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【摘要】目的:建立了HPLC法测定小儿咽扁颗粒中绿原酸含量测定方法。方法:采用ODS-C18(150mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-0.4%磷酸溶液(13:87),流速1.0ml/min,检测波长327nm。结果:柚皮苷的线性范围为20-200μg/ml,平均回收率为:99.64%,精密度RSD为0.41%,重现性RSD为0.25%,稳定性RSD值为0.87%。结论:本法用于测定小儿咽扁颗粒中绿原酸的含量方法准确简便。
【关键词】HPLC;小儿咽扁颗粒;绿原酸。
【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)16-085-1
小儿咽扁颗粒是由金银花、射干等八味中药组成的复方制剂。具有清热利咽,解毒止痛的作用。临床主要用于肺实热引起的咽喉肿痛,咳嗽痰盛,咽炎等症。本实验采用HPLC法测定制剂中绿原酸的含量,有效地分离降解产物,准确测定绿原酸的含量,获得满意结果。
1仪器与试药
岛津LC-10AT HPLC仪,Class-VP工作站,BP211D型电子天平(德国)。绿原酸(中国药品生物制品检定所提供),小儿咽扁冲剂(西安金花制药厂自制,批号为080417、080423、080428),乙腈为色谱纯,水为高纯水,其它试剂为分析纯。
2色谱条件选择
色谱柱:ODS-C18(150mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-0.4%磷酸溶液(13:87)、流速:1.0ml/min、检测波长:327nm、进样量:10μl、理论板数:应不低于2000。
3溶液制备
3.1对照品溶液的制备取绿原酸对照品适量,加50%甲醇溶液,配制成每1ml含绿原酸0.04mg的溶液,既得。
3.2供试品溶液的制备取本品约2g精密称定,精密加入50%甲醇溶液25ml,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,并用50%甲醇溶液补足减失的重量,摇匀,精密量取续滤液5ml置25ml容量瓶中,精密加入50%甲醇溶液至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液即得。
4金银花阴性溶液的制备和测定
取除金银花外其余各味药材,按处方量配料并制成阴性样品,用正文中提供的供试品溶液制备方法制阴性空白溶液,并按供试品分析方法测试。结果表明,阴性供试品中的其它成分对绿原酸的测定无干扰。
5检测波长、流动相的选择
本实验选用中国药典2005年版一部金银花项下含量测定中绿原酸的吸收波长327nm与流动相配制方法作为检测波长与流动相。
6线性范围
精密称取绿原酸对照品,加50%甲醇溶液,制成浓度为0.2mg/ml的溶液。分别精密吸取该对照品溶液适量,制得绿原酸浓度分别为0.2、0.16、0.12、0.08、0.04、0.02 mg/ml的溶液,按上述色谱条件测定峰面积,以绿原酸浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线,绿原酸进样量与其响应值(0.2μg～2.0μg)之间呈良好的线性关系。
小儿咽扁冲剂线性关系考察
计算回归方程为Y=16137167.7226X-2206.2688,r2=0.9999
7供试品溶液稳定性试验
取本品(批号080423),按供试品溶液制备方法制得,用含量测定项下的方法,每隔1～2小时进样一次,RSD值为0.87%,本品在8小时之内稳定。
8精密度试验
精密吸取对照品溶液10μl,重复进样6次,结果绿原酸RSD值为0.41%。
9重现性试验
取本品(批号080423)精密称取6份,分别按供试品溶液制备方法制得,照含量测定项下的方法操作、测定。结果RSD值为0.25%,该方法重复性好。
10回收率试验
取已知含量的供试品(080423),依供试品溶液制备方法处理后,精密加入绿原酸对照品,摇匀,制备成待测的回收率供试品溶液,测定6次。
回收率试验数据统计
编号 已知供试品中
绿原酸的量(mg) 加入绿原
酸的量(mg) 实测绿原酸的量(mg) 回收率 RSD%
1 1.2430 0.50 0.7387 100.89 0.68%
(n=6)
2 1.2380 0.50 0.7387 99.86
3 1.2336 0.50 0.7387 98.98
4 1.2368 0.50 0.7387 99.62
5 1.2350 0.50 0.7387 99.26
6 1.2349 0.50 0.7387 99.24
平均回收率% 99.64%
经数据可见,RSD为0.68%,回收率高且稳定。
11三批中试产品含量测定
取中试产品(批号080417、080423、080428),按含量测定项下的要求制备供试品和对照品溶液,其绿原酸含量值分别为0.7387、0.7515、0.7513 mg/g。
结论:HPLC法测定小儿咽扁冲剂含量符合标准规定。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:化学工业出版社,2005.
[2] 部颁标准.中药成方制剂(第八册)[S].
[3] 白海波,王剑飞,周蒂.金银花提取条件对绿原酸含量的影响[J].中国现代应用药学,2003,02.
