【www.zhangdahai.com--学生作文作业】
【摘要】目的：比较3种中药对金黄色葡萄球菌体外抑菌作用。目的：利平皿挖洞灌药法测定了大豆异黄酮、柠檬提取物和甘肃金银花的抑菌活性。结果：大豆异黄酮、柠檬提取物和甘肃金银花对金黄色葡萄球菌均有较为明显的抑制作用。同时随着浓度的增加，中药的抑菌作用也增强，但达到一定浓度后，其抑菌作用不再加强。结论：大豆异黄酮、柠檬提取物和甘肃金银花都对多重耐药金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，提示其在感染性疾病以及生物膜相关性疾病的治疗中将具有广阔的应用前景。
【关键词】大豆异黄酮；柠檬提取物；甘肃金银花；金黄色葡萄球菌；体外抑菌
众所周知，金黄色葡萄球菌是医院内感染常见的病原菌，随着抗生素的广泛使用，细菌的耐药性问题也趋于严重[1]。因此，探求新的不同于抗生素的抗菌药物对于改善金黄色葡萄球菌感染性疾病的治疗现状具有重要意义。近年来许多研究表明中药的有效提取物具有抑菌的生物活性[2]。因此，本文旨在3种中药对金黄色葡萄球菌体外抑菌作用，希望为新型抗菌药物的开发奠定工作基础。
1 材料与方法
1.1 实验材料大豆异黄酮：实验室从脱脂豆粕中提取；甘肃金银花(采自甘肃榆中兴隆山)；柠檬提取物：由实验室提供。金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC26112)。其浓度分别为0.10g/mL与0.01g/mL。
1.2 实验方法
1.2.1 菌种培养从活化好的菌种斜面分别沾取少量细菌、酵母菌的菌苔，将其分别接种在肉汤蛋白胨和麦芽汁培养基中，用营养琼脂培养基平板培养37℃18h，用无菌生理盐水分别将各新鲜平板培养物洗下，以无菌生理盐水配制成菌悬液，用分光光度计调整菌液吸光值OD600=0.1，用时再稀释10倍。培养至菌体浓度为106-107cfu/mL。
1.2.2 抑菌试验采用平皿挖洞灌药法先在无菌平皿内加入已溶化的营养琼脂培养基20毫升作为底层，待凝固后再加入培养了16-18小时的营养肉汤培养基菌液1-2毫升，用玻璃涂布器涂布均匀，用直径7毫米无菌金属打孔器在每个平皿内均匀打洞3个，除去洞内琼脂，灌入少许营养琼脂培养基垫底，待凝固后再加入大豆异黄酮、柠檬提取物和甘肃金银花药液样本，以不外溢为度，置37℃水浴恒温培养箱内培养18―24小时，观察实验结果，若有抑菌作用，洞周出现的无细菌生长地带，称为抑菌圈，记录抑菌圈直径的大小。
1.2.3 抑菌指标判定抑菌圈直径D≥20mm为高度敏感，用“+++”表示；15≤D≤20mm为中度敏感，用“++”表示；85≤D≤15mm为低度敏感，用“+”表示；D≤8mm为不敏感，用“-”表示[3]。
2 结果
大豆异黄酮、柠檬提取物和甘肃金银花对金黄色葡萄球菌均有较为明显的抑制作用。分析之间的不同抑菌效果，甘肃金银花抑菌效果稍弱，但是与其他两组比较无显著性差异(P>0.05)。同时随着浓度的增加，中药的抑菌作用也增强，但达到一定浓度后，其抑菌作用不再加强。
3 讨论
大量流行病学调查资料显示，细菌耐药性普遍存在，药物对耐药菌的临床疗效降低或无效，对感染性疾病尤其是危重症感染患者构成威胁。金黄色葡萄球菌是临床上医院内感染常见的病原菌，而且常为耐药菌株。金黄色葡萄球菌相关感染疾病的治疗目前尚无特异性方法，应用大剂量或渗透性较强的抗菌药物亦不能完全清除金黄色葡萄球菌[4]。万古霉素是治疗金黄色葡萄球菌的首选药物，然而1996年日本发现万古霉素中介的金黄色葡萄球菌(VISA)，2002年和2004年美国又相继报道万古霉素高度耐药的金黄色葡萄球菌(VRSA)。同时细菌的耐药性从医院内菌株发展至医院外菌株，同时也从对单种药物耐药发展至多重耐药，成为临床治疗棘手的难题。因此，探求新的不同于抗生素的抗菌药物对于改善感染性疾病的治疗现状具有重要意义。
本结果显示，柑橘柠檬提取物对金黄色葡萄球菌有显著的抑制作用，且对能形成生物膜细菌有杀伤作用。有研究报告指出，提取物对人和动物实验表明，无论口服还是注射，不会在任何器官中蓄积，目前认为柠檬提取物无毒副作用，可以大量摄入，应用小鼠体细胞、生殖细胞和微生物检测系统，从不同检测终点证明它无致突变性。 本组研究证实了这一点。金银花对多种致病菌均有一定抑制作用。这些病原菌包括引起中医热毒证的金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌，引起肠道急性热性感染的伤寒杆菌、副伤寒杆菌、志贺氏菌、福氏痢疾杆菌以及霍乱杆菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、结核杆菌等。现代药理学研究表明：金银花含有丰富的绿原酸，具有广泛的抗菌作用，木犀草素也有抗菌作用，其他成分如肌醇、皂苷、鞣酸等，因为它们含有大量的还原基团，所以对多种致病菌具有抑制作用。本结果显示甘肃金银花虽然抑制效果不是最好，但是也有很强的抑菌效果。
总之，大豆异黄酮、柠檬提取物和甘肃金银花都对多重耐药金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，提示其在感染性疾病以及生物膜相关性疾病的治疗中将具有广阔的应用前景。
参考文献
[1] 杨杰，饶贤才.耐药机制指导下的抗金葡菌药物开发现状[J].微生物学杂志，2007，27(3)：83-86．
[2] 邱良雪，唐亮，高瑞霄.柠檬提取物对新城疫及柯萨奇病毒作用的实验研究[J].天津医科大学学报，2006，1(20)：30-33．
[3] 徐建设，焦明菲，王双林.柠檬提取物抑菌及抗病毒作用机理的研究[J].中国消毒学杂志，2007，24(1)：13-15．
[4] 李立，王苏健，应冠一.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌5类抗生素耐药基因研究[J].现代实用医学，2003，15(11)：677-679
