【www.zhangdahai.com--试用期工作总结】
【摘要】目的:建立窿闭舒胶囊中补骨脂素和异补骨脂素含量测定方法。方法:采用单因素与正交试验设计法考察最佳提取条件,薄层-紫外法分离测定补骨脂素和异补骨脂素。结果:补骨脂素在0.62～6.20?g/mL(R2=0.9995,n=6),异补骨脂素在0.50～5.00?g/mL(R2=0.9996,n=6)范围内线性关系良好。补骨脂素的平均加样回收率为100.3%,RSD=1.0%(n=6);异补骨脂素的平均加样回收率为99.3%,RSD=1.5%(n=6)。不同批号癃闭舒胶囊中补骨脂素与异补骨脂素的含量分别为:0.480mg/粒、0.462mg/粒和0.284mg/粒、0.264mg/粒。结论:方法简便可行,可有效控制癃闭舒胶囊的质量。
【关键词】薄层-紫外法;癃闭舒胶囊;补骨脂素;异补骨脂素
doi:10.3969/j.issn.1006-1959.2010.05.229 文章编号:1006-1959(2010)-05-1236-02
Contents Analysis of Psoralen and Isopsoralen in Longbishu Capsules ZHOU Wu-ping�1,HUANG-Qiong�1,LIANG-Dan��2*�,CEN Fei-Fe�3. 1.Guangxi University of Technology,Liuzhou,Guangxi,545006,China;2.Guangxi Traditional Chinese Medical University,Nanning,Guangxi,530001,China;3.Leshan City District People"s Hospital,LeShan,Sichuan,614000,China
【Abstract】Objective:In order to establish a determination of psoralen and isopsoralen in longbishu capsules.Methods:The optimum experimental condition was set up by single-factor and orthogonal design test,and the psoralen and isopsoralen were separated and determined by TLC-UV.Results:The calibration curves were leaner in the rage of 0.62～6.20?g/mL(R2=0.9995,n=6)for psoralen and 0.50～5.00?g/mL(R2=0.9996,n=6)for isopsoralen.The average recovery of psoralen was 100.3%,RSD=1.0%(n=6);and that of isopsoralen was 99.3%,RSD=1.5%(n=6).The psoralen contents in the samples from different batch number were 0.480 mg/pill,0.462 mg/pill,and isopsoralen contents were 0.284 mg/pill,0.264 mg/pill.Conclusion:The method is simple and reliable.It can be used for quality control of longbishu capsules.
【Key words】TLC-UV;Longbishu;Psoralent;Isopsoralent
癃闭舒胶囊由补骨脂、益母草、金钱草、海金沙、琥珀、山慈菇等中药加工而成的复方制剂[1],具有温肾化气,清热通淋,散结止痛等功效,用于肾气不足,湿热瘀阻之癃闭所致尿频、尿急、尿痛,小腹拘急疼痛,腰膝酸软等症;前列腺增生有以上症候者常应用[2~5]。其中补骨脂为主要原料药,主要活性成分为补骨脂素与异补骨脂素[1],《中国药典》(2005版)尚未收录癃闭舒胶囊质量控制标准[6],故采用薄层-紫外法,利用正交试验设计考察影响癃闭舒胶囊两成分提取率的因素,以补骨脂素与异补骨脂素为指标,建立一种适合基层单位的低成本检测方法。
1.仪器与试药
B2200S型超声波清洗仪(上海必能信有限公司);AL104型电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司);UV2100型紫外可见分光光度计(尤尼柯仪器有限公司);补骨脂素与异补骨脂素标准品(中国药品生物制品检定所);癃闭舒胶囊:石家庄科迪药业有限公司(生产批号:071001,071111);所用试剂均为分析纯。
2.方法与结果
2.1 对照品溶液制备。精密称取补骨脂素与异补骨脂素对照品适量,加无水乙醇分别制成补骨脂素浓度为124?g/mL、异补骨脂素浓度为100?g/mL的对照品溶液。
2.2 薄层色谱条件。固定相采用硅胶GF254板,展开剂为正己烷-乙酸乙酯(8:2),展距10cm,点样,展开,吹干,于254nm紫外灯下检视,样品在补骨脂素和异补骨脂素对照品相应位置上呈相同颜色的暗斑。
2.3 检测波长选择。分别取补骨脂素、异补骨脂素标准溶液在200nm～320nm波长范围内进行光谱扫描,补骨脂素的最大吸收在240nm处,异补骨脂素有最大吸收在246nm处,两者在290nm～300nm都有明显吸收峰。吸收特征比较相近,单波长测定含量会相互干扰。因此需通过薄层分离后,再分别进行紫外测定。
2.4 标准曲线制备。
2.4.1 补骨脂素标准曲线。分别配制0.62,1.24,2.48,3.72,4.96,6.20?g/mL的补骨脂素对照品溶液,在240nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,对照品浓度为横坐标,绘制标准曲线,结果在0.62～6.20?g/mL范围内补骨脂素浓度与吸光度线性关系良好。得到回归方程为Y=0.1116X+0.0124,R2=0.9995(n=6)。
2.4.2 异补骨脂素标准曲线。分别配制0.50,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00ug/mL的异补骨脂素对照品溶液。在246nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,对照品浓度为横坐标,绘制标准曲线,结果在0.50～5.00ug/mL范围内异补骨脂素浓度与吸光度线性关系良好。得到回归方程为Y=0.1366X+0.0333,R2=0.9996(n=6)。
2.5 提取条件。
2.5.1 提取方法的确定。取同一批癃闭舒胶囊10粒,倾出内容物,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于3粒的量),分别用索氏提取法、冷浸法、超声提取法、回流提取法提取,按上述条件展开测定,结果显示超声法提取率较高,耗时较短,装置比较简单,得到的续滤液较澄清,方法简便快速。
2.5.2 提取试剂的确定。取同一批癃闭舒胶囊10粒,倾出内容物,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于3粒的量),分别试用氯仿、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿-乙醇(7:3)50ml为溶剂,超声提取30min,滤过,蒸干,残渣加适量无水乙醇使溶解,用无水乙醇定容至5ml容量瓶,按上述条件展开分离测定。结果显示乙酸乙酯的提取率较低,用氯仿及其与乙醇混合溶剂的提取效果相当。
2.5.3 正交试验设计。根据预试结果,以氯仿与乙醇混合溶剂不同配比、溶剂用量、提取时间3个因素,每个因素3个水平,用L9(34)正交表进行正交试验,优选癃闭舒胶囊的提取工艺。提取效果通过测定补骨脂素与异补骨脂素的总含量进行考察,结果(见表1,表2)。
表1 因素水平表
水平A溶媒比例B溶媒用量(w/v)C提取时间(min)
13�7(氯仿:乙醇)1:2015
26�4(氯仿:乙醇)1:4030
3氯仿1:6045
表2 正交设计实验结果
试验号AB空列C总含量(mg/粒)
111111.44
212221.52
313331.68
421231.78
522311.71
623121.85
731322.04
832132.16
933212.19
k�11.551.751.821.78
k�21.781.801.831.80
k�32.131.911.811.87
R1.750.460.060.28
(表2)的直观分析表明,影响提取效果的各因素作用主次为A>B>C,得到的最佳的提取工艺为A3B3C3。因此,本实验确定的最佳提取条件是选用氯仿为溶剂,提取溶媒用量为60倍,超声提取45min。
2.6 方法学考察。
2.6.1 精密度试验。分别吸取补骨脂素与异补骨脂素对照品溶液,依次点于同一硅胶GF254薄层板上,按“样品测定”项下分离测定,结果补骨脂素吸光度的RSD=1.57%(n=6),异补骨脂素吸光度的RSD=1.84%(n=6),显示同板精密度良好。吸取补骨脂素与异补骨脂素对照品溶液,依次点于6块硅胶GF254薄层板上,按上述条件展开测定,结果补骨脂素吸光度的RSD=1.73%(n=6),异补骨脂素吸光度的RSD=1.54%(n=6),显示异板精密度良好。
2.6.2 稳定性试验。精密吸取供试品溶液按上述条件薄层分离测定,在0、1、2、3、4、5h分别测定。结果显示补骨脂素和异补骨脂素在5小时内测定稳定,补骨脂素吸光度的RSD=1.13%(n=6),异补骨脂素吸光度的RSD=1.12%(n=6)。
2.6.3 重复性试验。取同一批癃闭舒胶囊20粒,倾出内容物,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于3粒的量),共6份,分别按“样品测定”分离测定。结果补骨脂素含量的RSD=1.78%(n=6),异补骨脂素含量的RSD=1.87%(n=6)。结果显示方法重复性良好。
2.6.4 加样回收率试验。取已知含量的同一批样品内容物约0.45g,共6份,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别精密加入补骨脂素对照液(0.720mg/mL)和异补骨脂素对照液(0.425mg/mL)适量,混匀蒸干,按照样品测定项下操作,按色谱条件进行测定。补骨脂素的平均加样回收率为100.3%,RSD=1.0%(n=6);异补骨脂素的平均加样回收率为99.3%,RSD=1.5%(n=6)。
2.7 样品测定。取癃闭舒胶囊样品10粒,倾出内容物,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于3粒的量),置于具塞锥形瓶中,加入氯仿,用量按料液比1:60加入。密塞,称定重量,超声45min,放冷,摇匀,滤过,蒸干,残渣用氯仿溶解,定容至5mL容量瓶中。分别吸取样品溶液、补骨脂素和异补骨脂素对照品液点于同一硅胶GF254薄层板上,点样量24?L,以正己烷-乙酸乙酯(8:2)展开10cm,取出,吹干,在紫外灯(254nm)下检视、定位,刮下与标准品斑点对应的硅胶粉末,同时刮取板上相应位置适量空白硅胶粉末,分别置5mL离心管中,精密加4mL无水乙醇,强烈振荡,使提取完全,离心10min(3000r•min-1),以空白硅胶粉末离心管中的上清液为空白,分别在240nm和246nm波长处测定相应样品上清液的吸光度,结果(见表3)。
表3 样品测定结果(mg•粒-1)
批号补骨脂素异补骨脂素
0710010.4800.284
0711110.4620.264
3.讨论
实验曾考察不同薄层板、不同展开剂及不同展距对补骨脂素和异补骨脂素分离效果的影响,最后选用GF254板,展开剂正己烷-乙酸乙酯(8:2),展距10cm,展开效果较好,无需显色,在紫外灯下观察,补骨脂素和异补骨脂素能分离得较好,斑点清晰集中,Rf值适中。利用最佳提取条件提取,用薄层-紫外分光光度法先分离后分析作为癃闭舒胶囊检测手段,检测仪器成本低,操作简便,方法可行。
参考文献
[1] 李守拙,潘海峰.薄层扫描法对癃闭舒胶囊中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定[J].中成药,2005,25(8):627～629.
[2] 米磊,崔琛,连亚楠.癃闭舒胶囊治疗良性前列腺增生疗效的观察[J].中国临床医药研究杂志,2004,129:16.
[3] 王宏志.癃闭舒胶囊治疗良性前列腺增生疗效观察[J].中华男科学杂志,2005,11(11):873～875.
[4] 朱湘生,周巧奇,陈兴无,等.癃闭舒胶囊治疗慢性前列腺炎临床疗效观察[J].中华男科学杂志,2005,11(12):958～959.
[5] 郭锋,孙传岐.癃闭舒治疗慢性前列腺炎90例疗效观察[J].齐鲁豫事,2007,26(8):503～504.
[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京:化学工业出版社,2005:129～130.
