【www.zhangdahai.com--社会实践报告】
�摘要：目的：深入研究马蹄香治疗病毒性肠炎的有效成分和作用机制。方法：本研究应用国家标准GB/T5009124-2003高效液相法测定马蹄香散剂和5种治疗胃肠病药物中氨基酸的含量。结果：谷氨酸和精氨酸在5种治疗胃肠病药物中的含量均较高，谷氨酸的含量：L-谷氨酰胺呱仑酸钠>复方谷氨酰胺>蒙脱石散>马蹄香>盐酸小檗碱片>参苓健脾胃颗粒。精氨酸的含量：复方谷氨酰胺>马蹄香>蒙脱石散>盐酸小檗碱片>参苓健脾胃颗粒。缬氨酸的含量：蒙脱石散>马蹄香>复方谷氨酰胺>盐酸小檗碱片>参苓健脾胃颗粒。在蒙脱石散和复方谷氨酰胺中丙氨酸的含量高于马蹄香。在蒙脱石散中天冬氨酸的含量高于马蹄香。盐酸小檗碱片中的组氨酸、甲硫氨酸高于马蹄香。在L-谷氨酰胺呱仑酸钠中胱氨酸、赖氨酸和甲硫氨酸的含量高于马蹄香。其余氨基酸在马蹄香中的含量均高于其他药物。结论：马蹄香散剂中含有丰富的氨基酸，其谷氨酸和精氨酸的含量比较高，这些氨基酸的含量与马蹄香治疗病毒性肠炎的有效性即促进受损肠黏膜修复可能有关。
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关键词：马蹄香；高效液相；胃肠病；药物；氨基酸�
中图分类号：R284文献标识码：A�
文章编号：1007-2349（2011）11-0067-03��
研究已证明营养物质尤其是氨基酸如谷氨酰胺（Gln）、谷氨酸和精氨酸，在维持肠道健康和功能方面起着重要的作用。马蹄香用于治疗树�人工感染轮状病毒肠炎，取得良好的止泻效果，肠黏膜绒毛呈修复过程[1]。马蹄香用于治疗轮状病毒肠炎患儿，是安全有效的，无任何不良反应[2]。动物急性和亚急性毒性实验证明，马蹄香无任何毒副反应，对人和动物血象、肝肾功能及心脏无明显影响[3]。为深入认识马蹄香治疗病毒性肠炎的有效成分和作用机制，本研究测定了马蹄香散剂和５种治疗胃肠病药物中氨基酸的含量，以便利于马蹄香制剂的推广和应用。�
1药物样品和来源�
（1）马蹄香散剂由中国军事医学科学院军事兽医研究所（长春）提供；（2）蒙脱石散由博福-益普生（天津）制药有限公司生产（批号：U0115）；（3）盐酸小檗碱片由杭州民生药业集团有限公司生产（批号：T09K518）；（4）复方谷氨酰胺肠溶胶囊由地奥集团成都药业股份有限公司生产（批号：090719）；（5）参苓健脾胃颗粒由昆明中药厂有限公司（批号：091221）；（6）L-谷氨酰胺呱仑酸钠颗粒由寿制药株式会社生产（批号：Z39M）。�
2测定方法�
21仪器和试剂美国Waters600系统，2487紫外检测器，M32色谱数据工作站，Waters氨基酸水解标准液，AccQTagUltraaEluentA（美国Waters公司提供）AccQTagUltraaEluentB（美国Waters公司提供），WatersAccQ-Fluor试剂盒（美国Waters公司提供），乙腈（美国Fisher公司，色谱纯），水为超纯水，核桃（购自昆明金马正昌果品批发市场）。�
22试验方法�
221色谱条件色谱柱：WatersAccQ-Tag氨基酸分析柱46mm×150mm；紫外检测波长：248nm；柱温：55℃；按标准行梯度洗脱；理论塔板数以谷氨酸不低于5000。�
222氨基酸标准使用液的制备设定氨基酸使用液浓度：取1支Waters氨基酸水解液标准，打开后吸取1mL，放至一支干净的25mL试管中，加85mL超纯水，旋涡混匀备用。�
223衍生试剂制备将烘箱预热至（55±1）℃，取一瓶衍生剂粉2A，轻轻敲动以确保打开前所有粉在瓶底；吸取1mL稀释液2B并弃去以冲洗一个干净的微量移液吸头，移1mL稀释液2B至2A瓶中，盖紧瓶盖，旋涡混匀10min，55℃加热5~10min使衍生剂粉溶解（加热不得超过10min）。将溶解后的衍生试剂放入干燥器中，可在室温保存1星期。�
224氨基酸标准品的衍生将烘箱预热至（55±1）℃；用微量进样器吸取10μL标定标准至一支干净的样品管底部；移70μL硼酸缓冲液至样品管中，短暂旋涡混匀；移20μL衍生试剂至样品管中，立即旋涡混匀数秒种；室温放置1min；用封口膜封口，55℃加热5min既得。�
225样品溶液的制备精密称取粉碎均匀的样品50mg，置干燥洁净的安瓿瓶中，加02％苯酚溶液1mL，加6mol/L盐酸溶液2mL，充氮，迅速将充好氮气的安瓿瓶瓶口置于酒精喷灯上封口，置110℃烘箱中水解24h，打开安瓿瓶，取1mL水解液移入蒸发皿中，蒸干，残渣用水分次洗涤，合并洗涤液，滤液移至10mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。�
226样品溶液的衍生吸取供试品溶液约1mL，通过022μm微孔滤膜过滤，吸取10μL滤液按224以下同法操作。进样量1μL。�
测定完成单位：本研究的氨基酸测定由云南省分析测试研究所（中心）完成。测定方法：用高效液相色谱仪（HPLC）方法测定氨基酸。检查和判定标准为GB/T5009124-2003。GB/T5009124-2003由中华人民共和国卫生部和中国国家标准化管理委员会发布，是国家标准。�
3测定结果�
谷氨酸和精氨酸在以上6种治疗胃肠病药物中的含量均较高，谷氨酸的含量在L-谷氨酰胺呱仑酸钠>复方谷氨酰胺>蒙脱石散>马蹄香>盐酸小檗碱片>参苓健脾胃颗粒。精氨酸的含量在复方谷氨酰胺中>马蹄香>蒙脱石散>盐酸小檗碱片>参苓健脾胃颗粒。缬氨酸的含量在蒙脱石散>马蹄香>复方谷氨酰胺>盐酸小檗碱片>参苓健脾胃颗粒。在蒙脱石散和复方谷氨酰胺中丙氨酸的含量高于马蹄香。在蒙脱石散中天冬氨酸的含量高于马蹄香。盐酸小檗碱片中的组氨酸、甲硫氨酸高于马蹄香。在L-谷氨酰胺呱仑酸钠中胱氨酸、赖氨酸和甲硫氨酸的含量高于马蹄香。其余氨基酸在马蹄香中的含量均高于其他药物中的，马蹄香散剂中的氨基酸含量是比较丰富的。�
4讨论�
蜘蛛香（ValerianajatamansiiJones）为败酱草科属植物，药用其根茎及根，别名：马蹄香（云南、广西）。马蹄香已载入中国药典，在《本草纲目》和《滇南本草》中均有记载，具有理气和中、散寒除湿、活血消肿的功效，用于治疗腹脘胀痛、呕吐泄泻、小儿疳积、咳嗽、流感等症，是云南多民族使用的中草药，其资源丰富，分布较广。加强其有效成分的研究，对马蹄香的开发和推广应用极为重要，也是发掘和研究天然药物及民族民间医药的需要。�
本研究测定了单方中药马蹄香散剂中氨基酸含量，并与治疗胃肠病有效的药物蒙脱石散、复方谷氨酰胺、盐酸小檗碱片、参苓健脾胃颗粒和L-谷氨酰胺呱仑酸钠中的氨基酸含量进行比较，发现谷氨酸和精氨酸在以上6种治疗胃肠病药物中的含量均较高，谷氨酸的含量在L-谷氨酰胺呱仑酸钠>复方谷氨酰胺>蒙脱石散>马蹄香>盐酸小檗碱片>参苓健脾胃颗粒。精氨酸的含量在复方谷氨酰胺中>马蹄香>蒙脱石散>盐酸小檗碱片>参苓健脾胃颗粒。缬氨酸的含量在蒙脱石散>马蹄香>复方谷氨酰胺>盐酸小檗碱片>参苓健脾胃颗粒。在蒙脱石散和复方谷氨酰胺中丙氨酸的含量高于马蹄香。在蒙脱石散中天冬氨酸的含量高于马蹄香。盐酸小檗碱片中的组氨酸、甲硫氨酸高于马蹄香。在L-谷氨酰胺呱仑酸钠中胱氨酸、赖氨酸和甲硫氨酸的含量高于马蹄香。其余氨基酸在马蹄香中的含量均高于其他药物中的，马蹄香散剂中的氨基酸含量是比较丰富的，有其特点。�
氨基酸进入肠道组织后，通过3种途径代谢：①合成蛋白质；②通过转氨基作用生成其他氨基酸、代谢底物或中间产物；③完全氧化成CO�2，和H�2O。在前两种代谢途径中，氨基酸可被机体用于生长或其他生物学功能。一旦完全氧化成CO�2，则是对氨基酸的浪费，尤其是必需氨基酸。随着人们对Gln、谷氨酸和精氨酸认识的逐步深入，临床上在严重创伤、大手术、烧伤等应激状态下或长期行TPN时补充Gln、谷氨酸和精氨酸，可降低肠黏膜的通透性，维护肠黏膜结构的完整性，增强黏膜免疫功能，减少肠道细菌移位，可避免肠源性感染的发生。�
在Gln合成酶的作用下，谷氨酸与氨反应生成Gln。L-精氨酸在肝或肾内合成，合成的前体物质是谷氨酸或Gln。肠道黏膜条件必需氨基酸如谷氨酰胺（Gln）、谷氨酸和精氨酸，在调节肠形态和功能完整性起着重要作用。每天食入的谷氨酸、Gln、天冬氨酸和血液Gln进入肠黏膜后，成为小肠能量的主要来源，为小肠养分的主动转运和蛋白质周转提供足量的ATP；谷氨酸是合成谷胱甘肽的前体物，谷胱甘肽是保护肠黏膜免受毒素入侵和氧化损伤的关键组分；精氨酸是NO的生理来源之一，NO在调节肠道血流量、酶的分泌和上皮细胞生长等起主要作用；精氨酸和Gln的代谢产物鸟氨酸是合成多胺的前体物，多胺是肠道上皮细胞修复所必需的物质[4]。�
小肠黏膜中的精氨酸在上皮细胞精氨酸酶Ⅱ的作用下合成NO、多胺、脯氨酸、谷氨酸、尿素和鸟氨酸。精氨酸及其肠内衍生物如NO、多胺和鸟氨酸等，对于维持正常的肠道健康生长起着重要的作用[5]。还有研究表明，精氨酸的肠保护作用主要由其产生的NO完成。NO是一种自由基性质的脂溶性气体物质，由一氧化氮合酶（NOS）催化精氨酸产生。动物消化道均有NOS分布，各段密度不同，其中以小肠最多[6]。NO可影响肠上皮细胞的紧密连接、促进肠道黏液和电解质分泌、调节肠黏膜的血流量和维持肠黏膜微循环[7]。Blachier等的研究表明，精氨酸生成多胺后，可促进肠道上皮细胞的分化增生。因此，必须给予一定量的精氨酸才能满足肠道快速发育的需要[8]。最近的研究表明，精氨酸还可激活肠上皮细胞mTOR和一些激酶信号通路，从而提高蛋白质合成、增强细胞分化能力和有助于修复受损的肠道上皮细胞[9]。�
肠内谷氨酰胺补给支持能快速有效地促进Peyer’s结淋巴细胞增殖，尤其是B细胞，增加Peyer’s结内淋巴细胞总数：有利于肠道免疫屏障的恢复和强化[10]。Peyer’S结是肠系膜相关淋巴组织（gut associatedlymphoidtissueGALT）的主要成员之一，其中心区域是B细胞的富含区，并具有生发中心，主要含IgA淋巴母细胞即slgA阳性细胞，是黏膜分泌IgA细胞的主要来源，也是小肠内诱导免疫应答的最重要部位[11]。在肠道黏膜免疫系统中，Peyer’s结淋巴细胞直接参与了肠道抗原的识别、呈递和免疫效应，他们的功能和状态直接反映了肠道黏膜免疫系统的功能和状态：因此可以说Peyer’s结构成了肠道免疫屏障的基础，维护和优化Peyer’s结内细胞结构、功能状态对于宿主的防御和维持内环境的稳定极为重要[12]。�
研究和临床资料均表明补充Gln、谷氨酸和精氨酸，可降低肠黏膜的通透性，维护肠黏膜结构的完整性，增强黏膜免疫功能，减少肠道细菌移位，马蹄香用于治疗腹泻病并有其特殊的效果，可能与其所含的谷氨酸、精氨酸对受损胃肠组织的生长、粘膜修复及免疫功能调节的特殊作用有关系。本研究从马蹄香散剂中氨基酸含量分析对马蹄香的治疗机制提供了一定的实验依据。��
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（收稿日期：2011-06-11）
