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【摘要】 目的 提高心脉通片的质量标准。方法 采用薄层色谱法鉴别决明子和槐米,用HPLC法鉴定葛根素并测定葛根素的含量。结果 心脉通片采用薄层色谱法鉴别决明子、槐米可行。HPLC法测定葛根素含量的精密度、准确性、专属性均符合要求,各阴性对照无干扰,结论 改良后的检测方法基本可行。
【关键词】 心脉通片;决明子;槐米;葛根素;质量标准
心脉通片是由当归、决明子、钩藤、牛膝、丹参、槐花、夏枯草、三七等十味药组成,为薄膜衣片或糖衣片,除去包衣后呈棕黄色至棕褐色;味微苦、涩。具有活血化瘀,通脉养心,降压降脂等功效(参考说明书)。主要用于治疗高血压、高脂血症等。为了更好的控制心脉通片的质量,在原心脉通片的质量标准基础上[1],笔者增加决明子和槐花的薄层色谱鉴别,葛根素为粉葛的主要成分,采用HPLC鉴定葛根素的含量,报道如下。
1 仪器与试剂
高效液相色谱仪(Agilent 1100系列);色谱柱(Dikma Diamonsil C185μm250 mm×4.6 mm8034683);决明子药材(中国药品生物制品检定所提供,批号1063-9801);槐花药材(中国药品生物制品检定所提供,批号1063-9801);芦丁对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号100080-200306)正己烷。乙酸乙酯。甲酸为色谱纯,心脉通片由广东邦民制药厂提供(批号060928、060929、060930)
2 实验与结果
2.1 薄层色谱鉴别
2.1.1 决明子的鉴别 取心脉通片20片,除去包衣,研细,加甲醇20 ml,超声(32 kHz,200W)处理30分钟,滤过,滤液浓缩至约1 ml,作为供试品溶液;对照药材溶液制备:取决明子药材1.0 g,加甲醇20 ml,同供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液;决明子阴性对照溶液制备:按照制备处方,取缺少决明子的阴性样品6 g,按供试品溶液的制备方法制成决明子阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验,吸取决明子组上述溶液各10 μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上,以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(10∶1∶1)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。见图1。
图1 决明子薄层色谱鉴别图
1、决明子阴性对照样品;2、决明子对照药材;3~5、供试品
作者单位:510120广州中医药大学第二附属医院、广东省中医院药剂科
2.1.2 槐花的鉴别 取本品6片,除去包衣,研细,加甲醇20 ml,超声(32 KHz,200W)处理15分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2 ml使溶解,作为供试品溶液。对照药材溶液制备:取槐花药材0.5 g,加甲醇20 ml,同供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液;对照品溶液制备:取芦丁对照品各0.001 g,加甲醇1 ml溶解(制成每1 ml含1 mg的溶液),作为对照品溶液。槐花阴性对照溶液制备:取槐花阴性样品1.8 g,按供试品溶液的制备方法制成槐花阴性对照溶液。照薄层色谱法(2)试验,吸取槐花组上述三种溶液各1 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯-甲酸-水(8�∶�1�∶�1)为展开剂。展开,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,热风吹干,置紫外光灯(365 nm)下检视。在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。见图2。
图2 槐花薄层色谱鉴别图
1~3、供试品;4、槐花对照药材;5、 对照品;6、 阴性对照样品
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件 照高效液相色谱法(1)测定:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(25∶75)为流动相;检测波长为250 nm。柱温: 40℃,理论板数按葛根素峰计算应不低于3000。
2.2.2 对照品溶液的制备 取葛根素对照品(批号:110752-200511)0.01029 g,置100 ml量瓶中,加30%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取2 ml, 置10 ml量瓶中,加30%乙醇稀释至刻度,摇匀, 即得(即:每1 ml含0.02058 mg的溶液)。
2.2.3 供试品溶液的制备 取本品(批号:060930)20片,除去包衣,精密称定,研细,取约0.5 g,精密称定,置25 ml量瓶中,加30%乙醇20 ml,超声(32KHz,200W)处理10分钟,加30%乙醇稀释至刻度,离心(2000转/min)15 min,取上清液滤过,精密量取续滤液10 ml,置氧化铝层析柱(中性氧化铝4g,直径2.5 cm,干法装柱)上,用30%乙醇100 ml洗脱,收集洗脱液,并浓缩至约3 ml,置10 ml量瓶中,加30%乙醇至刻度,过0.45 μm微孔滤膜,取续滤液,即得。
2.2.4 专属性实验 分别吸取葛根素对照品溶液、供试品溶液、粉葛阴性对照溶液各20 μl,注入液相色谱仪,按含量测定方法测定,结果见图3,实验结果表明粉葛阴性对照样品无干扰。
图3-1 葛根素对照品液相色谱图(tR=20.782 min,n=3464)
图3-2 供试品液相色谱图
图3-3 粉葛阴性对照液相色谱图
2.2.5 线性关系考察 取葛根素对照品(中检所提供,批号:110752-200511)0.01029 g,置100 ml量瓶中,加30%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀, 即得每毫升含0.1029 mg的对照品溶液。精密吸取1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml分别置于10 ml容量瓶中,加30%乙醇定容至刻度,摇匀 配置成0.01029 mg/ml、0.02058 mg/ml、0.03087 mg/ml、0.04116 mg/ml、0.05145 mg/ml的系列对照品溶液,吸取对照品溶液和各浓度系列对照品溶液20ul,注入高效液相色谱仪,测定峰面积,以峰面积为纵坐标,对照品浓度为横坐标,绘制标准曲线,回归方程为:Y=605266.5X+12800.2(r=0.9997),表明葛根素对照品溶液浓度在0.01029 mg/ml~0.1029 mg/ml之间对峰面积有良好的线性关系。
2.2.6 重复性实验 同2.2.4方法,用同一批样品检测6次,重复性RSD(N=6)为2.5%。
2.2.7 回收率实验 葛根素对照品溶液制备:取葛根素对照品(中检所提供,批号:110752-200511)0.01029 g,置100 ml量瓶中,加30%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀, 即得每毫升含0.1029 mg的对照品溶液。按照“2.2.3项”制备各个批号的供试品溶液。精密称取约0.25 g三个批号的样品各三份,分别加入2 ml对照品溶液按照2.2.4方法进行测定。回收率测定结果见表1。
2.2.8 样品测定按照2.2.4方法进行测定,三批样品测定见表2。
表1
回收率测定结果
序号取样量(g)供试品含量�(mg)对照品加入量�(mg)测得值�(mg/g)回收率%平均回收率%RSD%(N=3)
10.24780.22850.20580.4291097.497.12.2
20.25130.23170.20580.4354599.0
30.25150.23190.20580.4271394.8
表2
三批样品测定结果
批号取样量(g)测得值(mg/片)平均值(mg/片)厂家自检结果(mg/片)与厂家间相对偏差%
0609280.50860.25060.250.273.8
0.50860.2552
0609290.50820.28890.290.2311
0.50970.2952
0609300.50780.28950.270.261.9
0.50820.2877
3 讨论
现行标准(1)仅收载3项化学反应鉴别。1997年该品种被列为中药保护品种。(98)卫典业字第438号文同意增加薄膜衣规格。随着心脉通片在临床应用的逐渐广泛,有必要对其内在质量进行控制。单单化学反应的鉴别已经不能满足质量控制的需要,故要对现行标准进行提高。
明确处方中所用的葛根为粉葛。删去原标准的化学鉴别反应。增订了决明子、槐花的薄层鉴别及葛根素的HPLC鉴别(高效液相色谱法)。经验证,该标准各阴性对照无干扰,检测方法基本可行。
采用改良后的方法,鉴定心脉通片中的确定成份,进行了葛根素的含量测定,使心脉通片的质量控制有了量化的标准。
060929批供试品含量测定验证结果与厂家自检结果差别较大,可能与样品的研细和过柱洗脱情况有关。
参 考 文 献
[1] 《卫生部药品标准》中药成方制剂第六册(标准号为WS3-B-1109-92)
[2] 中国药典2005年版一部附录Ⅵ D.
