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【摘要】 目的 观察自体细胞因子诱导杀伤细胞(CIK细胞) 治疗HBV DNA 阳性肝硬化患者的近期疗效。方法 CIK细胞在体外培养前后以及回输体内后检测CD+3、CD+3CD+4、CD+3 CD+8、CD+3 、CD+56、CD+25细胞以及mDC 和pDC。治疗肝硬化患者,比较治疗前后病毒学指标及肝脏功能的变化。结果 培养结束以及回输体内后, CD+3细胞、CD+3 CD+8细胞、CD+3 CD+8细胞较培养前显著升高,mDC 和pDC 在回输后也明显增高,肝脏功能较治疗前有所好转。所有患者均能耐受治疗。结论 CIK细胞可明显提高免疫效应细胞数量,具有一定的抗病毒效应作用,毒副作用低。
【关键词】 CIK细胞;乙型肝炎;肝硬化;疗效�
【Abstract】 Objective To observe the autologous cytokine-induced killer cells (CIK cells) in the treatment of chronic HBV DNA-positive patients with cirrhosis of the liver function. MethodsBefore and after CIK cells in vitro and in vivo detection of transfusion CD+3, CD+3 CD+4, CD+3 CD+8, CD+3, CD+56 cells and mDC, and pDC. Treatment of patients with liver cirrhosis compared before and after treatment virological indicators and liver function changes.Results After culture and reinfusion in vivo, CD+3 cells, CD+3 CD+8 cells, CD+3, CD+56 cells, cultured cells were significantly elevated, mDC and pDC significantly increased after transfusion, liver function had improved compared with before treatment . All patients could tolerate the treatment. Conclusions CIK cells can significantly increase the number of immune effector cells, with a certain anti-viral effect of the role of low toxicity. There are no aggravating liver damage, liver function and for a certain degree of improvement.
【Key words】 CIK cells;Hepatitis B;Hepatocirrhosis
在HBV 持续复制的肝硬化患者中,肝脏炎性纤维化持续进展并且坏死特别严重。由于a-干扰素的不良反应和拉米夫定的高耐药病毒突变,对这类患者还没有很有效的、可耐受的抗病毒治疗。CIK细胞作为高免疫活性细胞已越来越广泛地用于HBV 感染所致原发性肝癌和抗HBV 治疗,其治疗时可诱导激活特异性细胞免疫反应。用于治疗慢性乙型肝炎报道也有一定疗效[1],本治疗血清HBV DNA 阳性肝硬化的近期临床疗效较好,特报道如下。
1 研究对象
1.1 一般资料 66例患者均为住院患者,其中男59 例,女7 例,年龄36～67 岁(47.2岁)。所有病例均诊断为肝硬化,诊断符合2000 年西安学术会议制定的病毒性肝炎防治方案诊断标准[2],全部病例HBsAg、HBcAg、HBV DNA 阳性持续6 个月以上,HBeAg 阳性42例,阴性24例,其中肝功能正常的5例,肝功能异常的61例。ALT 波动于正常至5倍,TBiL ≤51μmol/L,肝脏功能childpugh 评分为A或B级。
1.2 排除病例 肝性脑病、消化道出血、重度感染或大量腹水等严重并发症,半年内未使用过其他抗病毒药和其他免疫调节剂,其他病毒感染、酒精性、药物性肝病。
2 治疗方法与检测项目
2.1 CIK 细胞的培养 在患者签署知情同意书后,使用采血机(Spectra v 611) 采集患者外周血单个核细胞,每例患者采集细胞数约(1～4) ×109,容积40～70 ml 。在符合GMP 实验室条件下,用无血清培养基调整细胞浓度至(1～2) ×106 ml,置于透气性培养袋中,于不同时间加入一定剂量的rhIFNr,IL-2、antiCD3 mAb (美国BD公司) 等各种细胞因子,37℃,5%CO2悬浮培养。
2.2 CIK细胞悬液的制备及回输,每次取CIK细胞悬液的1/3体积,离心、洗涤和重悬浮后制备成容积为400～500 ml的CIK细胞悬液,将诱导培养成的CIK细胞分3次于培养的第10、13、15天回输给患者。
2.3 中医辨证 活血破积,攻坚祛瘀,益肝保肝。药用:黄芪、党参、薏仁、淮山药、穿山甲、龟板、丹参、板蓝根、茵陈、丹皮、栀子、鸡内金、三七、煅瓦楞等。临症加减。
2.4 检测项目
2.4.1 CIK细胞体外培养前后以及回输体内后细胞表型的检测:在体外培养前后以及回输体内2周左右采集肝素抗凝血5 ml,Ficoll梯度离心法分离淋巴细胞,流式细胞仪(美国BD公司)检测CD+3、CD+3CD+4、CD+3、CD+8、CD+3、CD+56、CD+25细胞,同时在CIK治疗前后检测血液mDC和pDC。
2.4.2 治疗前后病毒学标志及肝脏功能的检测 全部病例在治疗前以及治疗后3个月采用ELISA法(试剂盒购自深圳达安公司)检测HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc,荧光定量PCR检测HBV DNA滴度,同时检测肝脏功能。
2.5 不良反应 在治疗过程中常规检测血常规、肾脏功能、B超及心电图等,并观测患者不良反应。
2.6 疗效判定 有效:治疗后HBV DNA转阴;显效:HBV DNA滴度下降大于2个log级;无效:HBV DNA无变化或HBV DNA下降不超过2个log级。
2.7 统计学方法 两组数据比较采用配对t检验。
3 结果
3.1 培养前后以及回输体内后CIK细胞表型变化特点在培养过程中及回输体内后使用流式细胞仪对CD+3、CD+3CD+4、CD+3 CD+8、CD+3 、CD+56、CD+25细胞进行了测定和分析。各类细胞表型的比例随培养时间变化而改变。在培养结束以及回输体内后, CD+3细胞、CD+3 CD+8细胞、CD+3 、CD+56细胞比例均较培养前显著升高( P 3.2 CIK细胞治疗前后DC亚群的变化 分析了DC亚群在CIK细胞治疗前后的变化。治疗后mDC 和pDC 均较治疗前有明显增高(0.54 ±0.18 vs0.70 ±0.29; 0.26 ±0.13 vs 0.41 ±0.25),与治疗前相比,a P
