【www.zhangdahai.com--统战民宗公文】
【基金项目】卫生部公益性行业科研专项项目（No.200802159）;教育部高等学校博士点科研基金 (No.200804870009)；国家自然科学基金(No.30973148)
【摘要】目的:观察缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在卵泡不同发育期中的表达，初步探讨其与卵泡发育的关系。方法:选择不同周龄的C57BL/6J小鼠卵巢，用免疫组化法检测卵泡不同发育期中HIF-1α蛋白。结果:HIF-1α蛋白在不同发育期卵泡卵母细胞及颗粒细胞中均有表达，表达随卵泡发育而增强。且不同发育阶段卵泡中卵母细胞及颗粒细胞中HIF-1α蛋白表达差异具有统计学意义( P 50%，
卵泡发育可分为5期：始基卵泡，由一个初级卵母细胞和一层梭形的前颗粒细胞组成。初级卵泡，颗粒细胞形成单层立方形并且在卵母细胞外形成透明带。次级卵泡，卵泡继续增大出现双层或多层颗粒细胞,此时尚无卵泡腔形成。窦状卵泡，颗粒细胞间聚集的卵泡液增加最后融合形成卵泡腔［4］。
1.4统计学处理 :采用SPSS13. 0 软件对数据进行分析。对数据行双向有序资料的χ2检验。
2 结果
2. 1 HIF-1α蛋白免疫组化结果：①着色部位: HIF-1α蛋白主要分布于细胞质,少量分布于细胞核。见图1，2，3。②HIF-1α蛋白表达于各级卵泡的卵母细胞和颗粒细胞，且表达水平随卵泡发育逐渐增强。始基卵泡与次级、窦状卵泡相比，卵母细胞和颗粒细胞中HIF-1α蛋白表达明显较低，差异有统计学意义( P 卵泡发育是一个受到多种因素精细调控的复杂过程，其中氧气含量也是调控卵泡生理功能的重要因素之一［7,8］。有文献表明：一方面由于卵巢内氧气浓度较低，其范围在1.3%-5.5%左右［9］；另一方面随着卵泡卵母细胞的生长发育以及颗粒细胞的增殖分裂，颗粒细胞需氧量逐渐上升，使卵泡处于缺氧状态。在本实验中观察到，作为缺氧状态主要感受器的HIF-1 α表达于卵泡的整个生长阶段，且其强度随着卵泡发育逐渐增强，证实了随着卵泡发育卵泡内氧需求量逐渐上升并且在始终处于相对缺氧状态。Alam［10］等研究表明：HIF-1α在体外培养颗粒细胞中通过 磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K）途径参与到FSH诱导的卵泡血管生成，本研究中观察到HIF-1α在窦状卵泡中强烈表达，为此实验提供了直接的体内实验证据，同时亦提示HIF-1α可能参与到GnRH，FSH，LH等调控卵泡发育的过程。说明HIF-1 α参与了卵泡发育整个过程，并可能在此过程中通过上调VEGF等基因表达进而促进卵泡中新生血管形成，从而对卵泡的生长发育发挥重要调控的作用。
综上，卵泡生长发育的过程受到众多因素的调节，对其中卵泡局部氧气浓度对于调节其生长发育至关重要。本试验提出卵泡中HIF-1 α表达在调控生长卵泡中新生血管发挥一定作用。实验结果为探索局部氧气浓度在调控卵泡生长发育中具体作用提供了新的思路，并为日后的进一步研究奠定基础。
参考文献
［1］Broekmans FJ; Soules MR;Fauser BC et al. Ovarian Aging: Mechanisms and Clinical Consequences ［J］. Endocr. Rev. 2009 30:465-493
［2］Wenger RH, Gassmann M. Oxygen(es) and the hypoxia � induced factor［J ］ .Bioll Chem,1997 ,378(7) :609 - 16.
［3］张爱群，孙富国，曾博文 等 MMP-13在卵巢子宫内膜异位症中的表达及临床意义［J］ 中国现代医学杂志 2010 21 (1) 61-3.
［4］丰有吉,沈铿主编.妇产科学.第1版.北京:人民卫生出版社,2005.21-23
［5］Harris SE, Leese HJ, Gosden RG, et al. Pyruvate and oxygen consumption throughout the growth and development of murine oocytes ［J］. Mol Reprod Dev. 2009 Mar;76(3):231-8.
［6］Wang GL , Semenza GL. Purification and characterization of hypoxia-inducible factor 1 ［J ］ . J Biol Chem , 1995 , 270 :1230- 37.
［7］Sutton-McDowall ML, Mitchell M, Cetica P, et al. Glucosamine supplementation during in vitro maturation inhibits subsequent embryo development: possible role of the hexosamine pathway as a regulator of developmental competence ［J］. Biol Reprod. 2006 May;74(5):881-8.
［8］Van Blerkom J, Antczak M, Schrader R. The developmental potential of the human oocyte is related to the dissolved oxygen content of follicular fluid: association with vascular endothelial growth factor levels and perifollicular blood flow characteristics ［J］. Hum Reprod. 1997 May;12(5):1047-55.
［9］Semenza GL, Wang GL. A nuclear factor induced by hypoxia via denovo protein synthesis binds to the human erythropoietin gene enhancer at a site required for transcriptional activation［J］. Mol Cell Biol, 1992, 12 （12 ）： 5447-54.
［10］Alam H, Weck J, Maizels E, et al. Role of the Phosphatidylinositol-3-Kinase and Extracellular Regulated Kinase Pathways in the Induction of Hypoxia-Inducible Factor (HIF)-1 Activity and the HIF-1 Target Vascular Endothelial Growth Factor in Ovarian Granulosa Cells in Response to Follicle-Stimulating Hormone ［J］. Endocrinology. 2009 Feb;150(2):915-28.
作者简介:赖志文（1984-），男，在读博士研究生，研究方向：妇科疾病。
