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[摘要] 目的:比较2种不同的建模方法,探索建立成模率高且重复性好的大鼠动脉粥样硬化模型的最佳方案。方法：将30只健康雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、A组和B组。空白对照组使用基础饲料喂养。A组：维生素D�3腹腔注射+高脂饲料(含丙基硫氧嘧啶)进食。B组：维生素D�3腹腔注射+高脂饲料(不含丙基硫氧嘧啶)+丙基硫氧嘧啶灌胃。建模时间90 d,处死大鼠后检测血脂水平,动脉内膜行油红O染色及制作石蜡切片、HE染色形态学观察。结果：空白对照组、B组动物均无死亡,A组死亡4只。B组动物血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)水平明显高于A组(均P 1.3.3 动物饲养 空白对照组使用基础饲料喂养；A组：给予动物一次性腹腔注射维生素D�3 6×105 U•kg-1,腹腔注射前禁食禁水8 h,随后给予高脂饲料A喂养；B组：给予动物一次性腹腔注射维生素D�3 6×105 U•kg-1,腹腔注射前禁食禁水8 h,丙基硫氧嘧啶按每日每只大鼠进食量的0.2%灌胃给药,高脂饲料B喂养。整个实验周期90 d。
1.4 血液和动脉标本的采集
实验第90天,各组动物禁食过夜,戊巴比妥钠30 mg•kg-1腹腔麻醉后,分离右侧股动脉,离断该处动脉取血。待血液凝固后以3 000 r•min-1离心15 min,分离出血清,取1 ml用于血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)的检测。分离主动脉至髂总动脉分叉处,取主动脉弓、胸主动脉全段及腹主动脉段，立即用10%中性福尔马林钙溶液(10%中性福尔马林溶液100 ml加氯化钙1 g)固定,用于常规形态学检查。
1.5 血脂的检测
用全自动生化分析仪(BECKMAN COULTER SYNCHRON clinical system LX20)检测血脂,在东南大学附属中大医院检验科完成。
1.6 动脉壁整体标本油红O染色
(1) 将固定好的整体大动脉标本取出,充分水洗4 h后剪开,剥去动脉壁的外膜；(2) 将标本入60%异丙醇溶液中浸10 min；(3) 入油红O染液中浸染,室温3～4 h；(4) 入60%异丙醇或70%乙醇中分化,更换6～7次分化液,直到动脉粥样硬化斑块成红色,而动脉壁则呈白色为止；(5) 自来水冲洗终止分化。肉眼观察并摄片。
1.7 HE染色
将用10%中性福尔马林溶液固定的主动脉石蜡包埋,连续切片,切片固定于载玻片上,HE染色,光镜观察。
1.8 统计学处理
实验数据以±s表示。使用SPSS 13.0统计软件分析数据。多组间的均数两两比较采用One-way ANOVA,样本率的比较采用Exact Probability Method,显著性水平设定为P=0.05。
2 结 果
2.1 一般状况
实验过程中共有4只大鼠死亡,其中A组于建模后期死亡4只,死亡率为40%,死亡动物予以解剖,未见动脉粥样硬化改变出现。B组、空白对照组均无死亡。实验发现,空白对照组大鼠的体质量随饲养的时间延长而逐渐增加,A组和B组大鼠的体质量在最初20 d增长,中间40 d进入平台期,后30 d有明显下降,但A、B组间体质量差异无统计学意义(表1)。
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