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摘要：目的：建立苦荞中总黄酮的含量测定方法。方法：采用3种紫外分光光度法法测定总黄酮含量，并对芦丁法进行了方法学评价。结果：芦丁法更适于苦荞中总黄酮的含量测定，总黄酮含量为1.66-2.01％，回收率为89.8％(RSD＝5.43％)(n＝6)。结论：该方法简便、快速、准确，可用于苦荞的质量控制。
关键词：苦荞；总黄酮；分光光度法
中图分类号：R285.4 文献标识码：A
文章编号：1007-2349(2011)01-0057-02
苦荞又称鞑靼荞麦(Tartary buckwheat)，为双子叶蓼科荞麦属植物，在我国西南、北方种植广泛，资源丰富。苦荞含有黄酮类化合物、多种氨基酸、多糖、不饱和脂肪酸等许多化学成分。药理和化学成分的研究表明，苦荞具有较明显的降血糖、降血脂、增强免疫功能等作用，其有效成分主要是芦丁、槲皮素等黄酮类化合物。民间亦以食用苦荞防治糖尿病、高血压、高血脂等病。
目前，荞麦黄酮的测定方法有分光光度法、高效液相色谱法、毛细管电泳法。本实验采用芦丁法直接测定黄酮含量，并与另外两种显色后的分光光度法进行比较，期望为苦荞中总黄酮含量的测定提供参考。
1、材料、试剂与仪器
1.1材料与试剂材料：苦荞样品分别取自会泽火红、云南大山包、罗平牛街。芦丁对照品(批号：09072231，上海同田生物技术有限公司)，试剂均为分析纯。
1.2仪器紫外可见分光光度计(北京普析，TU1810)，超声提取器(上海仪器制造厂，SK3200H)，电子天平(德国赛多利斯CP-224S)。
2、方法与结果
2.1对照品和样品溶液制备
2.1.1对照品溶液的配制精密称取芦丁对照品9.5mg置于25mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得芦丁对照品溶液浓度为0.38mg/mL。
2.1.2供试品溶液的配制分别取苦荞粉末(过60目筛)约100mg，精密称定，置于25mL容量瓶中，加入60％乙醇2mL，在常温下超声(59KHz)提取20min，用乙醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
2.2总黄酮含量测定
2.2.1标准曲线的制定
2.2.1芦丁法精密移取2.1.1项下的对照品溶液0.5、0.8、1.0、1.2、1.5ml于25mL容量瓶中，用60％乙醇溶液稀释并定容至刻度后，在360mm波长处进行测定，绘制标准曲线，得到回归方程为：Y＝0.028X＋0.0172(r＝0.9998)。
2.2.1.2氯化铝法精密移取2.1.1项下的对照品溶液0.6、0.7、0.8、0.9、1.0mL于25mL容量瓶中，加入60％乙醇溶液5mL，5％氯化铝溶液3mL，100mg/mL乙酸钠溶液5mL，再用60％乙醇溶液定容至刻度后，放置40min，在420mm波长处进行比色测定，绘制标准曲线，得到回归方程为：Y＝0.0365X＋0.0278(r＝0.9994)。
2.2.1.3硝酸铝法精密移取2.1.1项下的对照品溶液1.0，1.2，1.5，2.0mL。于25mL容量瓶中，加入60％乙醇溶液5mL，5％亚硝酸钠溶液0.7mL，5min后，再加入10％硝酸铝溶液0.7mL，6min后，加入40％氢氧化钠溶液5mL，60％乙醇溶液定容至刻度后，放置10min，在510nm波长处进行比色测定，绘制标准曲线，得到回归方程为：Y＝0.0152X-0.016(r＝0.9991)。
2.2.1.4样品含量测定分别准确移取供试品溶液5mL于25mL容量瓶中，分别用以上3种方法进行测定，试剂空白为参比。测定结果见表1。
2.3芦丁法方法学研究
2.3.1精密度试验精密吸取2.1.1项下的芦丁对照品溶液1.0mL于25mL容量瓶中，用60％乙醇溶液稀释并定容至刻度后，在360nm波长处进行测定，连续测定5次，记录吸光度，计算相对标准偏差(RSD)，结果RSD为0.26％。
2.3.2稳定性试验精密吸取同一供试品溶液5.0mL于25mL容量瓶中，用60％乙醇溶液稀释并定容至刻度后，于0、2、4、6、8h分别用360nm波长进行测定，记录吸光度，计算相对标准偏差(RSD)，结果RSD为2.68％。
2.3.3重复性试验取同一批样品6份，精密称定，按
2.1.2项下方法制备供试品溶液，分别准确移取5mL于25mL容量瓶中，用60％乙醇溶液稀释并定容至刻度后，在360nm波长处进行测定，记录吸光度，计算相对标准偏差(RSD)，结果RSD为1.74％。
2.3.4回收率试验
取已知含量的苦荞粉末约100mg，精密称定，共6份，加入芦丁对照品1.6mg按2.1.2项下方法制备供试品溶液，分别准确移取2mL于25mL容量瓶中，用60％乙醇溶液稀释并定容至刻度后，在360nm波长处进行测定，记录吸光度，计算加样回收率。结果平均加样回收率为89.8％(RSD＝5.43％)。
3、讨 论
3.1荞麦黄酮的提取方法目前，荞麦黄酮的提取方法有热水提取、有机溶剂提取、碱性水或碱性稀醇提取及酶法。常规的提取方法普遍存在耗时、耗能、提取效率低等问题。有研究表明，利用超声波可以加速有效成分进入溶剂，从而提高提取率，缩短提取时间，节约溶剂，并且免去了高温对提取成分的影响，故本实验采用超声法提取。
3.2.3种分光光度法测定结果的比较由表1数据表明，3种分光光度法中的测定结果芦丁法较高，并且该方法不需显色，操作简便，干扰因素少，结果较准确、可靠。本实验对芦丁法进行了验证，实验结果表明，该方法稳定性与重复性、精密度均较好，可用于苦养中总黄酮的测定。
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