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摘 要：目的:建立益气养血颗粒的质量控制方法。方法：用薄层色谱法对该药的黄芪、陈皮、淫羊藿进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定陈皮。结果:薄层色谱鉴别斑点清晰，阴性对照无干扰，橙皮苷在20.08～602.4ng范围内线性关系良好（r=0.9999）,平均回收率为99.04%，RSD=1.76%(n=6)。结论：该法操作简便，方法稳定，专属性强，可作为该制剂的质量控制方法。
关键词：益气养血颗粒；薄层色谱法；HPLC；橙皮苷
中图分类号：R284.1文献标识码：A文章编号：1673-2197（2008）09-0032-03
益气养血颗粒是由人参、黄芪、陈皮、淫羊藿等中草药组成，具有益气养血的功效，用于气血不足所致的气短心悸，面色不华，体虚乏力。为控制该药品的质量，本研究对该药中的黄芪、陈皮、淫羊藿3种药材进行了薄层鉴别，并采用 HPLC法测定陈皮中橙皮苷的含量。
1 仪器与试药
1.1 仪器
安捷伦Agilent-1200高效液相色谱仪,ChemStation 色谱工作站，日本AND GR-202电子分析天平。
1.2 试药
益气养血颗粒及各被检药材的阴性制剂由广西嘉进药业有限公司提供；黄芪甲苷、淫羊藿苷、橙皮苷对照品购于中国药品生物制品检定所；硅胶G、GF254为化学纯(青岛海洋化工厂)；其它化学试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 薄层鉴别
2.1.1 黄芪鉴别
取本品10g，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用氨试液振摇洗涤3次，每次20mL，取正丁醇液蒸干，残渣加稀乙醇1mL使溶解，加在中性氧化铝柱（100~120目，2g，内径1.5cm）上，用40%乙醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水1mL使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，柱高12cm）上，依次用水20mL、40%乙醇30mL洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺黄芪的阴性样品同法制成阴性对照溶液再取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述3种对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（13∶5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品则不显示。见图 1。
2.1.2 陈皮鉴别
取本品细粉10g，加水20mL使溶解，置分液漏斗中，加环己烷振摇洗涤3次，每次20mL，水液用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺陈皮的阴性样品同法制成阴性对照溶液，另取橙皮苷对照品加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酯乙酯-甲醇-水-吡啶（100∶17∶13∶5）为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶1）的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性样品则不显示。见图 2。
2.1.3 淫羊藿鉴别
称取本品细粉10g，加水30mL使熔解，水液用乙醚振摇提取3次，每次30mL，弃去乙醚液，水液用乙酸乙酯振摇提取3次，每次30mL，蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品溶液。另取缺淫羊藿的阴性样品同法制成阴性对照溶液，另取淫羊藿苷对照品加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-丁酮-水（10∶1∶1∶1）液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝乙醇溶液，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性样品则不显示。见图 3。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件分析
Agilent SB-C18柱(250 mm×4．6 mm，5μm)；乙腈－0.1%磷酸 (20：80) 为流动相；流速1.0mL/min；检测波长283nm。
2.2.2 对照品溶液的制备
精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含20μg的溶液，即得。
2.2.3 供试品溶液的制备
取本品粉末约1g置锥形瓶中，精密称定，精密加甲醇25mL，称定重量，回流1h，放冷，用甲醇补足减失的重量，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.3.4 测定法
分别精密吸取对照品和供试品溶液各 10μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积积分值。按外标法以峰面积计算，即得。
2.3.5 专属性考察
取缺陈皮样品按供试品溶液制备方法制备， 进样，测定。图谱表明在该色谱条件下，阴性对照无干扰，结果见图4。
2.3.6 标准曲线的制备
精密称分别精密吸取浓度为20.08μg/mL的橙皮苷对照品溶液按正文拟订的色谱条件分别进样分别吸取上述对照品溶液1μL、5μL、10μL、20μL、30μL，注入色谱仪，测定，以峰面积积分值为纵坐标（Y），橙皮苷对照品进样量（ng）为横坐标（X）绘制标准曲线，得回归方程为：
Y=2541.5X +216.2 （r=0.9999）
结果表明：橙皮苷在20.08～602.4ng范围内，进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.3.7 精密度实验
取同一份供试品溶液，按上述色谱条件，连续进样6次，测定峰面积积分值，RSD为0.58%。
2.3.8 稳定性实验
取同一份样品溶液，放置0，2，4，6，8，10h， 按上述色谱条件，分别测定峰面积积分值，RSD为0.77％。
2.3.9 重复性实验
精密称取同一批的样品 6份，按上述方法试验，结果平均含量是0. 578mg/g，RSD=1.42％。
2.3.10 加样回收率实验
精密量取已测定含量的益气养血颗粒(0. 578mg/g)约0.5 g，平行取样6份，精密加入浓度为0.284mg/mL的橙皮苷对照品溶液各1mL，精密加入甲醇24mL，按正文拟订的方法制备供试品溶液、测定，计算回收率，详见表1。
2.3.11 样品含量测定
按拟订的含量测定方法，测定了本品3批样品中的橙皮苷含量，结果见表2。
3 讨论
（1）本文考察了流动相乙腈0.1%磷酸［1］、甲醇-水［2］等条件，
发现乙腈0.1%磷酸所得的峰形，分离度较好。
（2）本文对不同的超声时间、不同的回流时间进行了考察，发现回流1h提取效率最高。
参考文献：
［1］ 杨红侠，宋逍等. HPLC法测定消石胶囊中橙皮苷的含量［J］.现代中医药，2006，26（6）：53-54.
［2］ 杨国忠，陈玲.HPLC法测定十昧活血丸中橙皮苷的含量［J］.中国药师，2006，9（11）：1030-1031.
（责任编辑：王尚勇）
Studies on the Quality Standard of Yiqiyangxue Granule
Chen Xuesong，Huang Heng
(Wuzhou institute for food and drug control,Wuzhou 543002,China)
Abstract：
Objective:to establish the method for quality control of Yiqiyangxue Granule.Methods:Radix astragali,Pericarpium Citri Reticulatae,epimedium were identified by TLC．The content of epimedium was determined by HPLC.Results: the spots of TLC were distinct. The negative sample had no interference.The linear regression for hesperidin Was obtained over the range of20~1000ng. The average recovery was 99.04％，RSD=1.76％（n=6）.Conclusion: the established method is simple, feasible and repeatable, and can be used for the quality supervisory ofYiqiyangxue Granule.
Key words：
Yiqiyangxue Granule；TLC；HPLC；Icariine
