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【摘要】 目的探讨孟鲁司特通过影响SIL-2R和TNF-α的表达从而引发哮喘患者体内巨噬细胞和T细胞的抗炎症反应的机制。为临床选择用药提供指导。 方法 对48例轻中度稳定期哮喘患者进行8周孟鲁司特治疗试验，同时选取48列正常成人作为对照。试验前后均测定其1 秒量(FEV1)值。同时测定血清中SIL-2R、TNF-α及嗜酸粒细胞阳离子蛋白水平。结果 药物治疗后，嗜酸粒细胞阳离子蛋白量明显降低(32．1±11．8 VS 20．2±11．2,P[1]。孟鲁司特(Montelukast，商品名：顺尔宁)作为新一代特异的LTD4受体拮抗剂，能在早期拮抗变应源并能有效预防和抑制白三烯所导致的血管通透性增加、气道嗜酸性粒细胞(EOS)浸润及支气管痉挛,减少气道因变应原刺激引起的细胞和非细胞性炎症物质,抑制变应原激发的气道高反应[2]。
在哮喘炎症反应发生时，T淋巴细胞、巨噬细胞、肥大细胞、肺泡平滑肌细胞、上皮细胞和嗜酸粒细胞在气管内形成细胞因子池共同参与调节炎症细胞的迁移和激活。早期致炎细胞因子诸如TNF-α和SIL-2R是肺内炎症应答反应非常重要的调节因子[3]。本实验旨在阐述孟鲁司特通过调节TNF-α和SIL-2R表达从而激活哮喘患者体内T细胞和巨噬细胞参与炎症应答反应的机制，为探讨该类药物新的抗炎机制提供试验依据。
1 材料与方法
1．1 对象 选择2005年10月至2006年12月期间于岳阳市二医院呼吸科门诊就诊的哮喘患者48例,进行治疗试验。纳入标准:①年龄18~65岁,男女不限;②符合中华医学会呼吸病学会1997年制订支气管哮喘防治指南中的诊断及病情评价标准[4],病史≥1年；③无长期吸烟史。排除标准:①1个月内使用过糖皮质激素及免疫调节剂；③患支气管扩张症、慢性胸肺疾患、高血压、心脏病、糖尿病等并发症或近1月内有上呼吸道感染或泌尿系感染者。对照组志愿者48例,男26例,女22例;年龄22~38岁;均无吸烟史,无哮喘及其他呼吸系统疾病,无过敏性鼻炎、荨麻疹等过敏性疾病史,无类风湿性疾病史,近1周内未使用过任何药物。
1．2 治疗方案 本试验共包括3个时期，所有入选病例填写基本情况调查表并进行常规实验室和肺功能检查，第一时期患者给予β2 R激动剂100 mg每次，4次/d。随后进入为期4 周治疗:孟鲁司特每次10 mg,每晚睡前0．5 h服用。
1．3 观察项目
1．3．1 常规检测 各组在同一时间段观察，基本实验检查包括血、尿常规、肝肾功能以及肺功能和过敏原皮试检查(皮试液由丹麦AL K公司提供)。收集病例血清血样本于无抗凝剂管，血块形成后离心5 min(3 500 rpm)，离心结束后-80℃冻存，冻存样本分析彻底混匀并重离心，避免样本冻融。
1．3．2 生化分析 血清sIL-2R 和TNF-α水平通过美国DPC(Diagnostic Products Corporation)公司全自动化学发光免疫分析标仪-IM-MULITE 测定。Unicap-100(Pharmacia & Upjohn Diagnostics AB,Uppsala,Sweden)系统荧光免疫分析检测仪血清嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)水平。
1．4 统计学方法 配对符号秩检验法(Wilcoxon matched-pairs signed-ranks test)用来作各观察组相关样本治疗前后比较。哮喘患者和正常对照间的比较使用曼-惠特尼U检验法(Mann-Whitney U-test)确定。相关分析使用Spearman 相关分析法。所有统计分析均用SPSS 11．5软件进行。
2 结果
图1 孟鲁司特治疗前哮喘患者体内TNF-α和sIL-2R相互关系图
经孟鲁司特治疗1个月后，发现ECP平均值显著下降(32．1±11．8 VS 20．2±11．2,P[5]，而且介导肺内炎症细胞如中性粒细胞和嗜酸性粒细胞聚集，生成多种炎症介质[6]。在体外，TNF-α 可以使具有IL-2依赖性的CD8细胞表达更多的IL-2R，提示了TNF-α 在T细胞的活化中可能具有重要作用[7,8]。在我们的研究中，哮喘患者治疗前的TNF-α 与IL-2R在血清中的水平都显著高于对照组，而且TNF-α 与sIL-2R具有显著相关性(r=0．665)，因此可以认为TNF-α 通过IL-2R的表达参与了T细胞活化。
在哮喘所致的炎症中涉及到许多内源性的调控因子。在这些调控因子中，cys-LTs在炎症过程中扮演着重要的角色。孟鲁司特可以竞争性和选择性的与cys-LT1受体结合，由此阻断cys-LT1所介导的促炎性反应，并且保护机体不受哮喘中过敏原诱导的早发和迟发型呼吸道反应[9]。人肺泡巨噬细胞可能通过其表面的LTD4特异受体，调节炎性调控因子的表达而调控哮喘所致炎症。作为噬酸性粒细胞趋化因子，LTD4是促使人肺泡巨噬细胞产生TNF-α的主要效应分子。我们研究的结果显示，经过1个月的孟鲁司特治疗，血清中TNF-α的水平出现下降，表明抑制cys-LTs可以直接影响细胞因子的水平[10]。
cys-LTs受体并不止在平滑肌细胞表面表达，同时也在外周血淋巴细胞表面高表达，这表明cys-LTs可以对T淋巴细胞的功能产生影响[11]。Th2细胞因子而非Th1细胞因子水平的上调是哮喘的标志，而这些调控因子的产生在一定程度上依赖于cys-LTs。目前对于cys-LTs在哮喘中对Th1细胞因子的产生所起的调节作用还知之甚少。过敏原所引发的Th1淋巴细胞释放IL-2已经被证明在大鼠体内有增强呼吸道过敏反应的作用，但是这种由于IL-2而引起的呼吸道反应并不会导致cys-LT水平的上调。另一方面，孟鲁司特给药可以抑制用IL-2预处理后的大鼠产生IL-2诱导的迟发性呼吸道过敏反应[12]。我们的研究表明，相对于对照组，孟鲁司特治疗组血清sIL-2R的水平在给药初期较高(P ［2］ Kanaoka Y,and Boyce JA.Cysteinyl leukotrienes and their receptors:Cellular distribution and function in immune and inflammatory responses.J Immunol 173:1503-1510,2004.
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