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作者／张春和 林咏梅 陆 瑛 陈天波 秦国政 李焱风 摘要：目的：观察前列冲剂重复给药对试验动物所产生的不良反应。方法：用雄性SPF级SD大鼠80只连续灌胃给予前列冲剂6周，停药恢复2周的长期毒性试验，动物随机分为溶媒对照组和前列冲剂3.0、6．0、9.0g／kg体重3个剂量组，相当于临床成人拟用药量的20、40、60倍。于末次给药后24h处死约1／2动物进行血液学指标检查，血清生化指标检查，病理组织学检查。余下动物停药观察2周，检查指标同给药末期。结果：溶媒对照组和3个剂量给药组动物，体重增长，摄食量正常，未见明显毒性反应；血液学仅见停药期MPV组间比较有显著性差异(P＜0.05)，血清生化学所测指标停药期ALP、TP、ALB组间比较有显著性差异(P＜0.05／0.01)，但均在本研究历史背景资料范围；脏器、器官组织病理学检查未观察到与受试药物相关的病理组织学改变。结论：前列冲剂在本试验剂量范围条件下对SD大鼠未引起明显毒性反应，即3.0g／kg体重，相当于临床成人拟用药量的20倍以下为安全剂量参考范围。
关键词：前列冲剂；长期毒性；动物试验
中图分类号：R285．5 文献标识码：A
文章编号：1007－2349(2007)03－0038－02基金项目：国家高技术研究发展计划(863计划)创新药物与中药现代化重大专项博士基金项目(编号：2003AA223505)
作者简介：张春和(1968～)，男，四川南江县人，副主任医师，医学博士，主要从事泌尿外科、男科研究。
前列冲剂为临床使用多年的经验处方，经现代中药制备工艺提取精制而成，主要用于治疗良性前列腺增生症属肾虚血瘀膀胱气化功能失司者。为了对该药作出客观的安全性评价，笔者进行了前列冲剂大鼠灌胃给药长期毒性试验。
1 材料与方法
1．1药物与动物前列冲剂(由云南中医学院附属医院制剂中心提供，科研用药无批号)临用前用高压灭菌水配成0.3g，0.6g，0.45g／ml的混悬液。5～6周龄健康未交配SPF级雄性SD大鼠80只，体重140～180g(由昆明医学院实验动物中心提供)。
1．2主要仪器及配套试剂 ADVIA 60型全自动血球分析仪及配套试剂(测Hb、RBC、WBC、PLT、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW、MPV)；TMS－1024全自动生化分析仪及配套试剂(测G1u、AST、ALT、ALP、Crea、BUN、TP、ALB、T－CHO、T－Bil)；OLYMPUS BH－2显微镜；普通光学显微镜。
1．3方法
1．3．1剂量设计及分组根据临床成人(以60kg体重计)拟用药量0.15g／kg／d；ICR小鼠急性毒性试验的最大耐受量大于53.2g／40ml／kg。按《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》的要求，设一个溶媒对照组和3个剂量组。80只大鼠随机分为4组，每组20只。溶媒对照组：高压灭菌水。低剂量组：3g／kg为临床成人拟用量的20倍。中剂量组：6g／kg为临床成人拟用量的40倍。高剂量组：9g／kg为临床成人拟用量的60倍。
1．3．2给药方法对照组、低、中、高剂量组均为10ml／kg体重等容量灌胃，高剂量组因给药容量大故每天灌胃2次。
1．3．3实验周期2005年11月11日～2006年1月11日，每周灌胃给药7d，连续6周，停药恢复2周。
1．4观察指标[1] 每天观察试验动物进食、饮水、活动等一般情况，异常反应或中毒症状，动物死亡数，中途死亡动物及时解剖进行肉眼观察和病理组织学检查，以便了解死亡原因。每周称量动物体重及进食量一次，根据体重变化调整给药容量。于末次给药后24h各组随机抽取约1／2动物采血进行血液学、血清生化检查，解剖，进行病理组织学检查，剩余动物停药2周恢复观察，检查指标同给药末期。
1．4．1血液学检测指标血红蛋白(Hb)测定、红细胞(RBC)计数、白细胞(WEC)计数及分类(％)、血小板(PLT)计数、网织红细胞(％)红细胞比容(HCT)、平均红细胞容积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞体积分布宽度(RDW)、平均血小板体积(MPV)测定。白细胞分类和网织红细胞采用手工推血片，显微镜计数。
1．4．2血清生化学检测指标血糖(Glu)、血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、肌酐(Crea)采用酶法。尿素氮(BUN)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、总胆固醇(T－CHO)、总胆红素(T－Bil)采用终点比色法。白／球比值(A／G)直接计算法。
1．4．3病理组织学检查指标解剖动物肉眼观察各脏器有无病变，取脑、心、肝、脾、肺、肾、前列腺、胸腺、睾丸、附睾称重，计算脏器指数。并取胃、肠(十二指肠、空肠、回肠、结肠)、胰腺、膀胱及肠系膜淋巴结于10％福尔马林液固定，进行对照组和高剂量组动物病理切片，光镜检查各个脏器，如发现异常再对低剂量组及中剂量组进行组织切片观察。
1．5统计学处理 用SPSS 11.0统计软件对试验数据进行方差检验或秩和检验，病理组织学检查用X2检验进行统计学分析处理。
2 结果
2．1一般状况 给药期和恢复期对照、低、中、高剂量组动物，状态良好，活动自如，毛皮光泽，均未出现明显毒性反应。
2．2死亡情况给药6周及恢复2周，各组试验动物均未出现死亡。
2．3体重及进食量给药期及恢复期，动物体重均增长，进食正常，给药组与对照组比较无显著性差异(P＞0.05)。
2．4血液学检查给药末期MPV中剂量组略高于其余各组，有显著性差异(P＜0.05)，但所测数值在文献参考值和本实验室历史背景资料范围，且无明显剂量一反应关系，故认为此差异无明显的生物学和毒理学意义；恢复期给药组及对照组，血液学各项检查指标各组间比较无显著性差异(P＞0.05)。
2．5血清生化检查给药末期仅见ALP、TP、ALB低剂量组均低于其余各组，有显著性差异(P＜0.05)，但无明显剂量一反应关系，所测数值均在文献参考值和本实验室历史背景资料范围，无生物学意义；恢复期各项检查指标未见明显异常，各组间比较无显著性差异(P＞0.05)。
2．6脏器重量及指数给药末期胸腺重量中、高剂量组之间有显著性差异(P＜0.01)，但胸腺指数无显著性差异(P＞0.05)，病理组织学检查结果未见异常，故不能认为有毒理学意义，肝肾指数中、高剂量组与对照组比较均有显著性差异(P＜0.05)，但绝对重量并无显著性差异(P＞0.05)；恢复期肝指数低剂量组高于其余各组，有显著性差异(P＜0.05)，结合分析血清生化肝功能指标检查及病理组织学检查，结果均未见异常，且所测数值均在文献参考值和本实验室历史背景资料范围，故认为无毒理学意义。
2．7病理组织学检查结果给药末期和恢复期解剖动物，对照、低、中、高剂量组动物主要脏器、器官色泽正常，光滑，未见充血、粘连等异常改变。镜下可见对照和高剂量组均有少量动物出现局灶性肺出血；心肌间质瘀血；肝细胞点状坏死，肝肉芽肿；肾间质瘀血；前列腺间质炎性细胞浸润。经统计学分析，对照组与给药组病变程度无显著性差异(P＞0.05)，观察到的组织学异常改变为大鼠常见自发性病变，非受试药物所致，其余脏器、器官未见异常。
3 讨论
前列冲剂临床成人拟用药量为每日9g，小鼠急性毒性实验未测出LD50，最大耐受量为临床拟用量的355倍以上[2]。灌胃给予SD大鼠前列冲剂3.0、6．0、9.0g／kg体重(相当于临床成人拟用量的20、40、60倍)，连续6周，停药恢复2周长期毒性试验，在本试验剂量范围，未观察到试验动物明显的毒性反应，试验动物血液学及血清生化学检查指标均在文献参考值和本室历史背景资料范围，试验动物脏器、器官病理组织学检查未见与药物相关的病理组织学改变。前列冲剂灌胃给药3.0g／kg体重(相当于临床成人拟用药量的20倍)以下可为安全剂量参考范围。
参考文献：
[1]谢秀琼．中药新制剂开发与应用[M]．北京：人民卫生出版社，2000．527～542．
[2]张春和，林咏梅，陈天波，等．前列冲剂小鼠灌胃给药急性毒性实验研究[1]．中华实用医学，2006，8(6)：1～2．
(收稿日期：2007－01－27。)
