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[摘要]目的:建立高效液相色谱法测定前列舒乐丸中淫羊藿苷含量。方法:色谱柱为DiamonsllC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-水(29:71),流速:1.0ml/min,检测波长:270nm。结果:淫羊藿苷进样量在0.2504～2.0032μg范围内与峰面积线性关系良好,r=0.9997,平均加样回收率为99.1%,RSD=0.5%。结论:该方法灵敏、简便,重现性好,结果准确,适用于前列舒乐丸的质量控制。
[关键词]高效液相色谱法;淫羊藿苷;前列舒乐丸;含量测定
[中图分类号]R927.2
[文献标识码]B
[文章编号]1006-1959(2009)11-0231-01
前列舒乐颗粒上市以来,深受广大消费者的欢迎。但是随着现代社会生活节奏的加快,糖尿病、肥胖症患者呈上升趋势。以蔗糖为辅料的前列舒乐颗粒无法满足患有糖尿病、肥胖症的前列腺病患者的需要。这在某种程度上局限了它的使用。为了给中老年人、糖尿病、肥胖症患者带来更多的选择,在原处方的基础上,将其制成浓缩水丸剂,以满足人们看病求医的需要。在新的质量标准草案中增加含量测定项,使质量标准趋于完善,制剂可控性和有效性得以保证。
本标准参照相关文献,建立高效液相色谱法测定前列舒乐丸中淫羊藿苷含量的方法,具有分离效果好、灵敏、准确等优点。
1 仪器与试药
LC-10ATVP液相色谱仪,N-2000双通道色谱工作站,SPD-10AVP紫外-可见光检测器。淫羊藿苷对照品(批号110737-200414,中国药品生物制品检定所);前列舒乐丸(批号为080101、080102、080401,本厂生产),乙腈、甲醇均为色谱纯;其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验:色谱柱:DiamonsllC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-水(29:71);流速:1.0ml/min;检测波长:270nm。理论塔板数按淫羊藿苷峰计应不低于2000。
2.2 测定波长选择:取淫羊藿苷对照品,用甲醇制成50μg/ml的溶液,在200～400nm波长范围内扫描,结果270nm波长处有最大吸收,所以将测定波长定为270nm。
2.3 溶液制备:取本品5g,研细,取0.3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,称定重量,超声处理1h,放凉,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,滤过,精密量取25ml,蒸干,加水25ml溶解,加入30ml乙醚提取,弃乙醚液,水液再用醋酸乙酯提取5次,每次20ml,合并醋酸乙酯液,蒸干,用适量甲醇溶解,至25ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得供试品溶液。按处方比例及工艺制备方法操作,即得阴性对照品溶液。
2.4 方法学考察:空白干扰试验:精密吸取对照品溶液、供试品溶液及空白样品溶液各10μl,注入液相色谱仪,按2.1项下色谱条件测定。结果在被测成分淫羊藿苷的保留时间处,空白样品溶液无干扰。线性关系考察:精密称取淫羊藿苷对照品12.52mg,置10ml容量瓶中、加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,再精密吸取上述溶液0.25、0.5、1.0、1.5、2.0ml,置25ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,依次进样20μl,按上述色谱条件测定峰面积,并以峰面积为纵坐标,对照品进样量为横坐标建立标准曲线,计算回归方程,回归方程为:Y=27500X+244(r=0.9997),淫羊藿苷在0.2504～2.0032μg范围内线性关系良好。精密度试验:取线性考察试验项下浓度为0.5008μg的对照品溶液,连续6次等量注入同台液相色谱仪中进行测定,计算RSD值为0.27%,结果表明本方法精密度良好。稳定性试验:取按正文〔含量测定〕项制备供试品溶液,室温、密闭放置,于0、2、4、8、12、24h,分别进样10μl测定吸收峰面积,计算RSD值为1.26%,表明样品供试液在24h内稳定性良好。重现性试验:分别称取同一批号前列舒乐丸6份,按含量测定项下方法,并计算样品的RSD值为1.98%。结果表明,在同一条件下,6次测得样品淫羊藿苷含量一致,本方法重现性良好。加样回收试验:对照品溶液配制取淫羊藿苷对照品适量,加甲醇使溶解,制成浓度为50μg/ml对照品溶液。供试品溶液配制分别精密称取已知含量(1.997mg/g)的样品6份,每份约0.15g,分别精密加入已知含量(0.3012mg/ml)的淫羊藿苷对照品溶液1ml,按含量测定项下供试品溶液制备方法,制备供试品溶液,测定含量,并计算回收率。结果见表1。
结果表明,本检测方法具有较好的回收率。
2.5样品含量限度确定:按本品含量测定项下的操作方法,测定五批样品,结果见表2。
3 讨论
3.1 结果表明,5批样品的含量均大于1.9mg/g。同时考虑将来生产产品在有效期内的稳定性,因此暂定前列舒乐丸中淫羊藿苷的含量不低于1.5mg/g。
3.2 本方法灵敏、简便,重现性好,结果准确,适用于该制剂的质量控制。
