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【摘要】 目的 探讨快速检测D-二聚体(DD)在肺栓塞诊断中的临床意义。方法 使用全自动免疫分析系统VIDAS DD测定法对可疑静脉血栓患者血浆中纤维蛋白降解产物D-二聚体进行检测，并对这些可疑肺栓塞患者进行1年随访，了解是否有肺栓塞症状。结果 共有104例患者参加检测，32例患者的D-二聚体检测值494 ng/ml,其中16例患者经肺通气、灌注扫描V/Q证实为肺栓塞，VIDAS DD法的敏感性为100％，阴性预期值为100％。结论 VIDAS DD法可作为诊断栓塞的首选筛选方法。
【关键词】肺栓塞；D-二聚体；酶联免疫吸附测定
A rapid quantitative ELISA for measuring D-dimer to exclude pulmonary embolism
MEI Ling.Department of Laboratory，the First People’s Hospital of Hebei458030,China
【Abstract】 Objective To study new assay fulfill the repuive ments for diagnostic exclusinm in patients supected of pulmonary embolism.Methods Plasma D-dimer of dini cally suspected Pul monary embolism patients were measured by VIDAS D-Dimer,one year after their in dusion all patients were con firmed to know if they had any new symptoms suggestive of deep vein thrombosis or pulmonary embolism.Results Among 104 suspected pulmonary embolism patients,32 patients with DD levels494 ng/ml,16 patients were one of them with DD levels>494 ng/ml,the test showed a sensitivity of 100%,a negative predictive vale of 100%.Conclusion VIDAS D-dimer is well sited asdiagnostic tool for the exdusion Pulmonary embolism.
【Key words】
Pulmonary embolism;D-Dimer;Enzyme-linked-im munosorbent assay
随着生活水平的提高和生活方式的改变，我国的肺栓塞发病率也在逐年上升，其病死率仅次于心肌梗塞和肿瘤，早期诊断肺栓塞是临床医生极为关注的问题[1]。
D-二聚体(D-dimer,DD)是已交联的纤维蛋白的降解产物。它的生成和增高反映了凝血和纤溶系统的激活，其血浆中的水平代表体内凝血酶的活性及纤维是蛋白的生成情况，可作为体内血栓形成的指标之一，在肺栓塞患者血浆中D-二聚体水平明显升高，采用D-二聚体检测作为肺栓塞的第一步筛选实验已得到公认[2]，D二聚体的检测方法有多种，其中全自动免疫分析系统VIDAS DD法快速、灵敏度高，是一种在VIDAS免疫分析仪上进行定量全自动酶联免疫吸附实验，我们探讨用VIDAS DD法检测D-二聚体排除肺栓塞的临床应用价值。
1 材料和方法
1．1 材料
1．1．1 对象 选择2004年至2006年12月可疑肺栓塞患者104例，常见症状如呼吸困难、胸痛、焦虑、咳嗽、咯血等。
1．1．2 仪器 VIDAS全自动免疫分析系统，为法国生物梅里埃公司产品。
1．1．3 试剂 为配套试剂，直接使用，由一个上面包被了鼠抗人D-二聚体单克隆抗体的固相移液装置和一个包含有其他所需试剂的试剂条，碱性磷酸酶标记的鼠抗人D-二聚体组成。单克隆抗体、洗涤液、样本稀释液和底物组成，为法国生物梅里埃公司产品。
1．2 方法
1．2．1 原理 采用酶联免疫荧光标记原理，在锥形的固相吸附管内包被抗D-二聚体特异抗体，当血浆中的D-二聚体与包被相应的特异抗体结合，同时标记荧光，D-二聚体与荧光测定值呈正相关。所有步骤由分析仪完成，35 min后即得出结果。当试验完成时，测定的荧光强度值通过计算机内贮存的标准曲线自动计算出待测样本中D-二聚体的含量。参考范围为68～494 ng/ml。
1．2．2 取静脉血2 ml加入装有0．11 mol/L枸橼酸钠(1/10体积)作为抗凝剂的试管中，混匀。将标本离心，3 000 r/min,15 min。取血浆200 ml,加入到试剂条的标本孔中，将试剂反应条放入VIDAS全自动免疫检测系统中。
1．2．3 当待测标本浓度>1 000 ng/ml时，需稀释后作进一步检测，其结果等于仪器测定值乘以稀释系数。
1．2．4 质量控制 每隔14 d用试剂内带有的标准品作质量控制，其预期值必须在瓶上所写范围内。
1．2．5 对可疑肺栓塞患者通过进行3个月的随访，了解他们是否有任何关于肺栓塞和深部静脉血栓形成的临床表现。由于肺通气-灌注扫描显像为无创性、简便、安全的方法，但仅可发现肺段以上的病变，是目前已被公认诊断肺栓塞的标准筛选检查[1]。在本实验中，首先通过VIDAS DD法阳性结果排除，然后通过临床表现和血气指标等排除，最后对高度可疑的患者通过肺通气-灌注扫描(V/Q)加以证实。
2 结果
2．1 在本实验中，共有104例患者参加检测，其中32例患者(30．8％)的D-二聚体检测值494 ng/ml，通过临床表现和血气等指标排除42例，对30例高度可疑的患者通过肺通气-灌注扫描证实为有16例，患者为肺栓塞，其阳性预期值为22．2％，VIDAS DD法的敏感性为100％(见表1)。
2．2 16例肺栓塞患者年龄分布在20～80岁各个年龄段，40～50岁年龄段为发病高峰。
2．3 干扰性实验 高浓度血红素(0．15 mmol/L)，三酰甘油(3 mmol/L)，胆红素(380 mol/L),类风湿因子(153 U/ml)和肝素(30 U/ml)抗凝剂，没有发现对测定结果有影响，国外文献已证实[4]。
3 讨论
D-二聚体是纤溶酶降解交联的纤维蛋白的产物，对继发性纤溶的诊断具有特异性，在血栓形成中的灵敏度达90％～95％，阴性预测值达95％以上，DD检测阳性可基本排除血栓形成。
对D-二聚体的检测，常见方法有胶乳凝集法和快速酶联免疫吸附实验。尽管目前使用的胶乳凝集法具有快速经济等特点，但敏感性和阴性预期值不尽人意，不能排除所有肺栓塞患者的诊断[2]，快速酶联免疫吸附实验具有快速定量、敏感和适合个体检测等特点，其中VIDAS DD法是目前国外临床研究得最多的一种检测方法[3]。对于评价排除诊断肺栓塞，有两个指标非常重要：敏感性和阴性预期值。本次实验中，VIDAS DD法对肺栓塞的阴性预期值为100％，同国外报道些方法的敏感性和阴性预期值基本一致，与经典ELISA法有很好的一致性[4]。此外，在本次实验中，高浓度的血红素、三酰甘油、胆红素、类风湿因子和肝素对测定结果无明显影响，证实VIDAS DD法抗干扰性强。因此，它最有希望成为诊断肺栓塞首选筛选实验[4]。
以本次实验调查结果证实呼吸系统多种疾病可使血浆中D-二聚体水平升高，尤其是慢性阻塞性肺病，呼吸衰竭和两种以上的呼吸系统合并症。因此，D-二聚体的检测及其水平升高对肺栓塞是非特异性的。此外，影响D-二聚体水平的重要因素，还有年龄。随着年龄的升高，D-二聚体水平升高的特异性却下降，所以D-二聚体检测的临床价值在于其阴性结果。
由于过去一直认为肺栓塞较少见，其临床症状不明显，与冠心病、心胶痛、肺癌、支气管炎和胸膜炎极为相似，容易造成误诊和漏诊。因此，我们应对该病引起足够重视，只要治疗及时，大多数患者能完全康复，快速诊断显得尤为重要。诊断肺栓塞的金标准是肺血管造影，但具有侵袭性，技术性强，肺通气-灌注扫描显象已被公认为是诊断肺栓塞的标准筛选检查，但敏感性较差，许多患者得不到明确的肺扫描结果，不适于把它作为首选筛选实验，较适于对高度多疑的患者做确证实验[8]。使用VIDAS DD法检测血浆中的D-二聚体作为首选筛选实验，其意义在于阴性结果可100％排除肺栓塞，阳性结果可包括肺栓塞在内的各种疾病，VIDAS DD法具有全自动适合门诊急诊检测，稳定、定量、快速等特点，适于作为排除诊断肺栓塞首先筛选实验。
参考文献
1 罗慰慈.现代呼吸病学.人民军医生版社，1997：653-667.
2 郭富梅，王鸿利.快速D-二聚体在诊断静脉血栓形成中的应用进展.中国实验诊断学，2000，4:41-43.
3 Pitted JL,De Moerloose P,ReberG，et al.VIDAS D-dimer:fast quantitative ELISA for measuring D-dimer in plasma.Thromb Haemost，1996,42:410-415.
4 Le Blanc，He AF,Siguret V,et al.Duling out acute deep vein thrombosis by ELISA Plasma D-Dimer assay versus ultrasound in inpatient more than to years old.Angiology,1999，50:873-882.
5 De Moerloose P,Des marais S，Bounameaux H,et al.Contribution of a new,rapid,individual and quantitative automated D-Dimer ELISA to exclude pulmonary embolism.Thromb Haemost，1996,75:11-13.
6 Raskob GE，Hull RD.Diagnosis of pulmonary embolism.Curr Opin Hematol,1999，6:280-284.
