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【摘要】 目的 研究尿激酶型纤溶酶原激活系统uPA,uPAR,PAI-1蛋白及血管内皮生长因子(VEGF)在直肠癌组织中的表达及其与直肠癌癌生物学行为的关系。方法 2005年1月至2006年1月，采用免疫组化S-P法检测67例直肠癌及癌旁组织中uPA,uPAR,PAI-1及VEGF蛋白表达情况，同时对临床病理学资料进行回顾性分析。结果 癌和癌周比较uPA,uPAR,PAI-1及VEGF蛋白阳性表达率明显升高(P
尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator，uPA)是一种蛋白水解酶，其介导的纤维蛋白降解作用能破坏细胞外基质和基底膜，在肿瘤浸润转移中起重要作用［1-2］。肿瘤诱导的血管生成反应亦与其生物学行为密切相关，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)被认为是作用最强、特异性最高的血管生成调控因子［3］。笔者采用免疫组织化学方法检测67例直肠癌组织中uPA,uPAR,PAI-1及VEGF的表达，探讨其与直肠癌生物学行为的关系。现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 本院2005年1月至2008年1月直肠癌手术切除标本67例，术前未接受过抗肿瘤治疗。男54例,女13例,年龄34~78岁。所有病例均经病理诊断证实。其中溃疡型37例(55.2%),肿块型5例(7.5%),浸润型25例(37.3%)；腺瘤癌变4例(5.9%)，高分化腺癌20例(29.9%),中分化腺癌26例(38.8%)，粘液腺癌14例(20.9%)，印戒细胞癌3例(4.5%)。Dukes A期3例(4.5%)，B期55例(82.1%)，C期8例(11.9%)，D期1例(1.5%)。以癌旁组织为对照。所有标本组织经40 g/L多聚甲醛固定，常规石蜡包埋。4 μm厚连续切片。
1.2 方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P)方法。兔抗人uPA蛋白多克隆抗体(BA0405)、兔抗人uPAR蛋白多克隆抗体(BA1368)、兔抗人PAI-1蛋白多克隆抗体(BA1334)均购自军事医学科学院，工作浓度分别为1∶50，1∶100，1∶100。VEGF多克隆抗体、免疫组化S-P试剂盒均购自福州迈新生物技术公司，VEGF工作浓度为1∶50。每批染色均用已知阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照.染色结果判断分别按阳性细胞百分数及染色强度计分。阳性细胞数为0，计0分；1%~25%计1分；26%~50%计2分；>50%计3分。染色阴性计0分；淡黄色计1分；棕黄色计2分；棕褐色计3分。两种积分相加，积分为0~2分，表示阴性(-)；积分为3~4分，表示阳性(+)；积分为5~6分，表示阳性(++)。+、++均视为阳性表达。
2 结果
2.1 uPA，uPAR，PAI-1蛋白的表达 uPA，uPAR蛋白的阳性产物主要位于直肠癌细胞的胞质中，强度深浅不一。肿瘤内少量成纤维细胞、血管内皮细胞可见较弱的阳性表达。PAI-1蛋白的阳性产物也主要定位于直肠癌细胞的胞质中，但与分化程度有关：在分化高的直肠癌组织，肿瘤细胞呈弥漫性胞质着色；随着分化程度降低，染色有加深趋势，部分胞质中出现棕褐色颗粒。上述三种蛋白在癌旁组织都有不同程度的阳性表达。正常直肠黏膜上皮多呈阴性表达。VEGF蛋白阳性信号主要定位于癌细胞胞质，其表达呈明显异质性，在低分化癌和印戒细胞癌中的表达多呈强阳性，一些血管内皮细胞也可见弱的VEGF表达。在癌旁组织中，大部分腺上皮呈阴性表达。直肠癌组织中uPA，uPAR，PAI-1，VEGF蛋白的阳性表达率分别为68.7%，68.7%，70.1%和76.2%，明显高于他们在癌旁组织中的阳性表达，分别为28.4%，31.3%，40.3%和20.9%，差异具有显著性意义(P VEGF是一类作用最强、特异性最高的可溶性血管生成促进因子，他与内皮细胞上的两个特殊受体flt和flk(kDk)结合，刺激内皮细胞增生，在肿瘤血管发生中起着重要作用。在肿瘤血管的生成过程中，肿瘤也完成了扩展、侵袭和转移，故VEGF与肿瘤的生长、侵袭和转移等特性密切相关［10-11］。本结果表明，VEGF蛋白主要表达于直肠癌细胞的胞质中，一些血管内皮细胞也可见弱表达。VEGF在直肠癌组织中的阳性表达(76.1%)明显高于癌旁组织(20.9%)(P
