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【摘要】 目的：建立复方鸡骨草胶囊（鸡骨草、栀子、枸杞子、白芍）中栀子苷含量测定方法。方法：采用HPLC，以CLC-ODS柱为固定相，甲醇-0.1%磷酸溶液（22∶78）为流动相，检测波长为240nm。结果：栀子苷在（0.0248～0.1488）mg・mL-1（r=0.9999）范围内呈良好的线性关系，平均加样回收率栀子苷99.52%、RSD=1.18%（n=6）。结论：含量测定方法简便准确，重复性好，可用于控制复方鸡骨草胶囊的质量。
【关键词】 复方鸡骨草胶囊；栀子苷；HPLC
Dtermination of geniposide in Fufang Jigucao capsule by HPLC
ZHOU Hai*，XIE Xue-shen，CHEN Zhang-yuan
（Guangxi Yulin Pharmaceutical Co., Ltd, Yulin 537001,China）
【Abstract】 Objective： To develop an HPLC method for the determination of geniposide in Fufang Jigucao capsule (Herba Abri, Fructus Gardeniac, Fructus, Radix Paeoniae Alba). Methods：Samples were separated on a CLC-ODS colum with the mobile phase of methanol-0.1%H3PO4（22∶78）and the detection wavelength was set at 240nm. Results：The calibration curve was linear in the range of（0.0248-0.1488）mg・mL-1（r=0.9999）for geniposide.The average recoveries were 99.52%、RSD=1.18%（n=6）. Conclusion：The method is accurate and repentable, and can beused for the quality control of Fufang Jigucao capsule.
【Key words】Fufang Jigucao capsule；geniposide；HPLC
复方鸡骨草胶囊由鸡骨草、栀子、枸杞子、白芍等中药材制成，具有清肝利胆，清热解毒的功效；用于肝胆湿热引起的胁肋不舒、胃脘胀痛、疲倦乏力、口苦、小便黄赤。而栀子作为其中的主药之一，选择栀子中的主要活性成分栀子苷[1]作为定量的指标，可以较好地控制该产品的质量。
1仪器、试药与样品
高效液相色谱仪：日本岛津LC-10AD泵，SPD-10AV紫外检测器，C-R7Ae数据处理机；超声波提取器CQF-1-6（中船七院七二六所）。甲醇为色谱纯、磷酸为分析纯；水为去离子水。栀子苷对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号：110749-200512）；复方鸡骨草胶囊由广西玉林制药有限责任公司生产。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱为Shim-pak CLC-ODS（φ6.0 mm×150 mm，10 µm，日本岛津）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(22:78)，流速：1.0 ml・min-1，柱温：30℃，检测波长：240 nm，进样量10 µl。
2.2对照品溶液制备
取栀子苷适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含60 µg的溶液，即得。
2.3供试品溶液制备取20粒复方鸡骨草胶囊的内容物，研细、混匀，取约0.5g，精密称定，加甲醇30ml，超声处理（功率300W，频率50kHz ）20分钟，取出，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量甲醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.4干扰试验按处方制备不含栀子药材的样品，照“2.3”方法制备阴性样品溶液，取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果表明阴性样品溶液对测定无干扰。结果见图1。
2.5标准溶液制备与线性考察精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.248mg的溶液作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液1.0、2.0、3.0 、4.0、5.0、6.0 ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，各精密吸取10µl，在上述色谱条件下，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，栀子苷浓度为横坐标绘制标准曲线，得线性回归方程：Y（峰面积）=365768X（µg）+3998，R=0.9999（n=6），实验表明：栀子苷在（0.0248～0.1488）mg・ml-1范围内呈良好的线性关系。
2.6精密度试验取同一份供试品溶液，在上述色谱条件下，精密吸取10µl，注入液相色谱仪，重复进样5次，测定每次进样的峰面积，结果峰面积的RSD为1.00%（n=5）。
2.7稳定性试验吸取供试品溶液10µl，在上述色谱条件下，于0、1、4、8、12、24小时，分别注入液相色谱仪，测定栀子苷峰面积，结果栀子苷峰面积RSD=1.34%，说明栀子苷在24小时内稳定。
2.8重复性试验取同一批号的复方鸡骨草胶囊样品5份，按供试品溶液制备项下操作，制备5份供试品溶液，在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl注入液相色谱仪，测得栀子苷的平均含量为5.0812(mg・ g-1），RSD为1.02%(n=5)。
2.9回收率试验精密称取已知栀子苷含量(5.6624 mg・g-1)的复方鸡骨草胶囊样品6份，分别准确加入栀子苷对照品溶液（2.80 mg・ml-1）各1ml，按供试品溶液制备项下操作，制备6份供试品溶液，在上述色谱条件下，分别吸取10µL注入液相色谱仪，结果见表1。
2.10样品测定
精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录峰面积，根据对照品栀子苷的峰面积，计算出样品溶液中栀子苷的含量（见表2）。
3讨论
3.1复方鸡骨草胶囊由10多味中药组成。采用《中国药典》2005年版[2]测定栀子苷的条件无法达到主峰与杂质峰的基线分离，也曾经采用中性氧化铝和大孔树脂对供试品溶液进行过柱处理，但分离效果均不佳。
3.2曾据资料选择流动相：曾试验过如：乙腈-0.1%磷酸水溶液（12:88）[3]、水-乙腈（85:15）[4]、乙腈-水（13:87）[5]等流动相，结果分离效果不佳，并且由于酸度较低，流动相容易长霉，造成柱压升高，影响到准确测定栀子苷的含量，结果以本实验收载的流动相甲醇-0.1%磷酸溶液（22:78）为最佳。
[参考文献]
[1]王喜军．高效液相色谱在中药研究中的应用[M]．哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，199.98．
[2]中国药典[S]. 一部.2005：173.
[3]李长根.刘春亮．HPLC法测定孕妇金花中栀子苷的含量[J]．安徽医药，2007，11（11）：1010.
[4]商伟.白旭东．高效液相色谱法测定新雪颗粒中栀子苷的含量[J]．中国中医药信息杂志，2005，12（8）：36.
[5] 刘天柱,莫结丽.ＨＰＬＣ法测定龙胆泻肝片中栀子苷的含量[J]．中国医药导报，2008，5（10）：34.
（收稿日期：2008-11-04）
