【www.zhangdahai.com--庆典致辞】
【摘要】目的:对痔炎消胶囊进行分析研究,测定痔炎消胶囊中绿原酸的含量,为该制剂的质量制定提供方法和依据。方法:采用高效液相色谱法测定。色谱柱为Hypersil ODS C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇―0.5%醋酸(70�30),检测波长325nm,流速为1.0ml/min。结果:绿原酸在0.0516～0.4128μg范围内,进样量与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998),平均回收率为99.5%,RSD为1.27%(n=6)。结论:该方法简便快捷,重复性好,可作为痔炎消胶囊中绿原酸的含量测定方法。
【关键词】绿原酸;痔炎消胶囊;高效液相色谱法
痔炎消胶囊由火麻仁、槐花、金银花、地榆、白芍、三七、茅根、茵陈、枳壳等多味中药组成,具有清热解毒,润肠通便的功效,临床上用于痔疮肿痛、肛裂疼痛、痔疮手术后大便困难、便血及老年人便秘的治疗[1]。本实验参考文献[2,3]的方法,以高效液相色谱法测定痔炎消胶囊中绿原酸的含量,拟建立简便快捷,专属性和重复性均较好的含量测定方法,获得满意效果,适用于该制剂的质量控制。
1仪器和试药
日本岛津LC-10ATvp型高效液相色谱仪; SPD-20Avp型紫外检测器;KQ-100DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);绿原酸对照品(中国药品生物检定所,批号:0090-9801);痔炎消胶囊(市售。批号分别为:070901、070902、070903);甲醇为色谱纯;其它试剂为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱:Hypersil ODS C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇-0.5%醋酸(70�30);检测波长:325nm;流速:1.0ml/min;柱温:30.0±1℃;保留时间:约为10min;进样量:20;理论塔板数按绿原酸计应不低于3000。在上述条件下,绿原酸与其他组分达到基线分离,阴性无干扰。结果见图1。
2.2对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量,置棕色量瓶中,加50%甲醇制成每1ml含5μg的溶液,即得。
2.3供试品溶液的制备取本品装量差异项下的本品内容物,研细,混匀,精密称定约0.2g,置50ml棕色量瓶中,加入50%甲醇约40ml,超声处理20分钟,取出,放冷,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,静置,用0.45μm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得。
2.4空白试验取处方项下除金银花和茵陈以外的其余药材,按供试品溶液的制备方法制备阴性溶液,按上述色谱条件分析。与对照品的相应位置上,无明显其他峰出现。结果表明阴性样品对该试验无干扰。
2.5线性范围考察配制25.8μg/ml的绿原酸对照品溶液。分别精密吸取1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0 ml转移至10ml棕色量瓶中,用50%甲醇定容。分别精密吸取上述溶液各20μl进样。以取绿原酸对照品量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为y=1.685×106X-5844.107,r=0.9996。结果表明,绿原酸对照品在0.0516～0.4128μg与峰面积呈良好的线性关系。
2.6精密度试验取同一对照品溶液重复进样6次,测定,绿原酸平均峰面积为353646,RSD为0.60%(n =6),结果表明精密度良好。
2.7重现性试验按拟定的方法取同一批供试品(批号为070901)进行6次平行的供试品溶液溶液制备与测定,结果绿原酸平均含量为0.6147 mg/粒,RSD=0.44%(n=6)。
2.8稳定性试验取同一批供试品(批号为070901)适量,按上述方法制成供试品溶液,放置0、1、3、6、10、20小时,分别进行测定,结果平均峰面积为408410, RSD=0.18%,表明供试品溶液在20小时内稳定。
2.9加样回收率试验精密称取已知含量的同一批样品粉末6份各约0.2g,分别加入绿原酸对照品溶液(浓度为0.105mg/ml)1.0、2.0、4.0ml,按供试品溶液制备方法制备供试液。照上述色谱条件下进行测定,计算回收率,结果见表1。
2.10样品测定取三批样品,按供试品溶液制备方法制备供试液,依上述色谱条件测定样品中绿原酸的含量,测定结果见表2。
3讨论
本实验曾考察了多种流动相甲醇-水(15:85)、乙腈-0.4%磷酸(13:87)、3%甲酸-甲醇(79:21)和甲醇-0.5醋酸(70:30)等的实验效果,结果发现甲醇-0.5醋酸(70:30)能够达到分离效果,且出峰时间适中,峰型较好,故采用此流动相进行分析。本实验对超声提取时间进行比较,加入50%甲醇分别超声提取10、20、30、40min,结果显示绿原酸在10分钟以下提取不完全,10、20min提取样品的含量相同,为达到充分提取,故超声确定为20min。此方法简便快捷,重现性和稳定性均较好,操作简便,可用于痔炎消胶囊的质量控制。
参考文献
[1]国家食品药品监管局药品标准[S].YBZ-0299,2006.
[2]孙莲,张丽静,孟磊,等.RP-HPLC法测定桑叶中绿原酸的含量[J].中草药,2003,34(1):78-79.
[3]寿文虹,吴韶铭,施芬.高效液相色谱法测定抗感胶囊中绿原酸的含量[J].中国现代应用药学杂志,2005,22(1):71-72.
