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【摘 要】 目的 探讨联合检测（Ki-67/MIB-1）、（MMP-2）及其抑制物（TIMP-2）在膀胱移行细胞癌中的表达及与肿瘤病理因素和复发、预后的关系。方法 膀胱移行细胞癌石蜡包埋标本42例，正常对照标本5例，采用免疫组化SP法，对标本切片进行染色。结果 Ki-67/MIB-1、MMP-2、TIMP-2在G1 、G2、G3 各级别间及PTa+PT-1、PT-2、PT-3、PT-4各期间差异有统计学意义（P＜0．05）；Ki-67/MIB-1和MMP-2的表达率随着肿瘤病理分级，临床分期的升高而增加，而TIMP-2的表达率则呈下降趋势。Ki-67/MIB-1阳性表达者，肿瘤复发率比无表达者差异有统计学意义（P＜0．05）;而MMP-2和TIMP-2阳性表达者和阴性表达者复发率差别无统计学意义（P＞0．05）。死亡病例Ki-67/MIB-1、 MMP-2的阳性表达率明显高于存活病例，两者比较差异有统计学意义（P＜0．05）；而TIMP-2在死亡者和存活者两者间比较差异无统计学意义（P＞0．05）。说明Ki-67（MIB-1）和MMP-2的阳性表达与膀胱移行细胞癌的预后呈正相关。结论 Ki-67（MIB-1）、MMP-2、TIMP-2的阳性表达率与膀胱移行细胞癌的临床分期、病理分级密切相关；Ki-67（MIB-1）的阳性表达率与膀胱移行细胞癌的复发密切相关； Ki-67（MIB-1）、MMP-2的阳性表达率与膀胱移行细胞癌的预后密切相关，可作为判断预后的指标。
【关键词】 膀胱移行细胞癌;细胞核相关抗原;基质金属蛋白酶;基质金属蛋白酶抑制物
我们采用免疫组织化学（SP法）对42例膀胱移行细胞癌中检测Ki-67/MIB-1、MMP-2和TIMP-2在膀胱移行细胞癌（TCCB）中的表达，探讨其与临床分期、病理分级的关系以及与肿瘤复发、预后的关系，现报告如下。
1 材料与方法
1．1 材料来源 收集我院2000～2003年泌尿外科膀胱移行细胞癌石腊包埋标本42例，男31例，女11例；年龄36～78岁，平均64岁。临床分期按TNM分期：Ta期8例，T-1期15例，T-2期11例，T-3期6例，T-4期2例；病理分级按WHO标准确定：G1 级13例，G2级19例，G3级10例。42例均行手术切除，41例患者术后获随访，随访时间39～51个月。同时取5例因前列腺增生症手术患者的膀胱壁作为正常膀胱对照组。
1．2 试剂与方法 使用的一抗鼠人Ki-67（MIB-1）、MMP-2、TIMP-2抗体，DAB显色剂，SP免疫组化试剂均购自福州迈新公司。采用链霉菌过氧化物酶法。免疫组化步骤按试剂盒说明进行，Ki-67用微波炉修复抗原。以PBS代替一抗作空白对照，以已知的Ki-67/MIB-1、MMP-2、TIMP-2阳性的人乳腺癌组织切片作为阳性对照。Ki-67（MIB-1）以细胞核着色棕黄色作为阳性；MMP-2、TIMP-2以细胞胞浆染成棕黄色或棕褐色作为阳性细胞。每张切片随机计数5个视野，计数100个，染色细胞数＞25%定为阳性，≤25%定为阴性。统计学处理：用统计软件SPSS10．0处理，计量资料采用χ2检验，若遇小样本资料采用Tisher精确检验法，P＜0．05或P＜0．01为差异有统计学意义。
2 结果
2．1 正常膀胱组织表达情况 正常膀胱组织中Ki-67（MIB-1）、MMP-2、TIMP-2均无表达。
2．2 Ki-67（MIB-1）、MMP-2、TIMP-2表达与膀胱移行细胞癌病理分级、临床分期的关系 见表1。
Ki-67（MIB-1）＋阳性率MMP-2＋阳性率TIMP-2＋阳性率存活3414（41．18）15（44．12）21（61．76）死亡77（100）7（100）4（57．1）P值＜0．05＜0．05＞0．05Ki-67（MIB-1）在死亡者中的阳性表达率比存活者中的表达率明显升高，两者比较差异有统计学意义（P＜0．05）。MMP-2在死亡者中的阳性表达率比存活者中的阳性表达率明显升高，两者比较差异有统计学意义（P＜0．05）。TIMP-2在死亡者中的阳性率和存活者中的阳性率两者比较差异无统计学意义（P＜0．05)。
3 讨论
膀胱癌在我国泌尿外科肿瘤中的发病率和死亡率均占首位，其中约90%左右为移行细胞癌。膀胱癌的生物学行为非常复杂,具有易复发的特点。恶性肿瘤的主要特征是恶性细胞的随意增殖，细胞增殖性与癌的浸润性有关。近年来研究发现Ki-67、PCNA是较为肯定的核增殖标志基因。Ki-67的表达与细胞周期密切有关，它在G1后期开始出现，在S期和G2期逐渐升高，M期达到高峰，有丝分裂结束后迅速降解消失，G-0期无表达。由于Ki-67半衰期短，使之成为优于细胞增殖核心抗原（PCNA）的最可靠反映细胞增殖活性的指标。Ki-67是增殖细胞关连蛋白相对的抗体，DNA复制合成时的心肌酶，是膀胱癌浸润性表达因子或预后因子[1]。国外资料报道，Ki-67（MIB-1）的表达强度随着肿瘤分期分级的升高而升高，高表达率与不良预后密切相关[2]。 本研究采用免疫组化方法测定膀胱移行细胞癌组织中Ki-67（MIB-1）的表达，并以正常膀胱组织为对照。结果显示： Ki-67（MIB-1）的表达随着肿瘤分化程度的增高而减弱（P＜0．05）;浸润性肿瘤（T-2～4期）的Ki-67（MIB-1）表达率明显高于浅表性肿瘤（T-a、T-1期）（P＜0．05），表明TNM临床分期与Ki-67（MIB-1）表达呈正相关，提示Ki-67（MIB-1）阳性表达者肿瘤复发率比无表达者显著升高（P＜0．05）,说明Ki-67（MIB-1）蛋白表达与膀胱移行细胞癌的复发密切相关。死亡病例中Ki-67（MIB-1）的表达率明显高于存活病例（P＜0．05），说明Ki-67（MIB-1）蛋白表达与膀胱移行细胞癌的预后密切相关，提示Ki-67（MIB-1）可作为判断膀胱移行细胞癌预后的指标。肿瘤细胞在穿越组织屏障（主要为细胞外基质及基底膜）向身体远膈部位移动的过程中需产生或诱导产生蛋白酶类以降解细胞外基质。MMP-2是降解细胞外基质的重要蛋白水解酶，又被称为胶原酶A，能够降解细胞外基质和基底膜的主要成分IV型胶原，从而参与肿瘤的浸润和转移过程，因而与肿瘤的关系更为密切。免疫组化结果显示，MMP-2主要由肿瘤细胞表达。Davies[3]等发现MMP-2和MMP-9的表达与膀胱癌的病理分级和临床分期无关，并且与患者的预后无关。Kanayama[4]的研究认为膀胱癌中MMP-2可以作为一项估计膀胱癌预后的指标。MMP-2和MMP-9的活性受多种因素调节，主要调节因素为TIMPs同MMPs的分泌比率（MMPs/TIMPs）[5]。在肿瘤组织内，TIMP-2的表达一般高于正常组织，这是机体针对肿瘤组织内MMP升高而产生的继发性基因表达上调。膀胱癌中TIMP-2的表达随着病理分级的升高而降低，主要原因是浸润性膀胱癌中癌细胞TIMP-2的表达机制逐渐受到了破坏，无法发挥抑制MMP-2的作用，癌细胞因此可向周围侵袭生长。因此目前认为，TIMP-2在肿瘤组织中有双向调节功能，膀胱癌早期，细胞TIMP-2的表达机制建立，分泌过量的TIMP-2反而起到了促进肿瘤生长的作用。本组研究显示： MMP-2的阳性表达率随病理分级、临床分期的增加而增加，而TIMP-2的表达率则随分级、分期的增加而减弱。各期、各级之间差异有统计学意义（P＜0．05）；MMP-2和TIMP-2阳性表达者和阴性表达者复发率差别无统计学意义（P＞0．05），说明MMP-2、TIMP-2阳性表达率与肿瘤复发无关。死亡病例中MMP-2的阳性表达率明显高于存活病例，两者比较有统计学意义（P＜0．05），而TIMP-2在死亡及存活病例中的阳性表达率比较差异无统计学意义（P＞0．05）。本组研究发现，Ki-67（MIB-1）阳性表达率与MMP-2阳性表达率相关,可能共同影响膀胱移行细胞癌的发生、发展过程，其作用机理尚需进一步研究。因此，联合检测Ki-67（MIB-1）及MMP-2的表达可以更准确判断膀胱移行细胞癌的预后。
参考文献
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