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摘 要：目的：建立高效液相色谱法测定新止咳合剂中儿茶素含量的方法。方法：采用Dikma钻石C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙睛－0.2％磷酸溶液(8：92)；检测波长为280nm，流速为1.0ml／min，柱温为35℃。结果：儿茶素进样量在0.0425～4.25μg(r=0.99999)范围内与峰面积线性关系良好，平均加样回收率为99.05％，RSD=0.72％(n=9)。结论：本法简便、快速、专属性强、重现性好；可作为新止咳合剂的质量控制方法。
关键词：儿茶素；高效液相色谱法；新止咳合剂；含量测定
中图分类号：R927．2 文献标识码：A
文章编号：1007－2349(2007)10－0037－02
新止咳合剂由桔梗、陈皮、儿茶、甘草、法半夏等药制成，具有止咳、祛痰的功效。为本院的医疗机构制剂。质量标准中没有规定含量测定方法。本文参考《中国药典》2005年版，采用HPLC法测定儿茶的主要成分――儿茶素的含量，作为质量控制指标，获得满意的结果。
1 仪器与药品
高效液相色谱仪(美国Agilem 1100系列仪)，包括自动进样装置、VWD可变紫外检测器、柱温箱等；METTLER AE240型电子分析天平。儿茶素对照品(批号为877－200001，供含量测定用，中国药品生物制品检定所)；新止咳合剂由本院制剂室配制(批号20070206、20070403、20070428)。除高效液相色谱检测所用试剂为色谱纯外，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 色谱条件 色谱柱：Dikma钻石C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙睛－0.2％磷酸(8：92)；流速：1.0ml／min；柱温：35℃；检测波长：280nm；进样量：5μl。理论塔板数按儿茶素峰计算为7000。
2．2 溶液的制备 精密称取儿茶素对照品(置五氧化二磷为干燥剂的干燥器中，减压干燥36h)17.0mg，置20ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含儿茶素0.85mg的溶液(贮备液)，分别精密吸取溶液(贮备液)①0.1ml、②0.5ml、③1ml、④3ml、⑤5ml、⑥10ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别得每1ml含①8.5μg、②42.5μg、③85μg、④255μg、⑤425μg、⑥850μg的对照品溶液。
取新止咳合剂5ml，用乙酸乙酯提取5次，每次10ml，合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至20ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2．3 方法学考察
2．3．1 标准曲线和线性范围 精密吸取儿茶素对照品溶液①、②、③、④、⑤、⑥各5μl，分别注入高效液相色谱仪测定。以儿茶素对照品含量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，直线几乎通过原点，所以采用外标一点法进行含量测定。线性回归方程为Y=735.4X＋1.32，r=0.99999，线性范围为0.0425～4.25μg。
2．3．2 精密度试验 取同一儿茶素对照品溶液③5μl，注入液相色谱仪，连续测定6次，结果峰面积积分值分别为：319.2357，318.7571，319.1373，318.9312，319.1522，318.7950；积分值平均为：319.0，RSD=0.1％。结果表明仪器精密度较好。
2．3．3 稳定性试验 取同一对照品溶液③和同一供试品溶液(批号为20070428)各5μl，分别于0，2，5，10，15，20，25h注入液相色谱仪测定，结果峰面积积分值的RSD=1.1％，表明在25h内对照品和供试品的峰面积积分值稳定，说明测定溶液配制好后，放置25h内测定均可。
2．3．4 重复性试验 取同一批号的新止咳合剂(批号：20070428)，按供试品溶液的制备方法重复操作测定6次，结果平均含量为485μg／ml，RSD=1.02％。
2．3．5 回收率试验 采用加样回收法，取已知含量的同一批号(20070428)新止咳合剂(含量为：485μg／m1)适量，分别精密加入儿茶素对照品适量，按供试品溶液的制备及测定法操作。结果见表1。
2．3．6 阴性干扰试验 照上述条件测定新止咳合剂空白(不含儿茶药材制成的阴性合剂)制剂，结果在儿茶素色谱峰相对应的保留时间处无吸收峰，说明处方中其它药味对儿茶中的儿茶素测定无干扰。见图1。
2．4 样品含量测定 按供试品溶液的制备及测定法操作，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪测定，外标一点法计算。结果见表2。
3 讨论
儿茶素是儿茶中主要的活性成分之一，也是新止咳合剂治疗疾病的重要成分，故选择该物质作为考察指标。
测定时曾选用了《中国药典》2005年版一部“儿茶”项下【含量测定】规定的流动相：0.04mol／L枸橼酸溶液－N，N－二甲基甲酰胺一四氢呋喃(45：8：2)，但由于是复方制剂，儿茶素在约10就出峰，色谱分离不好。试验中还发现，进样量不能过大，最好在5～10μl之间，否则儿茶素峰容易出现拖尾或分叉现象。
本法简便、快速、专属性强、重现性好，可作为新止咳合剂的质量控制方法。
