内颗粒完全分散并溶解在水中，溶液澄清透亮，不挂壁。�
2.5含量测定�
（1）色谱条件。色谱柱：PrevailC18（4.6×250mm，5μm）；柱温：25℃；流动相：A（水）-B（乙腈）；梯度洗脱：0→34min（2%B→20%B）；流速为：0.5mL•min-1�；检测波长：254nm，进样量10μL。�
（2）系统适应性试验。在色谱条件下，分别测定核苷类对照品、板蓝根泡腾颗粒和不含板蓝根提取物的空白泡腾颗粒，色谱图见图1、2、3，结果显示，共存成分不干扰主药的测定，理论塔板数按腺苷峰计算不低于10000。�
图1混合对照品的HPLC图谱
图2泡腾颗粒的HPLC图谱
图3阴性泡腾颗粒的HPLC图谱
（3）对照品溶液制备及标准曲线：分别精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的尿苷对照品1.92mg，鸟苷对照品�1.75mg�，腺苷对照品2.12mg置于同一25mL量瓶中，用20％甲醇溶液溶解，并用20％甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0.25mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL置于10mL量瓶中，加入20％甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得一系列不同浓度的混合对照品溶液，按上述色谱条件测定，以尿苷、鸟苷、腺苷对照品浓度（mg•mL-1）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：尿苷：Y=41344X+2.5323（r=0.9999），鸟苷：Y=47076X+2.4053（r=0.9999），腺苷：Y=59968X+1.4399（r=0.9999），结果表明尿苷、鸟苷、腺苷分别在1.92~38.4μg•mL-1�；1.75~35μg•mL-1�；2.12~42.4μg•mL-1�范围内线性关系良好。�
（4）板蓝根泡腾颗粒供试品溶液和阴性样品溶液的制备。取080101批板蓝根泡腾颗粒和阴性样品各0.5g，精密称定，置25mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，即得板蓝根泡腾颗粒供试品溶液和阴性样品溶液。�
（5）精密度试验。取1mL中含有38.4μg的尿苷、�35.0μg�的鸟苷和42.4μg的腺苷的混合对照品溶液连续进样6次，以尿苷、鸟苷、腺苷的峰面积计算，RSD分别为尿苷�0.058％�，鸟苷0.29％，腺苷0.028％，说明本方法精密度良好。�
（6）重复性试验。取080101批板蓝根泡腾颗粒6份按2.5.4项下的供试品制备方法操作制备供试品溶液，按上述色谱条件测定峰面积，计算含量，含量测定结果的RSD分别为尿苷0.40％，鸟苷0.85％，腺苷0.18％，表明本方法重复性良好。�
（7）稳定性试验。取080101批板蓝根泡腾颗粒1份按2.5.4项下的供试品制备方法操作制备供试品溶液，分别在0h，1h，2h，4h，6h，8h测定，以尿苷、鸟苷、腺苷的峰面积计算，RSD分别为尿苷0.95％，鸟苷0.75％，腺苷0.13％，表明供试品溶液在8h内稳定。�
（8）泡腾颗粒的含量测定。按照2.5.4项下供试品溶液制备方法制备9份样品，按上述色谱条件测定峰面积，计算含量，080101、080102、080103批板蓝根泡腾颗粒的总核苷含量的平均值分别为151.1mg/100g、157.8mg/100g、161.1mg/100g。�
（9）加样回收试验。�
①对照品储备液的制备精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的尿苷对照品3.05mg，鸟苷对照品1.85mg，腺苷对照品2.73mg置10mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得储备液。�
②回收率试验取080101批板蓝根泡腾颗粒9份，各约0.5g，精密称定，置25mL具塞锥形瓶中，3份为一组，分别精密加入对照品储备液0.8mL、1.0mL、1.2mL，按�2.4.4�项方法制备所需溶液，即得9份样品，按上述色谱条件测定峰面积，计算含量，得到尿苷的高、中、低回收率为99�4％、100％、99�7％，鸟苷的高、中、低回收率为99.3％、99�5％、99.1％，腺苷的高、中、低回收率为98.9％、99.7％、�99.7％�，结果均在100％左右，表明本法回收率良好。�
3讨论�
（1）板蓝根水提液具有抗菌、抗病毒之功效，有关抗病毒活性物质目前尚无定论，有文献报道结合氨基酸、喹唑酮、糖蛋白和多糖为抗病毒活性物质，而脂溶性成分靛蓝、靛玉红在水提液中含量极少，且未见报道有抗病毒作用，故选用板蓝根药材中脂溶性成分靛蓝、靛玉红做指标成分不合适。已有文献报道采用高效液相色谱/二极管阵列检测/质谱/质谱联用技术（HPLC/DAD/MS2）对板蓝根注射液进行分析，鉴定其中含有腺苷、尿苷、鸟苷、胞苷和腺嘌呤5种成分［3］。而板蓝根药材中的尿苷、鸟苷、腺苷等核苷类成分能够干扰病毒核酸的合成，常常是中成药抗病毒的活性成分［4，5］，故本文选取板蓝根药材中的尿苷、鸟苷和腺苷的总量对板蓝根泡腾颗粒的质量进行评价。�
（2）制备薄层样品时，考察了用甲醇、乙醇、低浓度甲醇、低浓度乙醇［6］溶解精氨酸对照品和板蓝根对照药材，但在薄层板上，精氨酸对照品和板蓝根对照药材的斑点明显超出板蓝根泡腾颗粒的斑点，考虑是板蓝根泡腾颗粒上样点的局部离子化微环境不同于药材与对照品的微环境所致，故在制备精氨酸对照品和板蓝根对照药材溶液时先在甲醇中溶解成比例的柠檬酸和无水碳酸氢钠，使对照品和对照药材的环境和板蓝根泡腾颗粒的环境一致。结果表明，该方法能很好地对板蓝根泡腾颗粒进行TLC鉴别。�
参考文献：�
［1］王淑华，林永强.泡腾片的常用辅料及制备方法［J］.食品与药品，2006，8（3）：70-72.［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：化学工业出版社，2005：142.�
［3］金郁，肖珊珊，孙毓庆.高效液相色谱/二极管阵列检测/质谱/质谱联用在板蓝根注射液成分鉴定中应用［J］.色谱，2003，21（6）：558-561.�
［4］李子成，陈淑华，蒋宁，等.核苷类抗病毒药物的研究进展［J］.化学研究与应用，2002，14（1）：15-20.�
［5］肖珊珊，金郁，孙毓庆.板蓝根化学成分、药理及质量控制研究进展［J］.沈阳药科大学学报，2003，20（6）：455-459.�
［6］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：化学工业出版社，2005.�
（责任编辑：姜付平）
