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[摘要]目的:建立氨基己酸注射液细菌内毒素检查法。方法:按中国药典2005年版二部附录收载的细菌内毒素检测方法及指导原则进行实验。结果:将氨基己酸注射液稀释40倍后不干扰鲎试剂与细菌内毒素的凝集反应。结论:可以用细菌内毒素检查法来控制氨基己酸注射液的安全项检查。
[关键词]氨基已酸;细菌内毒素检查法
[中图分类号]R927
[文献标识码]B
[文章编号]1006-1959(2009)11-0240-02
1 实验材料
XW-80A 型旋涡混合器;TAL-40 型试管恒温仪;微量取液器(50-250μl);
细菌内毒素检查用水(BET);0801220细菌内毒素工作标准品(150601-200860 160EU/ml)鲎试剂(TAL)湛江(0804280 0809150 0810140 )
氨基己酸注射液:规格20ml:4g批号 080705080801 080902 用法:滴注:4～8g 一日。
2 方法与结果
2.1 鲎试剂灵敏度复核:鲎试剂灵敏度复核试验按细菌内毒素检查法操作,结果灵敏度在0.5λ～2.0λ之间,表明鲎试剂灵敏度标示值符合规定。
2.2 内毒素限值的确定:L=K/M 其中K为按规定的给药途径,人每千克体重每小时可接受的内毒素最大剂量,注射剂为K=5EU/(kg•h) M为本品人用每千克体重每小时给药的最大剂量M=6000mg/60kg 则L=K/M=5×60/6000=0.05EU/mg。本品的细菌内毒素理论限值L为0.05 EU/mg。
2.3 最大有效稀释倍数(MVD)的确立:根据MVD=CL/λ=200×0.05/0.25=40倍 其中C=200mg/mlλ=0.25EU/ml
L=0.05EU/mg当不同灵敏度的鲎试剂MVD则不同,本文采用λ=0.25EU/ml则MVD=40倍 我们选用几个稀释液进行试验,如1∶101∶201∶301∶401∶50级别进行干扰试验。
2.4 供试品干扰预试验:用细菌内毒素检查用水将氨基己酸注射液(批号080705080801 080902)分别稀释成1∶10 ,1∶20,1∶30,1∶40, 1∶50列浓度,用λ=0.25EU/ml的鲎试剂进行实验,同时作阳性和阴性对照,结果见表1。
结果表明,供试品在原液至1∶30浓度时对细菌内毒素检查有抑制作用,供试品在至少40倍稀释后对鲎试剂无干扰作用。
2.5 供试品干扰试验:将样品40倍稀释后作为供试液,取供试液和细菌内毒素检查用水分别将内毒素稀释成0.5EU/ml,0.25EU/ml,0.125EU/ml,0.0625EU/ml系列浓度,分别取0.1ml加入.0.25EU/ml的鲎试剂管中,每一浓度平行做4支管,另取供试液和细菌内毒素检查用水各做2支阴性对照管,结果见表2。
表2表明,供试液经40倍稀释后,对鲎试剂无干扰。
2.6 样品细菌内毒素检查:取3批氨基己酸注射液(080705 080801 080902)每批5支,采用灵敏度0.25EU/ml的鲎试剂,将样品稀释40倍,分别按中国药典2005年版细菌内毒素检查法检查,结果见表3。
3 讨论
从上述实验可知,氨基己酸注射液的40倍稀释液对细菌内毒素检查法无干扰作用,该方法与家兔法相比,具有简便、迅速、重现性好、灵敏度高等优点,可以作为检测氨基己酸注射液细菌内毒素的方法。
