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【摘要】目的：对不同工艺茵栀黄注射液质量进行研究。方法：以黄芩苷含量、鞣质检查、澄明度为主要指标，对不同工艺的茵栀黄注射液进行质量考察。结果：工艺对质量的影响较大，其中茵陈提取总黄酮，水提醇沉制得金银花提取物，配液后进行超滤或者加壳聚糖澄清，这两种工艺较好且稳定可控。结论：两种工艺均可用于茵栀黄注射液的质量改进，是有效的方法，其中加壳聚糖澄清改进工艺的茵栀黄注射液效果同于超滤，且成本低，且工艺简单，有利于大规模生产。
【关键词】茵栀黄注射液；工艺考察；质量；药效学
茵栀黄注射液收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十四册，处方由茵陈提取物，栀子提取物，金银花提取物，黄芩苷组成。主要有效成分为：蒿属香豆素滨蒿内酯、绿原酸、对羟基苯乙酮、环烯醚萜类物质栀子苷和京尼平苷、黄芩苷、茵 陈 色酮等各种色酮。具有退黄疸、降低谷丙转氨酶、解痉利胆、抗病原微生物及利尿的作用。[1]
临床报道茵栀黄注射液有时有一定的不良反应，其原因之一是茵栀黄注射液制备工艺比较简单，没有除尽鞣质以及相关大分子。所以茵栀黄注射液工艺改进尤为必要。[4]
1实验材料
1.1药品及主要试剂
药品黄芩苷标准品（购自中国药品生物制品检定所，批号为715-8501），供含量测定用。
试剂甲醇为色谱甲醇，水为重蒸馏水，其它均为分析纯，葡萄糖，葡甲胺。GOT、GPT试剂盒（南京建成科技有限公司）, 0.1 % CCl4的大豆油溶液，0.9 %的NaCl溶液（用于稀释注射液浓度为原来的1/5）。[3]
1.2主要仪器 Waters 600E-2487型高效液相色谱仪、Millennium32色谱工作站数据处理系统，均为美国产，分析天平：十万分之一（湘仪天平仪器厂），
756型 紫外�可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司），高速冷冻离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司），MILLIPORE 10kd超滤管，3号垂熔玻 璃器漏斗（由黑龙江中医药大学附属第一医院药物制剂科提供）。
2注射液不同制备工艺
2.1工艺一（部颁标准工艺）
2.1.1提取工艺
黄芩甙的制备：将黄芩的水提液部分浓缩，用盐酸调节pH值至1.0～2.0,80℃保温，静置，滤过，沉淀物加适量水搅匀，用40%氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，加入适量活性炭，充分搅拌，加1倍量乙醇加热搅匀，趁热滤过，滤液用盐酸调pH至2.0,60℃保温，静置，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后，于60℃以下真空干燥，得黄芩苷，经高效液相色谱法测定黄芩苷含量达到92.7%
（以下配液工艺均用此黄芩苷）。
茵陈提取物：由茵陈药材用90％乙醇渗漉后水沉去杂制得。栀子提取物：栀子药材用70％的乙醇回流后再用95％乙醇沉淀制得。金银花提取物：由金银花药材经水提，石硫醇法去杂制得。
2.1.2配液工艺
以上四味（茵陈提取物6g， 栀子提取物，3.2g，黄芩甙 20g，金银花提取物-以绿原酸计-4g），取黄芩甙加水适量润湿，用氢氧化钠溶液溶解；其余茵陈提取物等三味分别加水溶解，另取葡萄糖20g，葡甲胺5g加水溶解，混匀，调节pH值,以注射用水稀释至1000ml，粗滤，过G3滤球，灌封，灭菌，即得。
2.2 工艺二
（1）茵陈提取物：以总黄酮含量为指标，经正交试验优化，确定为加10倍量70%乙醇，回流3次，每次1.5小时。合并提取液并浓缩至膏状，然后加10倍量蒸馏水沉淀，过滤后减压浓缩、干燥得茵陈提取物。（2）栀子提取物：同工艺一。（3）金银花提取物：由金银花药材经水提醇沉制得。
配液后，粗滤，过G3滤球精滤，然后用分子量为10kd的聚砜膜超滤，灌封，灭菌即得。
2.3工艺三
提取同工艺二；配液后，粗滤，然后过G3滤球精滤，滤液加适量0.5%的壳聚糖水溶液（经反复试验后，确定加入量为5%）澄清，离心后，取上清液，减压浓缩到原来体积，灌封，灭菌即得。
2.4工艺四
茵陈和栀子用量按部颁标准的出膏率折算成药材，金银花和黄芩按药材中绿原酸和黄芩苷含量折算，四味药材混合后，水提醇（75%）沉，过滤，减压浓缩至无醇味，按部颁标准配液工艺配液后，粗滤，过G3滤球精滤，然后用分子量为10kd的聚砜膜超滤，灌封，灭菌即得。
2.5工艺五
混合提取同工艺四。按部颁标准工艺配液后，粗滤，过G3精滤，然后加0.5%的壳聚糖水溶液适量（经反复试验后，确定加入量为5%）澄清，离心后，取上清液，减压浓缩到原来体积，灌封，灭菌即得。
3不同工艺对质量的影响
3.1黄芩苷含量的测定
3.1.1色谱条件：色谱柱：Diamonsil C18柱（4.6×250mm，5µm）；流动相：甲醇― 0.2%磷酸（47：53）；流速：1.0 mL/min；检测波长：280nm，进样量：10μL，柱温30℃，理论塔板数按黄芩苷峰不低于2500
3.1.2溶液制备：
对照品溶液的制备：精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.34mg的对照品溶液。
供试品溶液的制备：精密吸取注射液1ml加入到25ml容量瓶中，然后加注射用水稀释至刻度，再从25ml容量瓶中吸取1ml加入到10ml容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，过0.45um微孔滤膜，即得。
3.1.3标准曲线的制备：
精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml分别加入到1ml容量瓶中，加甲醇定容，配成不同浓度的对照品溶液，过0.45um微孔滤膜后进样10ul，按上述色谱条件测定峰面积，以浓度（mg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标,计算回归方程为：Y=20667446.75X�133285.7793，相关系数r=0.9992.表明黄芩苷在34～170ug/ml范围内线性关系良好。
3.1.4方法学考察：
精密度试验：精密吸取同一对照品溶液，进样量10ul，连续进样6次，测定黄芩苷的峰面积，结果RSD=0.38%.表明仪器精密度良好。
重复性试验：取同一份茵栀黄注射液，按供试品溶液的制备方法制备6份样品液，分别测定黄芩苷含量，结果RSD=1.21%，表明此方法的重复性良好。
稳定性试验：取供试品溶液一份，分别在0、2、4、8、16、24h进样测定黄芩苷峰面积，RSD=1.63%
加样回收率试验:精密吸取已知含量的注射液0.15、0.3、0.45ml于不同的10ml容量瓶中，分别加入黄芩苷对照品贮备液1ml、2ml、3ml，配成低、中、高浓度各三份，按标准曲线的制备下的方法进行含量测定，计算加样回收率，结果见表1：
3.2鞣质及澄明度的检查
3.2.1鞣质的检查取注射液1 ml，加稀盐酸1滴，再加氯化钠明胶试剂4～5滴，不得出现浑浊和沉淀。
3.2.2 澄明度的检查 采用肉眼观察法。于灯检架下按常规进行检查。
3.3结果
以上个结果均见表2。
5讨论
鞣质的存在会造成注射部位疼痛、红肿及硬结等现象发生，含鞣质越多，疼痛越厉害。这是造成注射液临床不良反应的主要原因。所以鞣质的除去显得尤为必要。
部颁药品标准中的茵栀黄注射液各提取物只进行了简单的处理，配液后仍存在一些杂质，包括鞣质、蛋白质、多糖等大分子物质。由于金银花提取工艺采用了石硫法，提取物中杂质较多，而且还含有钙离子，影响了黄芩苷的稳定性。在配液过程中形成的不溶物夹杂了有效成分，结果黄芩苷损失了很多，进而影响了注射液的药效，对注射液的质量影响较大。
工艺2和3中金银花提取采用水提醇沉法，提取物中有效成分绿原酸含量明显升高，杂质较少，在配液后采用超滤和加壳聚糖（控制用量）的方法去除鞣质及大分子等杂质，结果澄明度得到明显的改善，黄芩苷的含量损失较少，且工艺3有利于工业化生产。反复试验后确定工艺2和工艺3精滤（过G3滤球）后，黄芩苷几乎没有损失，这与其药效学效果最好是一致的。分析认为：超滤法和壳聚糖澄清工艺的过程中黄芩苷少有损失的主要原因是黄芩苷吸附在了大分子物质上，由于吸附力的作用，被吸附的黄芩苷很难进入滤液。工艺4和5黄芩苷损失的主要原因是醇沉过程形成的不溶物包裹了黄芩苷。
参考文献
[1]卫生部药品标准.中药成方制剂第十四册[S].
[2]刘钢•茵栀黄分散片的药学研究•安徽医科大学硕士学位论文，2008.
[3]陈辉扬,陈军,温平康•茵栀黄注射液的药理作用与临床应用评价[J]•药品评价, 2005, 2(2): 122-124.
[4]杜延琪,张帆,龚文菲,林敬明•茵栀黄注射液的药理作用及不良反应研究分析•中药材，2009,32（4）：641-643.
[5]陈 彦， 范晨怡， 贾晓斌，何 苗•注射用金银花提取物制备的工艺改革•中成药，2006，28（12）:1816-1817.
注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文
