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[摘要]目的：通过分析影响酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝病毒血清抗-HBe与抗-HBc出现假阳性的因素，旨在找出一些克服办法。方法：对采用酶联免疫吸附试验(ELISA)2次检测出的78例抗-HBc阳性和72例抗-HBe阳性的血清标本，用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)试剂进行复检，ELISA方法初检呈阳性反应而TRFIA复检为阴性者判为假阳性。结果：ELISA法检测出的78例抗-HBc阳性和72例抗-HBe阳性的血清标本，用TRFIA方法复检出-抗HBc阳性71例，抗-HBe阳性63例，以TRFIA方法为准，ELISA法检测乙肝病毒抗-HBc和抗-HBe假阳性率分别为8.97％和12.50％。结论：有多种影响因素可影响酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝病毒抗-HBc、抗-HBe出现假阳性，除了消除其影响因素外，对怀疑假阳性的标本，还应进一步采用更敏感的方法如时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)和化学发光等方法重新检测。
[关键词]酶联免疫吸附试验(ELISA)；时间分辨荧光免疫分析(TR，FIA)；抗-HBe；抗-HBc；假阳性
[中图分类号]R446.6 [文献标识码]C [文章编号]1674-4721(2010)12(c)-082-02
酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎五项指标从-20世纪80年代末开始在国内推广，因具有方法简便、准确率高而得以在国内临床实验室广泛应用，但是该方法也存在一些问题，特别是抗HBe、抗-HBc结果国内多有报道易出现假阳性，为分析ELISA法抗-HBe、抗-HBc出现假阳性的因素，以及找出一些克服办法，笔者用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)做了对比分析，现将两组方法检测结果以及评价分析报道如下，以供同行们参考。
1 资料与方法
1.1 标本来源
ELISA法检测出的抗-HBc阳性78例和抗-HBe阳性72例均来自本院2010年1-7月780例门诊和住院患者检测乙肝五项的血清标本。
1.2 试剂和仪器
ELISA法试剂盒为上海科华生物技术有限公司产品，仪器采用瑞士帝肯RMP-150全自动酶免仪，抗-HBc、抗-HBe以抑制率>50％判阳性。时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)采用上海新波时间分辨荧光免疫技术提供的仪器及配套试剂，抗HBc、抗-HBe以样本荧光速率值与临界荧光速率值之比(S／N)≤1.0判阳性。
1.3 方法
抽取患者早晨空腹静脉血3-5ml人促凝分离胶密封试管内，37℃放置待凝固后，离心分离血清1-2h内开始检测。检测前严格按照上海科华试剂盒使用说明书将试剂盒在室温下平衡30min，对血清标本同时检测乙肝五项指标，将检-测出的抗Hbe、抗-HBc阳性的标本，再次用上海科华试剂盒复检，最后将2次检测均为阳性的血清标本，用上海新波提供的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)配套仪器及试剂进行复查，TRFIA法严格按说明书操作，质控曲线良好。
2 结果
780例患者的血清标本，首次用ELISA法试剂盒检测出抗HBc阳性81例和抗-HBe阳性74例，第二次用ELISA法试剂盒检测出抗-HBc阳性78例和抗-HBe阳性72例，抗一HBc和抗-HBe阳性符合率分别为96.30％(78／81)和97.30％(72／74)；用ELISA法2次检测均为阳性的抗-HBc 78例和抗HBe 72例血清标本。用TRFIA方法复检出抗-HBc阳性71例，抗HBe阳性63例，以TRFIA方法为准，ELISA法检测乙肝病毒抗HBc和抗-HBe假阳性率分别为8.97％(7／78)和12.50％(9／72)。
3 讨论
酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝病毒五项指标试剂盒经过国内20多年的临床应用，加上生产厂家的不断改进，目前临床实验室使用的试剂盒多为一步法，操作比最早使用的试剂盒要简单、方便得多，但也存在一些影响ELISA检测-结果的因素，比如标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长、标本凝固不全、试剂盒的抗原和酶结合物纯度低等都可导致假阳性结果翻，特别是抗HBe、抗-HBc采用竞争法，检测结果以不显色为阳性(其他三项相反)，更易出现假阳性。对于ELISA法检测抗-HBe、抗-HBc出现假阳性的解决途-径，本文参考了一些文献加上笔者的工作经验，认为除了要检查仪器性能及试剂盒本身质量问题外(有研究者建议采用不同厂家试剂盒复检，我们以前也用不同厂家试剂盒复检，但上海科华试剂盒较为稳定，本文2次检测抗HBc和抗一HBe阳性符合率分别为96.30％和97.30％，加上本文研究与TRFIA方法做比较的需要，采用了一种试剂盒复检)，还要-重视标本的处理，建议尽量采用促凝分离胶密封试管，防止纤维蛋白原的干扰，对于重度脂血、溶血标本建议重新抽血，另外在操作中尽量使血清和酶结合物同步加入，因为随着样品与加入酶结合物间隔时间的延长，假阳性率会逐渐增加，温育时反应孔要贴封片或加盖，避免标本或稀释液蒸发吸附于孔壁，影响洗涤效果；温育时间不要人为延长，一步法若加入血清放置时间过长，再加酶标抗体也会产生抗HBe假阳性，无论手工还是仪器洗板，都要高度重视洗板工作，检查洗液是否按照要求配置、洗液量是否充足，洗液针是否通畅等，尽最大限度地减少因洗板不彻底等影响因素，引起抗一HBe与抗-HBc出现假阳性。
时间分辨荧光免疫分析法(Time-Resolved Fluorescence，TRFIA)是继放免、酶标、化学发光、电化学发光后成为一种更新、更灵敏的检测方法，主要取决于它所用标志物(稀土离子)的独一无二的物理性质及化学性质：标志物体积很小(为原子标记)，标记后不会影响被标志物的空间立体结构。保证了被检测物质的稳定性(尤其对蛋白质影响更小)，因此具备了高稳定性、干扰因素少等优点，而ELISA法检测抗-HBe、抗HBc出现假阳性除了上文所述的影响因素外，跟其本身没有时间分辨荧光免疫分析法敏感和高稳定性也有一定的关系f7]。本文以TRFIA方法为准，复查出ELISA法检测乙肝病毒抗-HBc和抗-HBe假阳性率分别为8.97％和12.50％，也支持这一观点。
总之，有多种影响因素可影响酶联免疫吸附试验(EHSA)-检测乙肝病毒抗HBc、抗-HBe出现假阳性，除了消除其影响因素外，对怀疑假阳性的标本，还应进一步采用更敏感的方法如时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)和化学发光等方法重新检测。
